發(fā)布時(shí)間：2019-05-05 15:31

【摘要】：目的： 1.研究人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)人前列腺癌PC-3細(xì)胞系及22RV1細(xì)胞系增殖,遷移,侵襲及血管生成擬態(tài)等生物學(xué)特性的影響,并初步探討其影響血管生成擬態(tài)過(guò)程中的相關(guān)分子機(jī)制； 2.利用免疫磁珠法從人前列腺癌PC-3細(xì)胞株中分選人前列腺癌類干細(xì)胞,并鑒定其相應(yīng)生物學(xué)特性； 3.探討過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)的配體羅格列酮對(duì)前列腺癌PC-3細(xì)胞系增殖,遷移,侵襲及血管生成擬態(tài)的影響,并初步探討其相關(guān)分子機(jī)制。 方法： 1.體外培養(yǎng)人前列腺癌PC-3細(xì)胞系及22RV1細(xì)胞系,應(yīng)用CCK-8法觀察人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)前列腺癌細(xì)胞增殖的影響；通過(guò)體外劃痕實(shí)驗(yàn)及侵襲實(shí)驗(yàn)觀察人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)前列腺癌細(xì)胞遷移及侵襲的影響；體外建立matrigel三維培養(yǎng)系統(tǒng),觀察人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)前列腺癌細(xì)胞血管生成擬態(tài)(vasculogenic mimicry, VM)形成的影響。通過(guò)裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)觀察人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)前列腺癌細(xì)胞體內(nèi)成瘤及血管生成擬態(tài)形成的影響。人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞干預(yù)前列腺癌細(xì)胞后通過(guò)RT-PCR及western blot等方法觀察其CXCR4的表達(dá)變化,并通過(guò)CXCR4抑制劑AMD3100、PI3K抑制劑LY294002及慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)研究SDF-1/CXCR4軸及PI3K/Akt通路在該過(guò)程中的作用； 2.利用免疫磁珠法從人前列腺癌PC-3細(xì)胞株中分選出CD133+/CD44+細(xì)胞,通過(guò)免疫組化、流式細(xì)胞術(shù)、CCK8及平板克隆形成實(shí)驗(yàn)鑒定其表面標(biāo)志物表達(dá)情況及腫瘤干細(xì)胞相關(guān)特性,通過(guò)裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)研究分選前后細(xì)胞體內(nèi)成瘤能力； 3.體外培養(yǎng)人前列腺癌PC-3細(xì)胞系,應(yīng)用CCK-8法觀察羅格列酮不同濃度和不同作用時(shí)間對(duì)前列腺癌PC-3細(xì)胞增殖的影響；通過(guò)體外劃痕實(shí)驗(yàn)及侵襲實(shí)驗(yàn)觀察羅格列酮對(duì)PC-3細(xì)胞遷移及侵襲的影響；體外建立matrigel三維培養(yǎng)系統(tǒng),觀察羅格列酮對(duì)PC-3細(xì)胞血管生成擬態(tài)形成和VEGF產(chǎn)生的影響；并通過(guò)RT-PCR及western blot等方法觀察研究VEGF及PI3K/Akt通路在該過(guò)程中的作用。 結(jié)果： 1.人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可促進(jìn)前列腺癌PC-3細(xì)胞增殖、遷移及侵襲；前列腺癌PC-3細(xì)胞和22RV1細(xì)胞在體外三維培養(yǎng)條件下能夠形成形成環(huán)狀和網(wǎng)絡(luò)樣結(jié)構(gòu)。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可在體外實(shí)驗(yàn)及裸鼠體內(nèi)試驗(yàn)中可促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞血管生成擬態(tài)的形成。人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞上調(diào)了兩種前列腺癌細(xì)胞系CXCR4的表達(dá),慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)抑制CXCR4表達(dá)后可抑制兩種細(xì)胞血管生成擬態(tài)形成。CXCR4抑制劑AMD3100和P13K抑制劑LY294002可阻斷人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或SDF-1誘導(dǎo)的血管生成擬態(tài)形成； 2.經(jīng)免疫磁珠法分選所得CD133+/CD44+細(xì)胞比例為0.50%；免疫組化及流式顯示其CD44/CD133/整合素Q2β1均高表達(dá)；其細(xì)胞增殖和克隆形成率高于PC-3細(xì)胞；以低密度注射時(shí),其裸鼠體內(nèi)成瘤率明顯高于PC-3細(xì)胞； 3.羅格列酮可明顯抑制前列腺癌PC-3細(xì)胞增殖、遷移及侵襲。同時(shí)羅格列酮可抑制前列腺癌PC-3細(xì)胞在體外三維培養(yǎng)條件下形成環(huán)狀和網(wǎng)絡(luò)樣結(jié)構(gòu),并抑制其VEGF mRNA表達(dá)及蛋白水平分泌。羅格列酮能夠抑制PC-3細(xì)胞Akt磷酸化。 結(jié)論： 1.人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及血管生成擬態(tài)形成；人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞血管生成擬態(tài)形成可能是通過(guò)上調(diào)其CXCR4表達(dá)并激活PI3K/Akt通路起作用的； 2.利用免疫磁珠法可從人前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C3中高效的分選出具有腫瘤干細(xì)胞生物學(xué)特性的前列腺癌類干細(xì)胞,為下一步研究打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)； 3.過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)的配體羅格列酮可有效抑制前列腺癌PC-3細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及血管生成擬態(tài)形成；羅格列酮抑制前列腺癌細(xì)胞血管生成擬態(tài)形成可能是通過(guò)下調(diào)其VEGF表達(dá)并抑制PI3K/Akt通路起作用的。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R737.25

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2469682