【摘要】：在西方國(guó)家尤其是歐美地區(qū)，前列腺癌的發(fā)病率和致死率一直都位居前列。在我國(guó)，前列腺癌的發(fā)病率近年來(lái)也表現(xiàn)出急速上升的趨勢(shì)。傳統(tǒng)的治療手段如外科手術(shù)、放射療法、化學(xué)療法以及激素阻斷法對(duì)于晚期前列腺癌尤其是雄激素AR抵抗性前列腺癌更是沒(méi)有太好效果，，因此尋求一種更為有效的治療手段便成為全世界共同的課題。 ATRA（全反式維甲酸）作為一種經(jīng)典的細(xì)胞分化劑，除了可以介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞增殖停滯，分化和凋亡外，還有利于促進(jìn)晚期腫瘤細(xì)胞對(duì)于化療藥物的敏感性，能有效治療急性早幼粒白血病，同時(shí)也被證實(shí)對(duì)于其他多種癌癥的都有較好的抗腫瘤作用，其中就包括前列腺癌。HOXB13作為Homeotic gene cluster（HOXs）家族的一個(gè)經(jīng)典成員，位于人類染色體17q21.2位置上。HOXB13的表達(dá)具有明顯的組織特異性，它部分表達(dá)于正常的前列腺組織，少量表達(dá)于結(jié)腸直腸，在卵巢和睪丸中微量表達(dá)，會(huì)隨著前列腺的癌變和惡化其表達(dá)量逐步降低，在AR抵抗性前列腺癌細(xì)胞中低表達(dá)甚至不表達(dá)，外源高表達(dá)HOXB13基因能夠明顯抑制高惡性的AR抵抗性前列腺癌細(xì)胞增殖停滯，然而該基因在前列腺癌中表達(dá)沉默的機(jī)制以及與ATRA的抑制癌癥增殖的功能之間的聯(lián)系尚不清楚。 在本論文中，我們對(duì)ATRA抑制AR抵抗性高惡性前列腺癌細(xì)胞DU145增殖的作用及機(jī)制進(jìn)行了研究。我們發(fā)現(xiàn)ATRA能夠介導(dǎo)DU145細(xì)胞增殖停滯并且上調(diào)HOXB13基因的表達(dá)。MTT實(shí)驗(yàn)顯示ATRA抑制前列腺癌DU145細(xì)胞的生長(zhǎng)要部分依賴于HOXB13基因的表達(dá)。熒光素酶雙報(bào)告基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)顯示，ATRA刺激能夠上調(diào)HOXB13基因啟動(dòng)子的活性。亞硫酸氫鈉測(cè)序（Bisulfite genomic sequencing）的研究表明，ATRA處理能夠降低HOXB13基因啟動(dòng)子的甲基化水平，同時(shí)RT-PCR和Westren-blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，ATRA能夠下調(diào)前列腺癌細(xì)胞中DNA甲基轉(zhuǎn)移酶DNMT3b的表達(dá)。我們?cè)缙诘娜旧|(zhì)免疫沉淀（ChIP）和免疫共沉淀（CoIP）實(shí)驗(yàn)揭示Polycomb復(fù)合物（PRC）成員EZH2不僅可以介導(dǎo)HOXB13基因啟動(dòng)子的H3K27me3修飾，還可以招募DNMT3b到該啟動(dòng)子上，介導(dǎo)DNA甲基化來(lái)協(xié)同抑制HOXB13基因表達(dá)。在我們的研究中，我們發(fā)現(xiàn)ATRA處理能夠下調(diào)EZH2的表達(dá)，并且能夠抑制EZH2在HOXB13基因啟動(dòng)子上的結(jié)合，并降低其在HOXB13基因啟動(dòng)子上所介導(dǎo)的H3K27me3修飾，與此同時(shí)在HOXB13基因的啟動(dòng)子上，DNMT3b的結(jié)合量也顯著減少。DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-aza-dC能夠通過(guò)減少受甲基化修飾基因啟動(dòng)子的甲基化修飾程度上調(diào)基因的表達(dá)，而我們發(fā)現(xiàn)不論在DU145細(xì)胞的增殖抑制方面，還是在EZH2，DNMT3b和HOXB13這些基因的表達(dá)水平上，ATRA和5-aza-dC處理均能夠表現(xiàn)出顯著的協(xié)同增益效應(yīng)。 我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果揭示了DNA的甲基化和組蛋白的甲基化共同參與了AR非依賴前列腺癌細(xì)胞HOXB13基因的表達(dá)沉默，而PcG家族成員EZH2能夠招募DNMT3b形成抑制復(fù)合物，直接結(jié)合到HOXB13基因啟動(dòng)子上抑制其表達(dá)；ATRA能夠部分通過(guò)抵消上述表觀遺傳修飾上調(diào)HOXB13表達(dá)從而實(shí)現(xiàn)對(duì)AR非依賴前列腺癌細(xì)胞增殖的抑制；同時(shí)ATRA與5-aza-dC共同處理可以更為有效地抑制腫瘤細(xì)胞增殖，從而為AR抵抗性高惡性前列腺癌的治療和研究提供一個(gè)新的更為行之有效的思路和策略。
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【學(xué)位授予單位】：東北師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R737.25

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

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本文編號(hào)：2473306