【摘要】：第一部分 豚鼠前列腺ICC介導(dǎo)交感神經(jīng)信號的形態(tài)學(xué)研究 實驗1：前列腺ICC與神經(jīng)和平滑肌的超微形態(tài)學(xué)聯(lián)系 目的：觀察前列腺ICC超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)以及與前列腺神經(jīng)、平滑肌細(xì)胞之間的超微結(jié)構(gòu)聯(lián)系。 方法：制作豚鼠前列腺超薄組織切片,透射電鏡下依據(jù)超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)辨識ICC并觀察其與神經(jīng)、平滑肌細(xì)胞之間的超微結(jié)構(gòu)聯(lián)系。 結(jié)果：豚鼠前列腺組織內(nèi)存在符合典型ICC超微結(jié)構(gòu)鑒定標(biāo)準(zhǔn)的間質(zhì)細(xì)胞,這些前列腺ICC分布于腺上皮和平滑肌組織之間的間質(zhì)中以及平滑肌細(xì)胞之間,與相鄰的神經(jīng)末梢形成突觸樣連接,同一ICC可以通過突觸樣連接和多個的神經(jīng)末梢相鄰。ICC和周圍的平滑肌細(xì)胞密切接觸,之間存在縫隙連接和直接接觸等連接形式。 結(jié)論：豚鼠前列腺ICC具有介導(dǎo)前列腺神經(jīng)信號,調(diào)控平滑肌活動的超微形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。 第一部分 豚鼠前列腺I CC介導(dǎo)交感神經(jīng)信號的形態(tài)學(xué)研究 實驗2：前列腺ICC與交感神經(jīng)和平滑肌的組織形態(tài)學(xué)聯(lián)系 目的：觀察前列腺ICC和交感神經(jīng)以及平滑肌細(xì)胞之間的組織形態(tài)學(xué)聯(lián)系。 方法：制作豚鼠前列腺組織冰凍切片并進(jìn)行免疫熒光染色。使用c-Kit抗體標(biāo)記ICC,TH和DβH抗體標(biāo)記交感神經(jīng)纖維,a-actin抗體標(biāo)記平滑肌細(xì)胞,分別采用c-Kit和TH抗體,c-Kit和DβH抗體,c-Kit和a-actin抗體組合進(jìn)行免疫熒光雙染色標(biāo)記實驗。 結(jié)果：前列腺ICC分布于TH、DβH陽性的交感神經(jīng)周圍,多沿交感神經(jīng)纖維平行分布并和神經(jīng)纖維形成密切、廣泛的接觸。ICC的胞體和細(xì)胞突起緊貼相鄰的平滑肌細(xì)胞形成密切的接觸聯(lián)系。前列腺ICC自身表達(dá)交感神經(jīng)標(biāo)記物TH和DβH。 結(jié)論：豚鼠前列腺ICC具有介導(dǎo)前列腺交感神經(jīng)信號,調(diào)控平滑肌活動的組織形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)以及自身合成兒茶酚胺的潛能。 第二部分 豚鼠前列腺ICC介導(dǎo)交感神經(jīng)信號的功能學(xué)研究 實驗1：α1受體和Cx43等功能蛋白在前列腺ICC上的表達(dá) 目的：觀察α1腎上腺素受體和縫隙連接Cx43等功能蛋白在前列腺ICC上的表達(dá)。 方法：制作豚鼠前列腺組織冰凍切片,分離、培養(yǎng)前列腺ICC并進(jìn)行免疫熒光染色。分別采用c-Kit和α1受體抗體,c-Kit和Cx43抗體組合進(jìn)行免疫熒光雙染色標(biāo)記實驗。 結(jié)果：前列腺組織內(nèi)ICC上存在α1受體和Cx43等功能蛋白的表達(dá),其中ICC上α1受體的表達(dá)明顯強(qiáng)于周圍的平滑肌。分離、培養(yǎng)的前列腺ICC上同樣表達(dá)α1受體和Cx43。 結(jié)論：前列腺ICC為交感神經(jīng)的靶細(xì)胞,并可能借助細(xì)胞膜上的Cx43與周圍平滑肌細(xì)胞形成信息傳遞的通道。 第二部分 豚鼠前列腺ICC介導(dǎo)交感神經(jīng)信號的功能學(xué)研究 實驗2：交感神經(jīng)遞質(zhì)NE對前列腺ICC興奮性的影響 目的：觀察前列腺ICC對交感神經(jīng)遞質(zhì)NE的反應(yīng)性。 方法：體外分離、培養(yǎng)、鑒定前列腺ICC,采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄NE誘發(fā)ICC產(chǎn)生的電流,并進(jìn)一步觀察使用α受體阻滯劑酚妥拉明和a1受體阻滯劑哌唑嗪前后ICC細(xì)胞電流的變化。 結(jié)果：在前列腺ICC上沒有記錄到自發(fā)的內(nèi)向電流(n=6),當(dāng)電壓鉗制在-60mV時NE可以誘發(fā)前列腺ICC產(chǎn)生顯著的內(nèi)向電流(n=6).1μmolNE、10μmol NE、100μmolNE誘發(fā)的內(nèi)向電流為-106±29pA、-210±68pA和-368±113pA。誘發(fā)的內(nèi)向電流幅度和NE具有一定的量效關(guān)系(P0.01)。在使用a受體阻滯劑酚妥拉明和α1受體阻滯劑哌唑嗪后,NE未誘發(fā)ICC產(chǎn)生明顯的內(nèi)向電流。 結(jié)論：前列腺ICC為前列腺交感神經(jīng)信號的功能性靶細(xì)胞,α1受體為ICC介導(dǎo)交感神經(jīng)信號的功能學(xué)基礎(chǔ)。 第二部分 豚鼠前列腺I CC介導(dǎo)交感神經(jīng)信號的功能學(xué)研究 實驗3：前列腺I CC在交感神經(jīng)遞質(zhì)誘發(fā)平滑肌活動中的作用 目的：探索前列腺ICC在交感神經(jīng)遞質(zhì)誘發(fā)平滑肌活動中的作用。方法：制作前列腺平滑肌肌條,將肌條固定于灌流槽中,記錄NE誘發(fā)的前列腺肌條收縮幅度和頻率,以及加入Glivec后收縮幅度和頻率的變化。 結(jié)果：在體外NE(50μmol/L)可以誘發(fā)前列腺肌條產(chǎn)生明顯的收縮活動,收縮幅度為0.98±0.16g,收縮頻率為2.54±0.28次/分。使用Glivec后肌條收縮幅度顯著下降,50μmol/L組為0.56±0.07g(P0.01),200μ mol/L組為0.25±0.05g(P0.01)；收縮頻率50μ mol/L組為2.67±0.32次／分(P0.05),200μ mol/L組為2.75±0.31次／分(P0.05),較Glivec使用前無顯著變化。 結(jié)論：ICC可能參與了前列腺內(nèi)交感神經(jīng)信號的傳遞以及平滑肌的活動的調(diào)控。
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【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R697.3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2428031