【摘要】：目的： 明確HSPC111在前列腺癌中的表達(dá)情況及其對(duì)前列腺癌細(xì)胞體外生物學(xué)行為的影響,探討HSPC111在前列腺癌進(jìn)展中的作用。 方法： 運(yùn)用RT-qPCR方法檢測(cè)HSPC111在前列腺癌和前列腺增生組織中的表達(dá)量；利用RT-qPCR及Western Blot檢測(cè)HSPC111在正常前列腺細(xì)胞系RWPE-1以及前列腺癌細(xì)胞系LNCaP和PC3中的表達(dá)量；構(gòu)建含HSPC111短發(fā)卡RNA(shRNA)的慢病毒載體,轉(zhuǎn)染PC3細(xì)胞,經(jīng)嘌呤霉素篩選及挑選單克隆后獲得穩(wěn)定低表達(dá)HSPC111的PC3細(xì)胞株,并利用RT-qPCR及Western Blot驗(yàn)證轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中HSPC111的表達(dá)量；運(yùn)用細(xì)胞計(jì)數(shù)法和MTT法檢測(cè)HSPC111低表達(dá)PC3細(xì)胞的增殖能力,利用Transwell法檢測(cè)HSPC111低表達(dá)PC3細(xì)胞侵襲能力,磷脂酰絲氨酸外翻分析(Annexin V)檢測(cè)HSPC111低表達(dá)PC3細(xì)胞的凋亡情況；通過(guò)測(cè)定細(xì)胞內(nèi)蛋白含量檢測(cè)HSPC111異常表達(dá)對(duì)細(xì)胞蛋白合成的影響。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果： 與前列腺增生組織相比,HSPC111在前列腺癌組織中高表達(dá)；與正常前列腺細(xì)胞系RWPE-1相比,HSPC111在前列腺癌細(xì)胞系LNCaP及PC3中高表達(dá),而LNCaP與PC3之間無(wú)明顯差異；利用含HSPC111特異性shRNA的慢病毒載體轉(zhuǎn)染PC3細(xì)胞可建立HSPC111穩(wěn)定低表達(dá)的細(xì)胞；降低內(nèi)源性HSPC111表達(dá)可抑制細(xì)胞體外增殖；降低內(nèi)源性HSPC111表達(dá)可抑制細(xì)胞侵襲能力；降低內(nèi)源性HSPC111表達(dá)可促進(jìn)細(xì)胞凋亡；降低內(nèi)源性HSPC111表達(dá)可抑制細(xì)胞蛋白合成。 結(jié)論： HSPC111異常表達(dá)可改變前列腺癌細(xì)胞的體外生物學(xué)行為,且與前列腺癌進(jìn)展密切相關(guān)。我們認(rèn)為抑制HSPC111表達(dá)對(duì)控制前列腺癌增殖進(jìn)展是一個(gè)可行的治療策略。
[Abstract]:Aim: to investigate the expression of HSPC111 in prostate cancer and its effect on the biological behavior of prostate cancer cells in vitro, and to explore the role of HSPC111 in the progression of prostate cancer. Methods: RT-qPCR method was used to detect the expression of HSPC111 in prostate cancer and benign prostatic hyperplasia, RT-qPCR and Western Blot were used to detect the expression of HSPC111 in normal prostate cell line RWPE-1 and prostate cancer cell line LNCaP and PC3. The lentivirus vector containing HSPC111 short hairpin RNA (shRNA) was constructed and transfected into PC3 cells. PC3 cell lines with low expression of HSPC111 were obtained by puromycin selection and monoclonal selection. The expression of HSPC111 in transfected cells was verified by RT-qPCR and Western Blot. The proliferative ability of PC3 cells with low expression of HSPC111 was detected by cell counting method and MTT method, the invasive ability of PC3 cells with low expression of HSPC111 was detected by Transwell method, and the apoptosis of PC3 cells with low expression of HSPC111 by (Annexin V) was detected by phosphatidyl serine valgus analysis. The effect of abnormal expression of HSPC111 on cell protein synthesis was detected by measuring intracellular protein content. All the experimental data were analyzed by SPSS18.0 software. Results: compared with benign prostatic hyperplasia, HSPC111 was highly expressed in prostate cancer tissue, HSPC111 was higher in LNCaP and PC3 than that in normal prostate cell line RWPE-1, but there was no significant difference between LNCaP and PC3. PC3 cells were transfected with lentiviral vector containing HSPC111-specific shRNA to establish stable and low-expression cells of HSPC111, lower expression of endogenous HSPC111 could inhibit cell proliferation in vitro, lower expression of endogenous HSPC111 could inhibit invasion ability of cells, and lower expression of endogenous HSPC111 could inhibit invasion ability of cells. Down-regulation of endogenous HSPC111 expression can promote cell apoptosis and decrease endogenous HSPC111 expression can inhibit cell protein synthesis. Conclusion: the abnormal expression of HSPC111 can change the biological behavior of prostate cancer cells in vitro, and it is closely related to the progression of prostate cancer. We believe that the inhibition of HSPC111 expression is a feasible therapeutic strategy to control the progression of prostate cancer proliferation.
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R737.25

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2440422