發(fā)布時(shí)間：2019-04-23 14:37

【摘要】：研究背景 前列腺癌是泌尿、男性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率有明顯的地區(qū)差異,西方工業(yè)化國家較高,報(bào)道僅次于肺癌,在男性是癌癥發(fā)病的第二位。在我國發(fā)病率雖然較低,但是現(xiàn)今發(fā)病率有逐年上升的趨勢。前列腺癌被臨床上發(fā)現(xiàn)時(shí)大多已經(jīng)有轉(zhuǎn)移,經(jīng)過雄激素祛除治療后,大部分患者病情好轉(zhuǎn),但最終仍發(fā)展為雄性激素非依賴型前列腺癌(AIPC)。近年來前列腺癌的治療已經(jīng)取得很大的進(jìn)展,諸如根治性手術(shù)切除、激素治療、抗雄激素雄激素剝奪治療、照射治療、化療或它們的不同方法的綜合性治療�；蛑委熤饾u受到重視,特別是雄性激素非依賴、再發(fā)的或廣泛轉(zhuǎn)移的前列腺癌,基因治療可以發(fā)揮更積極的治療作用。前列腺癌的基因治療有較好的發(fā)展前景,還因?yàn)樗堑颓忠u性并安全的一種治療方法,它既能局部治療、又能全身治療,很少有合并癥或副作用,故可以作為首選的治療方案。 腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)包括了血管緊張素原、血管緊張肽原酶、血管緊張素Ⅰ(Ang Ⅰ),血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE),血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)和AngⅡ受體等。一些研究揭示RAS局部表達(dá)于一些不同成分的癌細(xì)胞和組織中,其中包括了腦腫瘤,肺癌,乳腺癌,前列腺癌、皮膚癌和子宮癌等。近年的研究顯示,AngⅡ1型受體(AT1R)具有促腫瘤生長和促進(jìn)腫瘤血管生成的作用,運(yùn)用其拮抗劑則具有抑制腫瘤生長,血管生成和癌細(xì)胞專業(yè)的作用。在大多數(shù)病理生理環(huán)境和一些研究血管生成的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),AngⅡ2型受體(AT2R)都表現(xiàn)著與AT1R相對(duì)立的效應(yīng)。AT2R的過表達(dá)可以誘導(dǎo)多種細(xì)胞發(fā)生凋亡。 目前,在基因載體的設(shè)計(jì)上,可以分為兩大類：病毒類基因載體和非病毒類基因載體。非病毒載體的方法有電轉(zhuǎn)移法法,磷酸鈣共沉淀法和脂質(zhì)體法�，F(xiàn)在病毒載體主要包括系腺病毒載體,腺相關(guān)病毒載體和慢病毒載體。其中腺病毒載體具有以下特點(diǎn)：第一、腺病毒的宿主范圍廣,對(duì)人類致病性低,可用于人類或非人類蛋白的表達(dá)。第二、可以在增殖和非增殖細(xì)胞中感染和表達(dá)基因。第三、能有效進(jìn)行增殖,能在懸浮培養(yǎng)基中擴(kuò)增,滴度高。第四、與人類基因組同源,大多數(shù)人類蛋白都可以達(dá)到高水平表達(dá)并且具有完全的功能。第五、不整合到染色體中,無插入導(dǎo)致突變性,不會(huì)干擾宿主細(xì)胞基因。第六、能夠同時(shí)表達(dá)多個(gè)基因。正是由于具有以上的優(yōu)點(diǎn),腺病毒被廣泛應(yīng)用于體外基因轉(zhuǎn)導(dǎo),體內(nèi)接種疫苗和基因治療等各個(gè)領(lǐng)域。 運(yùn)用腺病毒基因載體治療前列腺癌有以下的優(yōu)點(diǎn)：前列腺只是性器官并非維持生命所必需,因此在靶向基因治療中沒有必要區(qū)分正常和癌變的前列腺組織。第二,有多個(gè)前列腺特異性啟動(dòng)子可以使治療性基因產(chǎn)品在前列腺組織特異性表達(dá)。第三,由于前列腺容易接近,基因治療載體可以使用簡單的技術(shù)操作進(jìn)行前列腺內(nèi)給藥。另外,前列腺治療過程和效果容易檢測等特點(diǎn),前列腺癌的基因治療有較好的發(fā)展前景。 本文包括兩個(gè)部分,第一部分是將AT2R重組腺病毒載體Ad5-CMV-AT2R及對(duì)照載體Ad5-CMV-EGFP在293A細(xì)胞上進(jìn)一步擴(kuò)大培養(yǎng),通過氯化銫超速離心純化,測定病毒滴度。第二部分是人前列腺癌移植瘤動(dòng)物模型的建立和移植瘤大小、細(xì)胞增殖與凋亡的檢測分析。 (一)AT2R重組腺病毒載體的擴(kuò)增與純化及其在人前列腺癌細(xì)胞株的梯度感染 1.研究目的 已經(jīng)成功構(gòu)建的重組AT2R腺病毒載體,在HEK293A細(xì)胞中進(jìn)行大量擴(kuò)增腺病毒,氯化銫梯度超速離心純化病毒,并通過綠色熒光蛋白標(biāo)記法測定病毒滴度,得到高純度、高滴度的腺病毒。為體外動(dòng)物模型體內(nèi)實(shí)驗(yàn),以及研究血管緊張素Ⅱ受體對(duì)腫瘤的促凋亡作用相關(guān)的基因的進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。 2.研究方法 2.1HEK293A細(xì)胞復(fù)蘇與培養(yǎng) 取凍存HEK293A細(xì)胞,置于37℃溫水中復(fù)蘇細(xì)胞。室溫離心,棄去上清,以新鮮DMEM培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀,混勻后加入25cm2培養(yǎng)瓶中,加入10mlDMEM培養(yǎng)基(含10%FBS),37℃5%C02細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 2.2腺病毒顆粒在HEK293A細(xì)胞中的大量擴(kuò)增 胰酶消化處理細(xì)胞,向T75細(xì)胞培養(yǎng)瓶中加入10ml DMEM培養(yǎng)基和含5×106HEK293A細(xì)胞的懸液,置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí),細(xì)胞融合率達(dá)到90%-95%,加入適量腺病毒保存液。再培養(yǎng)48-72小時(shí),細(xì)胞出現(xiàn)CPE。收集細(xì)胞沉淀,-20℃/37℃反復(fù)凍融3次,離心收集上清于-20℃保存。 2.3氯化銫密度梯度超速離心純化腺病毒 分別配置1.4g/cm3與1.2g/cm3氯化銫溶液,并依次將4ml溶液加入超速離心管中,最后加入向離心管中加入病毒裂解液,總體積為16.5ml。放入4度超速離心機(jī)中離心80min。離心后,在1.4g/cm3氯化銫區(qū)域中可觀察到乳白色病毒離心帶。利用注射器在病毒帶對(duì)應(yīng)的位置插入離心管,抽吸純化后的病毒轉(zhuǎn)入透析袋,4℃透析過夜后分裝,加入保存液后置于-70℃冰箱保存。 2.4腺病毒滴度測定 利用綠色熒光蛋白標(biāo)記法測定腺病毒滴度。利用無血清培養(yǎng)對(duì)重組腺病毒進(jìn)行10-2—10-6梯度稀釋。胰酶消化計(jì)數(shù),鋪24孔板,每孔加入50μl待測腺病毒樣品,每個(gè)樣品設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。培養(yǎng)48小時(shí)后,熒光顯微鏡下觀測視野熒光細(xì)胞數(shù)。依公式titer(GFU/ml)=[(Green fluorescent cells/field) X (fields/well)]/[volume viruss(ml) X (dilution factor)],計(jì)算病毒滴度。 2.5不同腺病毒滴度感染DU145細(xì)胞 胰酶消化處理人前列腺癌細(xì)胞(DU145),血細(xì)胞計(jì)數(shù)板細(xì)胞計(jì)數(shù),鋪24孔板,每孔加入.500μl全培養(yǎng)基(含有5×105個(gè)細(xì)胞),37℃,5%C02培養(yǎng)24小時(shí)。分別用MOI=0、MOI=10、MOI=20、MOI=50、MOI=100不同的腺病毒濃度感染DU145細(xì)胞,每個(gè)濃度設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。感染24小時(shí)后,在熒光顯微鏡下觀測細(xì)胞形態(tài)。3.研究結(jié)果3.1HEK293A細(xì)胞培養(yǎng) 將HEK293細(xì)胞置于含10%FBS的DMEM完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)兩天,在光鏡下察察可見細(xì)胞單層貼壁生長,外形呈梭型或多邊形,生長狀態(tài)良好。3.2重組腺病毒擴(kuò)增 在感染腺病毒載體24小時(shí)后,在熒光顯微鏡下可以觀察至HEK293細(xì)胞仍然保持層貼壁狀態(tài),沒有明顯的細(xì)胞脫落,但可以看到若干呈微弱綠色熒光的細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)后鏡下觀察,熒光顯微鏡下Ad-CMV-AT2R-EGFP組和Ad-CMV-EGFP組中綠色熒光細(xì)胞數(shù)量逐漸增加。感染腺病毒的293細(xì)胞形態(tài)隨培養(yǎng)時(shí)間的增加而發(fā)生改變,出現(xiàn)CPE現(xiàn)象。 3.3重組腺病毒滴度測定 以10-2—10-6梯度稀釋重組腺病毒感染293A細(xì)胞48小時(shí)后,每孔計(jì)算三個(gè)視野,每個(gè)不同滴度計(jì)算三個(gè)復(fù)孔,計(jì)算熒光顯微鏡下熒光細(xì)胞數(shù)。每視野中熒光細(xì)胞數(shù)以10-50個(gè)為佳。根據(jù)公式titer(GFU/ml)=[(Green fluorescent cells/field) X (fields/well)]/[volume viruss(ml)×(dilution factor)],得Ad-CMV-AT2R-EGFP滴度為1.2×1011pfu/ml,Ad-CMV-EGFP滴度為1.4×1011pfu/ml。3.4不同MOI值腺病毒感染DU145細(xì)胞 利用不同的MOI值(MOI=0、10、20、50、100)的Ad-CMV-AT2R-EGFP和Ad-CMV-EGFP感染DU145細(xì)胞,感染48小時(shí)后,在熒光顯微鏡下觀察,兩組感染的細(xì)胞產(chǎn)生高水平的GFP表達(dá),綠色熒光表達(dá)的細(xì)胞數(shù)與MOI值有關(guān)。在Ad-CMV-AT2R-EGFP感染的細(xì)胞與對(duì)照組感染細(xì)胞相比,出現(xiàn)那典型的細(xì)胞凋亡形態(tài)(如細(xì)胞核濃縮等)。 4.研究結(jié)論 在本實(shí)驗(yàn)中,我們成功把病毒液在HEK293A細(xì)胞上進(jìn)一步擴(kuò)大培養(yǎng),經(jīng)過氯化銫超速離心純化,得到高滴度的重組腺病毒Ad-CMV-AT2R-EGFP和Ad-CMV-EGFP。利用不同Ad-CMV-AT2R-EGFP和Ad-CMV-EGFP MOI值感染DU145細(xì)胞,AT2R組中,隨著MOI的增高,鏡下視野中凋亡細(xì)胞數(shù)量增加。而在EGFP組沒有觀察到凋亡細(xì)胞出現(xiàn)。這表明了AT2R重組腺病毒載體可以導(dǎo)致前列腺癌細(xì)胞的凋亡,并且凋亡現(xiàn)象隨劑量增加而增加。 (二)建立人前列腺癌裸鼠移植瘤動(dòng)物模型并進(jìn)行重組腺病毒瘤體注射治療 1.研究目的 建立人前列腺癌裸鼠移植瘤動(dòng)物模型并隨機(jī)分組,將Ad-CMV-AT2R-EGFP及對(duì)照載體Ad-CMV-EGFP、PBS(磷酸鹽緩沖液)對(duì)裸鼠皮下移植瘤進(jìn)行瘤體注射,在注射治療過程中,體外觀測瘤體的生長狀況并測量大小。在處死小鼠后,剝?nèi)∧[瘤組織,通過免疫組織化學(xué)和TUNEL凋亡檢測等方法檢測AT2R過表達(dá)對(duì)前列腺癌生長的影響。 2.研究方法 2.1人前列腺癌細(xì)胞DU145培養(yǎng)及裸鼠皮下移植瘤的建立 常規(guī)培養(yǎng)人前列腺癌細(xì)胞DU145至對(duì)數(shù)生長期,消化計(jì)數(shù)DU145人前列腺癌細(xì)胞,并重懸與無血清培養(yǎng)基內(nèi)。共17只約5周周齡的雄性裸鼠飼養(yǎng)于SPF級(jí)動(dòng)物房內(nèi),每只小鼠左側(cè)腋下注射100μl含有5×106個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液。 2.2裸鼠皮下移植瘤瘤體注射和瘤體生長情況監(jiān)測 接種DU145細(xì)胞三周后,待皮下人前列腺癌細(xì)胞移植瘤瘤徑達(dá)0.5cm時(shí),將裸鼠隨機(jī)分成三組,分別為Ad-CMV-AT2R-EGFP組7只裸鼠,對(duì)照載體Ad-CMV-EGFP組、PBS組,每組各5只。三組裸鼠,每只瘤體注射0.1ml,Ad5-CMV-AT2R-EGFP,Ad5-CMV-EGFP或PBS,病毒量為1×109次方感染單位/(只·次),一次四天,共6次。每次對(duì)裸鼠進(jìn)行瘤體注射治療前,利用游標(biāo)卡尺對(duì)裸鼠皮下移植瘤的移植瘤長徑(a),寬徑(b)進(jìn)行測量并作記錄,通過abb/2皮下瘤體體積公式計(jì)算瘤組織體積,并繪制腫瘤生長曲線。 2.3剝?nèi)∑は乱浦擦鼋M織及處理 末次瘤體注射后三天,頸椎脫臼法處死裸鼠,解剖剝?nèi)∧[瘤標(biāo)本,并置與液氮中凍存。分別取得各組移植瘤體組織標(biāo)本,利用低溫恒冷冰凍切片機(jī)對(duì)移植瘤冰凍組織進(jìn)行連續(xù)切片并固定,厚度為7μm,HE染色,在光鏡下觀察細(xì)胞和組織結(jié)構(gòu)的變化。 2.4免疫組織化學(xué)法檢測Ki67 采用免疫組織化學(xué)技術(shù)HRP-DAB法檢測不同分組的組織切片中Ki67的表達(dá)。并對(duì)Ki67免疫染色進(jìn)行病理評(píng)分(每張切片5個(gè)高倍鏡視野,計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞百分比。陽性細(xì)胞數(shù)5%計(jì)0分,5%-25%計(jì)1分,26%-50%計(jì)2分,51%-75%計(jì)3分,76%-100%計(jì)4分。著色程度：無色為0分,棕黃色為2分,棕褐色為3分。兩者計(jì)分相乘。) 2.5熒光顯微鏡對(duì)移植瘤切片的觀測 利用低溫恒冷冰凍切片機(jī)對(duì)移植瘤冰凍組織進(jìn)行連續(xù)切片并固定后,將不同分組的腫瘤組織切片放置于熒光顯微鏡下觀測。2.6原位末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測移植瘤細(xì)胞凋亡 DNA原位末端標(biāo)記法(TUNEL)原位細(xì)胞凋亡檢測,在10×40倍鏡下采集每例TUNEL陽性組織切片的5個(gè)不同的視野,計(jì)數(shù)每個(gè)視野中的陽性細(xì)胞數(shù)以及總細(xì)胞數(shù),進(jìn)行定量分析,凋亡指數(shù)(apoptosis index, AI)=陽性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)。 2.7移植瘤組織mRNA表達(dá)檢測 液氮研磨不同分組的移植瘤組織,Trizol法提取組織RNA,利用熒光定量PCR檢測(GADD45A,AT2R, VEGF,Trail-R2)mRNA表達(dá)。 2.8統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件,運(yùn)用重復(fù)測量分析方法分別比較Ad-CMV-AT2R-EGFP組及Ad-CMV-EGFP組、PBS組移植瘤體積是否存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；免疫組織化學(xué)Ki67免疫染色和TUNEL凋亡檢測后,對(duì)各組切片進(jìn)行病理評(píng)分,并把各組評(píng)分進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。對(duì)各分組腫瘤組織中mRNA(GADD45A,AT2R,VEGF,Trail-R2)表達(dá)水平進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。P0.05為差異有顯著性。 3.研究結(jié)果 3.1裸鼠皮下移植瘤建立與瘤體生長檢測 DU145細(xì)胞經(jīng)臺(tái)盼藍(lán)染色后確定活細(xì)胞技術(shù)在95%左右,注射前列腺癌細(xì)胞三周以后,裸鼠皮下形成肉眼可見的腫瘤。對(duì)已隨機(jī)分組小鼠注射Ad-CMV-AT2R-EGFP、Ad-CMV-EGFP組、PBS,并在每次注射時(shí)測量記錄瘤體大小。動(dòng)物處死時(shí),測量得Ad-CMV-AT2R-EGFP組(0.2531±0.053)cm2,Ad-CMV-EGFP組為(0.4034±0.05)cm2, PBS組為(0.391±0.103)cm2。根據(jù)各組腫瘤體積數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得出,AT2R組腫瘤體積明顯小于EGFP組和PBS組,P0.05,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3.2熒光顯微鏡對(duì)移植瘤切片的觀測 利用熒光顯微鏡分別觀察Ad-CMV-AT2R-EGFP組、Ad-CMV-EGFP組、PBS組冰凍切片。在鏡下可以觀察到AT2R組與EGFP對(duì)照組組織切片中有綠色熒光均勻分布,EGFP對(duì)照組較AT2R組綠色熒光蛋白表達(dá)強(qiáng)。而PBS組中不能觀察到綠色熒光。 3.3免疫組織化學(xué)法檢測Ki67 免疫組化結(jié)果顯示,各組移植瘤結(jié)果為：AT2R組為(4.8±1.09),EGFP對(duì)照組為(7.8±1.32),PBS組為(7.4±1.43)。通過各組評(píng)分進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,表明AT2R組Ki67表達(dá)水平明顯低于EGFP對(duì)照組和PBS組,P0.05,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.4原位末端標(biāo)記法(TUNel)檢測移植瘤細(xì)胞凋亡 凋亡指數(shù)(apoptosis index, AI)=陽性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)。AT2R組為8.47%,GFP組為1.48%,PBS組為1.92%。各組間AI進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,得出AT2R組分別與GFP組、PBS組具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P0.05。而GFP組與PBS組間無差異。 3.5移植瘤組織mRNA表達(dá)檢測 利用熒光定量PCR檢測(GADD45A,AT2R,VEGF,Trail-R2)mRNA表達(dá).在注射AT2R組中AT2R高表達(dá),而在GFP組與PBS組中幾乎不能檢測到AT2R的表達(dá),AT2R組分別于GFP組、PBS組間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05。AT2R組中GADD45a表達(dá)對(duì)比GFP組和PBS組,分別有1.4倍和1.3倍的增加,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05。而Trail-R2與VEGF分別在三組中表達(dá)無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 4.研究結(jié)論 本次試驗(yàn)中,我們通過在雄性裸鼠皮下注射人前列腺癌細(xì)胞,成功地建立裸鼠皮下移植瘤動(dòng)物模型。通過對(duì)瘤體注射過表達(dá)AT2R重組腺病毒載體,研究其對(duì)前列腺癌細(xì)胞的生長,增殖及細(xì)胞凋亡的影響。量度移植瘤體積,AT2R組瘤體生長速度明顯低于GFP組和PBS組Ki67免疫組織化學(xué)檢測,TUNEL凋亡檢測結(jié)果都說明了AT2R過表達(dá)抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和促進(jìn)其凋亡。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R737.25

【共引文獻(xiàn)】

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1 崔巍;肝細(xì)胞肝癌中硫氧還蛋白調(diào)控缺氧誘導(dǎo)因子-2α的機(jī)制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

2 李寶玉;hTERT啟動(dòng)子調(diào)控腺相關(guān)病毒介導(dǎo)的PE38KDEL基因治療胰腺癌的實(shí)驗(yàn)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

3 栗亞;基于納米探針技術(shù)的NSCLC細(xì)胞表面形貌和力學(xué)特性研究[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2013年

4 劉艷紅;新肝癌相關(guān)基因HTA功能的初步研究[D];中南大學(xué);2013年

5 陳飛宇;FANCD2通路乳腺癌遺傳易感基因SNP與乳腺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)分析[D];中南大學(xué);2013年

6 茅葉青;MiR-330在前列腺癌的抑癌作用及其機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2013年

7 湯平;基于10年P(guān)SA檢測及前列腺穿刺活檢系列研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

8 陳連宏;唑來膦酸對(duì)肺腺癌A549細(xì)胞的作用及其機(jī)制的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

9 許婷;生物標(biāo)志物預(yù)測不可手術(shù)非小細(xì)胞肺癌放化療療效、毒性及生存的研究[D];中南大學(xué);2013年

10 侯濤;二甲雙胍對(duì)肺腺癌細(xì)胞系PC9、PC9/GR增殖抑制、凋亡誘導(dǎo)及吉非替尼增敏作用的研究[D];中南大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 劉郁婧;Brartemicin衍生物的合成及抗腫瘤侵襲活性研究[D];山東大學(xué);2012年

2 荊玉明;慢病毒法建立表達(dá)外源基因的人前列腺癌穩(wěn)定細(xì)胞株[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

3 鄧雪紅;腹水草（爬巖紅）的化學(xué)成分及抗炎活性研究[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2013年

4 穆艷艷;NSCLC組織中長鏈非編碼MALAT-1 RNA的表達(dá)及臨床意義[D];河南大學(xué);2013年

5 周菁;67kDa層粘連蛋白受體在小細(xì)胞肺癌骨轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

6 周治中;GDF-15對(duì)樹突狀細(xì)胞成熟和功能的影響[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

7 黃旭方;抗前列腺癌雙特異性抗體的構(gòu)建、表達(dá)、純化及其活性鑒定的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

8 梁博;ZEB1、E-cadherin和Vimentin在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)及相關(guān)性研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

9 楊加鵬;云南宣威地區(qū)非小細(xì)胞肺癌中EML4-ALK融合基因研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2013年

10 陳龍;敲減長鏈非編碼RNA GAS5對(duì)人黑色素瘤A375細(xì)胞功能的影響及其機(jī)制初探[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：2463556