【摘要】：在西方國家尤其是歐美地區(qū)，前列腺癌的發(fā)病率和致死率一直都位居前列。在我國，前列腺癌的發(fā)病率近年來也表現(xiàn)出急速上升的趨勢。傳統(tǒng)的治療手段如外科手術(shù)、放射療法、化學(xué)療法以及激素阻斷法對于晚期前列腺癌尤其是雄激素AR抵抗性前列腺癌更是沒有太好效果，，因此尋求一種更為有效的治療手段便成為全世界共同的課題。 ATRA（全反式維甲酸）作為一種經(jīng)典的細胞分化劑，除了可以介導(dǎo)腫瘤細胞增殖停滯，分化和凋亡外，還有利于促進晚期腫瘤細胞對于化療藥物的敏感性，能有效治療急性早幼粒白血病，同時也被證實對于其他多種癌癥的都有較好的抗腫瘤作用，其中就包括前列腺癌。HOXB13作為Homeotic gene cluster（HOXs）家族的一個經(jīng)典成員，位于人類染色體17q21.2位置上。HOXB13的表達具有明顯的組織特異性，它部分表達于正常的前列腺組織，少量表達于結(jié)腸直腸，在卵巢和睪丸中微量表達，會隨著前列腺的癌變和惡化其表達量逐步降低，在AR抵抗性前列腺癌細胞中低表達甚至不表達，外源高表達HOXB13基因能夠明顯抑制高惡性的AR抵抗性前列腺癌細胞增殖停滯，然而該基因在前列腺癌中表達沉默的機制以及與ATRA的抑制癌癥增殖的功能之間的聯(lián)系尚不清楚。 在本論文中，我們對ATRA抑制AR抵抗性高惡性前列腺癌細胞DU145增殖的作用及機制進行了研究。我們發(fā)現(xiàn)ATRA能夠介導(dǎo)DU145細胞增殖停滯并且上調(diào)HOXB13基因的表達。MTT實驗顯示ATRA抑制前列腺癌DU145細胞的生長要部分依賴于HOXB13基因的表達。熒光素酶雙報告基因檢測實驗顯示，ATRA刺激能夠上調(diào)HOXB13基因啟動子的活性。亞硫酸氫鈉測序（Bisulfite genomic sequencing）的研究表明，ATRA處理能夠降低HOXB13基因啟動子的甲基化水平，同時RT-PCR和Westren-blot實驗結(jié)果顯示，ATRA能夠下調(diào)前列腺癌細胞中DNA甲基轉(zhuǎn)移酶DNMT3b的表達。我們早期的染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）和免疫共沉淀（CoIP）實驗揭示Polycomb復(fù)合物（PRC）成員EZH2不僅可以介導(dǎo)HOXB13基因啟動子的H3K27me3修飾，還可以招募DNMT3b到該啟動子上，介導(dǎo)DNA甲基化來協(xié)同抑制HOXB13基因表達。在我們的研究中，我們發(fā)現(xiàn)ATRA處理能夠下調(diào)EZH2的表達，并且能夠抑制EZH2在HOXB13基因啟動子上的結(jié)合，并降低其在HOXB13基因啟動子上所介導(dǎo)的H3K27me3修飾，與此同時在HOXB13基因的啟動子上，DNMT3b的結(jié)合量也顯著減少。DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-aza-dC能夠通過減少受甲基化修飾基因啟動子的甲基化修飾程度上調(diào)基因的表達，而我們發(fā)現(xiàn)不論在DU145細胞的增殖抑制方面，還是在EZH2，DNMT3b和HOXB13這些基因的表達水平上，ATRA和5-aza-dC處理均能夠表現(xiàn)出顯著的協(xié)同增益效應(yīng)。 我們的實驗結(jié)果揭示了DNA的甲基化和組蛋白的甲基化共同參與了AR非依賴前列腺癌細胞HOXB13基因的表達沉默，而PcG家族成員EZH2能夠招募DNMT3b形成抑制復(fù)合物，直接結(jié)合到HOXB13基因啟動子上抑制其表達；ATRA能夠部分通過抵消上述表觀遺傳修飾上調(diào)HOXB13表達從而實現(xiàn)對AR非依賴前列腺癌細胞增殖的抑制；同時ATRA與5-aza-dC共同處理可以更為有效地抑制腫瘤細胞增殖，從而為AR抵抗性高惡性前列腺癌的治療和研究提供一個新的更為行之有效的思路和策略。
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【學(xué)位授予單位】：東北師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R737.25

【參考文獻】

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本文編號：2473306