【摘要】：目的:觀察上調(diào)細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)表達(dá)對(duì)IgA腎病(IgA nephropathy,IgAN)患者血清IgA1刺激人腎小球系膜細(xì)胞(human mesangial cell,HMC)增殖的影響,探討其可能的機(jī)制,從而揭示SOCS3在IgAN腎臟損害中的作用。方法:1)采用Jacalin親和層析聯(lián)合SephacrylS-200凝膠過(guò)濾法純化聚合IgAN患者血清IgA1(aIgA1)。2)以HMC為研究對(duì)象,通過(guò)腺病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)建立高表達(dá)SOCS3的HMC,再以aIgA1刺激HMC。3)確定aIgA1作用時(shí)間和濃度及病毒轉(zhuǎn)染條件后,設(shè)立4個(gè)實(shí)驗(yàn)組:a)空白對(duì)照組:HMC僅加入10%FBS和1%雙抗的1640培養(yǎng)基正常培養(yǎng),定時(shí)換液;b)IgA1組:HMC正常培養(yǎng)后加入aIgA1刺激;c)IgA1+空載腺病毒組:HMC正常培養(yǎng)轉(zhuǎn)染空載腺病毒48小時(shí)后加入aIgA1刺激;d)IgA1+SOCS3過(guò)表達(dá)腺病毒組:HMC正常培養(yǎng)轉(zhuǎn)染SOCS3腺病毒48小時(shí)后加入aIgA1刺激;4)采用MTT法檢測(cè)系膜細(xì)胞增殖,Western blot和Real-time PCR檢測(cè)各組SOCS3、Toll樣受體4(Toll like receptor 4,TLR4)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(Transforming growth factorβ1,TGF-β1)蛋白和mRNA表達(dá)情況。5)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(sx±)表示,通過(guò)統(tǒng)計(jì)軟件IBM SPSS Statistics 20進(jìn)行t檢驗(yàn),結(jié)果以p0.05為有顯著性差異。結(jié)果:1)aIgA1刺激HMC12h、24h和48h,刺激24h開(kāi)始表現(xiàn)出明顯的促增殖作用,濃度為0.25、0.5、1.0mg/ml與空白對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);濃度為1.5mg/ml與空白對(duì)照組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中濃度為0.5mg/ml作用48h時(shí)aIgA1的促增殖作用最為明顯。aIgA1刺激后與空白對(duì)照組相比,SOCS3、TLR4、TGF-β1蛋白和mRNA表達(dá)均有顯著升高(p0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2)分別轉(zhuǎn)染SOCS3過(guò)表達(dá)腺病毒和空載腺病毒48h后,對(duì)HMC加入aIgA1進(jìn)行干預(yù),過(guò)表達(dá)SOCS3的HMC經(jīng)aIgA1刺激24h或48h,與IgA1組和IgA1+空載腺病毒組相比,MTT檢測(cè)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的增殖程度明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),SOCS3對(duì)IgA1刺激系膜細(xì)胞的增殖反應(yīng)有一定的抑制作用。提取各組細(xì)胞總蛋白和總RNA檢測(cè)相關(guān)蛋白和mRNA表達(dá)變化,IgA1+SOCS3過(guò)表達(dá)病毒組較IgA1+空載腺病毒組及IgA1組SOCS3蛋白和mRNA表達(dá)明顯升高;IgA1+SOCS3過(guò)表達(dá)病毒組與IgA1+空載腺病毒組、IgA1組相比,TLR4、TGF-β1蛋白和mRNA表達(dá)有顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:1)IgAN患者aIgA1可促進(jìn)HMC增殖,且增殖率與aIgA1有一定的時(shí)間劑量關(guān)系。2)SOCS3、TLR4、TGF-β1在正常HMC中表達(dá)較低,IgAN患者a IgA1刺激可增加SOCS3、TLR4、TGF-β1在HMC中的表達(dá)。3)腺病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)可以顯著上調(diào)SOCS3的表達(dá),上調(diào)SOCS3表達(dá)后可抑制aIgA1刺激誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞增殖,并下調(diào)TLR4和TGF-β1的表達(dá),從而發(fā)揮對(duì)腎臟的保護(hù)作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R692.31

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2470810