【摘要】：目的探討下調(diào)垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因PTTG1的表達(dá)對(duì)人去勢(shì)抵抗前列腺癌LNCaP-AI細(xì)胞衰老機(jī)制的影響。方法采用體外誘導(dǎo)的人去勢(shì)抵抗前列腺癌LNCaP-AI細(xì)胞模型,LNCaP-AI細(xì)胞轉(zhuǎn)染靶向PTTG1基因的siRNA,制備下調(diào)垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因PTTG1表達(dá)的LNCaP-AI細(xì)胞,觀察并記錄LNCaP-AI細(xì)胞轉(zhuǎn)染成功后細(xì)胞數(shù)量曲線及細(xì)胞形態(tài)變化;采用細(xì)胞衰老-β-半乳糖苷酶染色試劑盒檢測(cè)下調(diào)PTTG1的穩(wěn)定表達(dá)對(duì)LNCaP-AI衰老細(xì)胞數(shù)目的影響;免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后LNCaP-AI細(xì)胞中細(xì)胞衰老相關(guān)蛋白Glb1、細(xì)胞周期相關(guān)蛋白(p21、p27Kip1)、異染色質(zhì)調(diào)節(jié)蛋白1γ(HP1γ)、MAPK信號(hào)通路蛋白p-ERK和PI3K信號(hào)通路蛋白p-Ark、雄激素受體AR蛋白等細(xì)胞衰老相關(guān)因子的表達(dá)情況。結(jié)果(1)在轉(zhuǎn)染過程中,轉(zhuǎn)染組較對(duì)照組及陰性對(duì)照組,細(xì)胞生長(zhǎng)曲線呈明顯下降趨勢(shì)(P0.05);(2)免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)轉(zhuǎn)染組PTTG1表達(dá)較對(duì)照組及陰性對(duì)照組明顯減低(P0.05);(3)細(xì)胞衰老-β-半乳糖苷酶染色試劑盒檢測(cè)轉(zhuǎn)染組較對(duì)照組中,衰老細(xì)胞數(shù)目顯著增多(P0.05);(4)轉(zhuǎn)染組在10%活性炭/葡聚糖處理的胎牛血清不含酚紅RPMI1640培養(yǎng)液中細(xì)胞數(shù)量未見明顯增多,在含10%胎牛血清的培養(yǎng)液中生長(zhǎng)細(xì)胞數(shù)量及對(duì)照組在上述不同培養(yǎng)基中細(xì)胞數(shù)量均呈對(duì)數(shù)生長(zhǎng)(P0.05);(5)Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后LNCaP-AI細(xì)胞中細(xì)胞衰老相關(guān)蛋白Glb1、細(xì)胞周期相關(guān)蛋白(p21、p27Kip1)、異染色質(zhì)調(diào)節(jié)蛋白1γ(HP1γ)較對(duì)照組表達(dá)明顯升高(P0.05);雄激素受體AR蛋白、MAPK信號(hào)通路蛋白p-ERK和PI3K信號(hào)通路蛋白p-Ark等較對(duì)照組表達(dá)明顯下降(P0.05)。結(jié)論(1)下調(diào)PTTG1基因表達(dá)促進(jìn)人去勢(shì)抵抗前列腺癌細(xì)胞株LNCaP-AI細(xì)胞衰老;(2)PTTG1可能通過細(xì)胞衰老和雄激素受體途徑調(diào)控去勢(shì)抵抗前列腺癌的進(jìn)展。
【圖文】：

171：空白對(duì)照；2：陰性對(duì)照；3: siRNA-PTTG1(HSSS 190074) siRNA-PTTG1 對(duì) PTTG1 蛋白表達(dá)影響的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。estern blot 檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞中 PTTG1 蛋白的表達(dá)印跡照片 B 為各組 PTTG1 蛋白的相對(duì)表達(dá)siRNA-PTTG1 轉(zhuǎn)染 LNCaP-AI 細(xì)胞對(duì)細(xì)胞增殖和死亡的影將對(duì)照組分為空白對(duì)照及陰性對(duì)照組，于轉(zhuǎn)染 72h 后分別觀察下表達(dá)對(duì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變及細(xì)胞增殖方面的影響。結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染aP-AI 細(xì)胞呈不規(guī)則多邊形或梭形貼壁生長(zhǎng)且細(xì)胞胞膜完整、細(xì)胞染 72h 后可見細(xì)胞胞漿內(nèi)空泡較對(duì)照組明顯增多，且細(xì)胞變形處理組細(xì)胞經(jīng)胰酶液消化收集后經(jīng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀對(duì)細(xì)胞總數(shù)和死細(xì)

1：空白對(duì)照；2：陰性對(duì)照；3: siRNA-PTTG1(HSSS 190074)圖 2 siRNA-PTTG1 轉(zhuǎn)染 LNCaP-AI 細(xì)胞對(duì)細(xì)胞增殖和凋亡的影響A 為轉(zhuǎn)染 72 小時(shí)后各組典型細(xì)胞照片 B、C 為各組細(xì)胞總數(shù)（p<0.05）及細(xì)胞死亡率（p<0.05）3、 細(xì)胞衰老-β-半乳糖苷酶染色檢測(cè)轉(zhuǎn)染后衰老細(xì)胞數(shù)變化取 6 孔板轉(zhuǎn)染成功后的 LNCaP-AI 細(xì)胞及空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組，行細(xì)胞衰老-β -半乳糖苷酶染色，觀察下調(diào) PTTG1 的表達(dá)對(duì) LNCaP-AI 細(xì)胞衰老的影響，每組設(shè) 3 個(gè)副孔，重復(fù) 3 次實(shí)驗(yàn)。每孔隨機(jī)選取 3 個(gè)視野，分別計(jì)算衰老細(xì)胞數(shù)及陽(yáng)性率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：在轉(zhuǎn)染 72h 后轉(zhuǎn)染組染色陽(yáng)性率及相對(duì)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較各對(duì)照組明顯升高，，細(xì)胞染色陽(yáng)性率高達(dá) 63.5±2.35%（p<0.05）。如圖 3。
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.25

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 曹希亮;魏洋洋;宋曉明;魯可權(quán);于文朝;陳永強(qiáng);劉永亮;高江平;;下調(diào)基因PTTG1表達(dá)對(duì)前列腺癌LNCaP-AI細(xì)胞增殖、侵襲和凋亡的影響[J];中華男科學(xué)雜志;2017年07期

2 曹希亮;宋曉明;于文朝;陳永強(qiáng);魏洋洋;劉永亮;魯可權(quán);高江平;;垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因1在雄激素非依賴性前列腺癌發(fā)生過程中的表達(dá)變化[J];中華男科學(xué)雜志;2016年08期

3 曹希亮;高江平;于文朝;韓剛;文載律;洪寶發(fā);;前列腺組織中PTTG的表達(dá)及其意義[J];臨床泌尿外科雜志;2008年12期

4 曹希亮;高江平;韓剛;文載律;洪寶發(fā);張旭;;前列腺癌中垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因表達(dá)及內(nèi)分泌治療后前列腺癌無(wú)進(jìn)展生存期預(yù)測(cè)因素的研究[J];中華泌尿外科雜志;2009年09期

本文編號(hào)：2564968