【摘要】：目的探討下調(diào)垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因PTTG1的表達對人去勢抵抗前列腺癌LNCaP-AI細胞衰老機制的影響。方法采用體外誘導的人去勢抵抗前列腺癌LNCaP-AI細胞模型,LNCaP-AI細胞轉(zhuǎn)染靶向PTTG1基因的siRNA,制備下調(diào)垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因PTTG1表達的LNCaP-AI細胞,觀察并記錄LNCaP-AI細胞轉(zhuǎn)染成功后細胞數(shù)量曲線及細胞形態(tài)變化;采用細胞衰老-β-半乳糖苷酶染色試劑盒檢測下調(diào)PTTG1的穩(wěn)定表達對LNCaP-AI衰老細胞數(shù)目的影響;免疫印跡法(Western blot)檢測轉(zhuǎn)染后LNCaP-AI細胞中細胞衰老相關蛋白Glb1、細胞周期相關蛋白(p21、p27Kip1)、異染色質(zhì)調(diào)節(jié)蛋白1γ(HP1γ)、MAPK信號通路蛋白p-ERK和PI3K信號通路蛋白p-Ark、雄激素受體AR蛋白等細胞衰老相關因子的表達情況。結(jié)果(1)在轉(zhuǎn)染過程中,轉(zhuǎn)染組較對照組及陰性對照組,細胞生長曲線呈明顯下降趨勢(P0.05);(2)免疫印跡法(Western blot)檢測轉(zhuǎn)染組PTTG1表達較對照組及陰性對照組明顯減低(P0.05);(3)細胞衰老-β-半乳糖苷酶染色試劑盒檢測轉(zhuǎn)染組較對照組中,衰老細胞數(shù)目顯著增多(P0.05);(4)轉(zhuǎn)染組在10%活性炭/葡聚糖處理的胎牛血清不含酚紅RPMI1640培養(yǎng)液中細胞數(shù)量未見明顯增多,在含10%胎牛血清的培養(yǎng)液中生長細胞數(shù)量及對照組在上述不同培養(yǎng)基中細胞數(shù)量均呈對數(shù)生長(P0.05);(5)Western blot檢測轉(zhuǎn)染后LNCaP-AI細胞中細胞衰老相關蛋白Glb1、細胞周期相關蛋白(p21、p27Kip1)、異染色質(zhì)調(diào)節(jié)蛋白1γ(HP1γ)較對照組表達明顯升高(P0.05);雄激素受體AR蛋白、MAPK信號通路蛋白p-ERK和PI3K信號通路蛋白p-Ark等較對照組表達明顯下降(P0.05)。結(jié)論(1)下調(diào)PTTG1基因表達促進人去勢抵抗前列腺癌細胞株LNCaP-AI細胞衰老;(2)PTTG1可能通過細胞衰老和雄激素受體途徑調(diào)控去勢抵抗前列腺癌的進展。
【圖文】：

171：空白對照；2：陰性對照；3: siRNA-PTTG1(HSSS 190074) siRNA-PTTG1 對 PTTG1 蛋白表達影響的檢測實驗結(jié)果。estern blot 檢測轉(zhuǎn)染后各組細胞中 PTTG1 蛋白的表達印跡照片 B 為各組 PTTG1 蛋白的相對表達siRNA-PTTG1 轉(zhuǎn)染 LNCaP-AI 細胞對細胞增殖和死亡的影將對照組分為空白對照及陰性對照組，于轉(zhuǎn)染 72h 后分別觀察下表達對細胞形態(tài)學改變及細胞增殖方面的影響。結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染aP-AI 細胞呈不規(guī)則多邊形或梭形貼壁生長且細胞胞膜完整、細胞染 72h 后可見細胞胞漿內(nèi)空泡較對照組明顯增多，且細胞變形處理組細胞經(jīng)胰酶液消化收集后經(jīng)細胞計數(shù)儀對細胞總數(shù)和死細

1：空白對照；2：陰性對照；3: siRNA-PTTG1(HSSS 190074)圖 2 siRNA-PTTG1 轉(zhuǎn)染 LNCaP-AI 細胞對細胞增殖和凋亡的影響A 為轉(zhuǎn)染 72 小時后各組典型細胞照片 B、C 為各組細胞總數(shù)（p<0.05）及細胞死亡率（p<0.05）3、 細胞衰老-β-半乳糖苷酶染色檢測轉(zhuǎn)染后衰老細胞數(shù)變化取 6 孔板轉(zhuǎn)染成功后的 LNCaP-AI 細胞及空白對照組、陰性對照組，行細胞衰老-β -半乳糖苷酶染色，觀察下調(diào) PTTG1 的表達對 LNCaP-AI 細胞衰老的影響，每組設 3 個副孔，重復 3 次實驗。每孔隨機選取 3 個視野，分別計算衰老細胞數(shù)及陽性率。實驗結(jié)果顯示：在轉(zhuǎn)染 72h 后轉(zhuǎn)染組染色陽性率及相對陽性細胞數(shù)較各對照組明顯升高，，細胞染色陽性率高達 63.5±2.35%（p<0.05）。如圖 3。
【學位授予單位】：蚌埠醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.25

【參考文獻】

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1 曹希亮;魏洋洋;宋曉明;魯可權;于文朝;陳永強;劉永亮;高江平;;下調(diào)基因PTTG1表達對前列腺癌LNCaP-AI細胞增殖、侵襲和凋亡的影響[J];中華男科學雜志;2017年07期

2 曹希亮;宋曉明;于文朝;陳永強;魏洋洋;劉永亮;魯可權;高江平;;垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因1在雄激素非依賴性前列腺癌發(fā)生過程中的表達變化[J];中華男科學雜志;2016年08期

3 曹希亮;高江平;于文朝;韓剛;文載律;洪寶發(fā);;前列腺組織中PTTG的表達及其意義[J];臨床泌尿外科雜志;2008年12期

4 曹希亮;高江平;韓剛;文載律;洪寶發(fā);張旭;;前列腺癌中垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因表達及內(nèi)分泌治療后前列腺癌無進展生存期預測因素的研究[J];中華泌尿外科雜志;2009年09期

本文編號：2564968