【摘要】：目的：研究miR-145對(duì)前列腺癌PC-3細(xì)胞系增殖和凋亡及其調(diào)控基因表達(dá)的影響。 方法：常規(guī)培養(yǎng)前列腺癌PC-3細(xì)胞株，實(shí)驗(yàn)分為3組：不做任何處理的PC-3細(xì)胞為空白對(duì)照組，僅轉(zhuǎn)染不表達(dá)miR-145的空白病毒載體為陰性對(duì)照組，轉(zhuǎn)染有表達(dá)miR-145的慢病毒載體為mir-145轉(zhuǎn)染組。感染后72h，熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞，判斷細(xì)胞的感染效率，熒光定量PCR檢測(cè)miRNA-145的表達(dá)情況，用MTT法檢測(cè)前列腺癌PC-3細(xì)胞的增殖能力，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡，，RT-PCR檢測(cè)預(yù)測(cè)的miR-145調(diào)控基因（C-MYC， IRS1，IGF1R，CDKN1A，CCNA2）的表達(dá)變化。 結(jié)果：72小時(shí)后熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率達(dá)80%。熒光定量PCR結(jié)果顯示：miR-145轉(zhuǎn)染組的miR-145表達(dá)水平較陰性對(duì)照組、空白對(duì)照組明顯上調(diào)（p0.05）。MTT結(jié)果顯示，miR-145轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞增殖活性明顯低于空載體組和空白對(duì)照組。流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示，過(guò)表達(dá)miR-145后，PC-3細(xì)胞的細(xì)胞凋亡率增高。RT-PCR結(jié)果顯示miR-145轉(zhuǎn)染組IRS1mRNA表達(dá)明顯降低（P＜0.05）。 結(jié)論： miR-145可以抑制前列腺癌PC-3細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。前列腺癌PC-3細(xì)胞中miR-145表達(dá)可使IRS1基因表達(dá)降低。
【圖文】：

前列腺癌PC-3 轉(zhuǎn)染miR-145慢病毒載體72 h 后倒置熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞中綠色熒光蛋白的表達(dá)，顯示轉(zhuǎn)染效率大于80%，MOI=20。繼續(xù)培養(yǎng)1周后用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)（見(jiàn)圖1-1）。圖1-1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染慢病毒72h 后，轉(zhuǎn)染效率＞80% （40×）2.2 PC-3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染慢病毒后 miR-145 的含量變化轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)miR-145慢病毒載體后,miR-145轉(zhuǎn)染組PC-3細(xì)胞中的miR-145表達(dá)水平相比空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組明顯增加，與陰性對(duì)照組比較，表達(dá)量增加538倍（圖1-2）。

圖1-3 PC-3細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-145后 MTT檢測(cè)細(xì)胞的增殖活性變化2.4 流式細(xì)胞儀檢測(cè) miR-145 對(duì) PC-3 細(xì)胞凋亡的影響流式細(xì)胞儀（圖1-4）圖中四象限分別代表：左上象限：壞死細(xì)胞；右上象限：晚期凋亡細(xì)胞；左下象限：活細(xì)胞；右下象限：早期凋亡細(xì)胞。計(jì)算三組細(xì)胞凋亡率。三組細(xì)胞凋亡率：miR-145轉(zhuǎn)染組（13.26±1.62）%，陰性對(duì)照組：（3.78±3.12）%，空白對(duì)照組：（3.24±2.14）%，結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染組與陰性對(duì)照及空白對(duì)照組相比較，凋亡率顯著增加(P<0.05)。blank control miR-145圖1-4 流式細(xì)胞儀測(cè)三組細(xì)胞凋亡率的變化
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R737.25

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本文編號(hào)：2524218