【摘要】：目的:觀察上調細胞因子信號轉導抑制因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)表達對IgA腎病(IgA nephropathy,IgAN)患者血清IgA1刺激人腎小球系膜細胞(human mesangial cell,HMC)增殖的影響,探討其可能的機制,從而揭示SOCS3在IgAN腎臟損害中的作用。方法:1)采用Jacalin親和層析聯(lián)合SephacrylS-200凝膠過濾法純化聚合IgAN患者血清IgA1(aIgA1)。2)以HMC為研究對象,通過腺病毒轉染技術建立高表達SOCS3的HMC,再以aIgA1刺激HMC。3)確定aIgA1作用時間和濃度及病毒轉染條件后,設立4個實驗組:a)空白對照組:HMC僅加入10%FBS和1%雙抗的1640培養(yǎng)基正常培養(yǎng),定時換液;b)IgA1組:HMC正常培養(yǎng)后加入aIgA1刺激;c)IgA1+空載腺病毒組:HMC正常培養(yǎng)轉染空載腺病毒48小時后加入aIgA1刺激;d)IgA1+SOCS3過表達腺病毒組:HMC正常培養(yǎng)轉染SOCS3腺病毒48小時后加入aIgA1刺激;4)采用MTT法檢測系膜細胞增殖,Western blot和Real-time PCR檢測各組SOCS3、Toll樣受體4(Toll like receptor 4,TLR4)、轉化生長因子β1(Transforming growth factorβ1,TGF-β1)蛋白和mRNA表達情況。5)實驗數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差(sx±)表示,通過統(tǒng)計軟件IBM SPSS Statistics 20進行t檢驗,結果以p0.05為有顯著性差異。結果:1)aIgA1刺激HMC12h、24h和48h,刺激24h開始表現(xiàn)出明顯的促增殖作用,濃度為0.25、0.5、1.0mg/ml與空白對照組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);濃度為1.5mg/ml與空白對照組比較,差異無統(tǒng)計學意義。其中濃度為0.5mg/ml作用48h時aIgA1的促增殖作用最為明顯。aIgA1刺激后與空白對照組相比,SOCS3、TLR4、TGF-β1蛋白和mRNA表達均有顯著升高(p0.05),差異有統(tǒng)計學意義。2)分別轉染SOCS3過表達腺病毒和空載腺病毒48h后,對HMC加入aIgA1進行干預,過表達SOCS3的HMC經aIgA1刺激24h或48h,與IgA1組和IgA1+空載腺病毒組相比,MTT檢測發(fā)現(xiàn)細胞的增殖程度明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),SOCS3對IgA1刺激系膜細胞的增殖反應有一定的抑制作用。提取各組細胞總蛋白和總RNA檢測相關蛋白和mRNA表達變化,IgA1+SOCS3過表達病毒組較IgA1+空載腺病毒組及IgA1組SOCS3蛋白和mRNA表達明顯升高;IgA1+SOCS3過表達病毒組與IgA1+空載腺病毒組、IgA1組相比,TLR4、TGF-β1蛋白和mRNA表達有顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。結論:1)IgAN患者aIgA1可促進HMC增殖,且增殖率與aIgA1有一定的時間劑量關系。2)SOCS3、TLR4、TGF-β1在正常HMC中表達較低,IgAN患者a IgA1刺激可增加SOCS3、TLR4、TGF-β1在HMC中的表達。3)腺病毒轉染技術可以顯著上調SOCS3的表達,上調SOCS3表達后可抑制aIgA1刺激誘導的系膜細胞增殖,并下調TLR4和TGF-β1的表達,從而發(fā)揮對腎臟的保護作用。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R692.31

【參考文獻】

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本文編號：2470810