【摘要】：近年來，我國每年由于各種原因?qū)е碌男略瞿I功能衰竭病例約200萬人，雖然腎移植是治療終末期腎功能衰竭的理想方法，而能否長期維持移植腎有功能的存活，仍然是亟待解決的重要問題。 目前國內(nèi)外，臨床上普遍采用環(huán)孢素A、他克莫司及雷帕霉素等免疫抑制劑作為腎移植術(shù)后抑制排斥反應(yīng)發(fā)生的藥物。這些抗排斥藥物的作用機(jī)理均是通過非特異性地抑制T細(xì)胞的活化和增殖，來控制排斥反應(yīng)的發(fā)生。雖然在臨床上取得了明顯的效果，但由于是對所有T細(xì)胞功能的全面抑制，作用缺乏選擇性，副作用大。 IL-17由CD4+T亞群、CD8+T亞群、細(xì)胞和中性粒細(xì)胞等多種細(xì)胞分泌，為重要的促炎因子，可誘導(dǎo)人表皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞分泌IL-6、IL-8和G-CSF；促進(jìn)人成纖維細(xì)胞表達(dá)ICAM-1；募集中性粒細(xì)胞和促進(jìn)血管生成。現(xiàn)有研究認(rèn)為IL-17在器官移植術(shù)后急性排斥反應(yīng)中有著重要作用。 在移植排斥反應(yīng)中，移植抗原與抗體的結(jié)合進(jìn)一步激活補(bǔ)體系統(tǒng)。作為補(bǔ)體系統(tǒng)的樞紐分子，C5被激活后，可裂解形成C5a和C5b。C5a是一種重要的炎癥介質(zhì)和趨化因子，通過與靶細(xì)胞表面C5aR的結(jié)合，發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)。盡管補(bǔ)體在移植排斥中的重要作用已有不少報道，但對于小分子C5a在臨床移植排斥中的作用機(jī)制并不清楚。 目的： 探討腎臟移植排斥反應(yīng)發(fā)生中，白細(xì)胞介素-17與補(bǔ)體C5活化產(chǎn)物C5a的表達(dá)，以及兩者之間可能的相互調(diào)節(jié)作用。 方法： ①首先通過流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry, FCM)比較同種異基因腎移植手術(shù)前后患者外周血細(xì)胞中IL-17+T細(xì)胞的百分率。 ②采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA)比較同種異基因腎移植手術(shù)前后患者血清補(bǔ)體C5a的水平。 ③采用免疫組織化學(xué)法比較發(fā)生排斥反應(yīng)腎組織與正常腎組織中，IL-17的表達(dá)和補(bǔ)體活化產(chǎn)物C5b-9的沉積情況。 ④免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測人腎小管上皮細(xì)胞系HK2細(xì)胞C5aR的表達(dá)。 ⑤免疫細(xì)胞化學(xué)法和流式細(xì)胞術(shù)比較重組人C5a誘導(dǎo)前后，人腎小管上皮細(xì)胞系HK2細(xì)胞中IL-17產(chǎn)生的差異。 結(jié)果： ①通過流式細(xì)胞技術(shù)檢測腎臟移植前后患者外周血中IL-17+T細(xì)胞百分率，發(fā)現(xiàn)接受同種異基因腎臟移植患者外周血標(biāo)本中，部分患者術(shù)后3天IL-17+T細(xì)胞百分率較術(shù)前明顯升高。 ②ELISA結(jié)果顯示，接受同種異基因腎移植術(shù)后7天時，患者血清C5a水平較術(shù)前有顯著上升。 ③與正常腎臟組織相比，發(fā)生排斥反應(yīng)腎臟組織IL-17的表達(dá)與補(bǔ)體活化產(chǎn)物C5b-9的沉積均明顯增加，且兩者的表達(dá)方式相似，均主要集中于腎小管區(qū)域。 ④免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示，人腎小管上皮細(xì)胞系HK2細(xì)胞固有性表達(dá)C5aR。 ⑤重組人C5a刺激HK2細(xì)胞48h后，IL-17的表達(dá)水平明顯上調(diào)，表明C5a可通過與固有性表達(dá)在腎小管上皮細(xì)胞上的C5aR結(jié)合，直接作用于腎小管上皮細(xì)胞調(diào)節(jié)其IL-17的產(chǎn)生。 結(jié)論： 移植排斥反應(yīng)中，補(bǔ)體C5的活化產(chǎn)物C5a可通過與腎小管上皮細(xì)胞上C5aR結(jié)合，正向調(diào)節(jié)腎小管上皮細(xì)胞IL-17的產(chǎn)生，進(jìn)而促進(jìn)同種異基因移植排斥反應(yīng)的發(fā)生。該研究結(jié)果可為補(bǔ)體抑制劑治療移植相關(guān)疾病的使用以及發(fā)展選擇性的T細(xì)胞抑制藥物提供進(jìn)一步的理論依據(jù)。
[Abstract]:In recent years, there are about 2 million new cases of renal failure due to various causes, although kidney transplantation is an ideal method for the treatment of end-stage renal failure, and the long-term maintenance of the function of the transplanted kidney is an important problem to be solved. At present, at home and abroad, the clinical application of the immunosuppressants such as ciclosporin A, tamosmin and rapamycin as a drug for inhibiting the rejection after renal transplantation The mechanism of action of these anti-rejection drugs is to control the generation of rejection by non-specific inhibition of the activation and proliferation of T-cells. has a clear effect on all T cell functions, a lack of selectivity, side effects, Large. IL-17 is secreted by various cells such as CD4 + T subpopulations, CD8 + T subpopulations, cells and neutrophils. It is an important pro-inflammatory factor that can induce human epidermal cells, endothelial cells and fibroblasts to secrete IL-6, IL-8 and G-CSF, promote the expression of ICAM-1 in human fibroblasts, and raise neutrophils and promote blood. The results suggest that IL-17 has an important role in the acute rejection of organ transplantation. To act. In the graft rejection, the combination of the graft antigen and the antibody is further induced The active complement system. As the hub molecule of the complement system, C5 is activated, and can be cleaved to form C5a and C5b. C5a is an important inflammatory mediator and a chemokine that will play its role by binding to the target cell surface C5aR. Biological effects. Although the important role of complement in transplant rejection has been reported, the role of small molecule C5a in clinical transplant rejection the system does not Objective: To study the expression of interleukin-17 and complement C5 activation product C5a in the development of renal transplant rejection. possible Methods: The peripheral blood cells of the patients before and after renal transplantation were compared by flow cytometry (FCM) and flow cytometry (FCM). The percentage of IL-17 + T cells was determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The level of serum complement C5a in the patients before and after the operation. and the deposition of the complement activation product C5b-9. Expression of C5aR in small-tube epithelial cell line HK2 cells. Human renal tubular cells were compared with the recombinant human C5a before and after C5a induction by immunohistochemistry and flow cytometry. epithelioma The results showed that the percentage of IL-17 + T cells in peripheral blood of patients before and after kidney transplantation was detected by flow cytometry. The percentage of IL-17 + T cells increased significantly in 3 days after the operation. The results of the ELISA showed that the IL-17 + T cells received the same allogenic group. The level of C5a of the patient was significantly higher than that of the normal renal tissue at 7 days after renal transplantation. The expression of IL-17 in the renal tissue of the rejection reaction and the deposition of the complement activation product C5b-9 were compared with the normal renal tissue. The product is obviously increased, and the expression of the two is similar, and is mainly concentrated in the renal tubular region. The results of the cytochemistry showed that the expression of IL-17 was up-regulated after the HK2 cells were stimulated by C5a in the human renal tubular epithelial cell line HK2. The expression of IL-17 was up-regulated after the HK2 cells were stimulated by the recombinant human C5a. supracellular Conclusion: The C5a of the complement C5 can be combined with the C5aR on the renal tubular epithelial cells by the combination of the C5aR and directly on the renal tubular epithelial cells. Conclusion: The C5a of the complement C5 can be combined with the C5aR on the renal tubular epithelial cells. To regulate the production of IL-17 in renal tubular epithelial cells and to promote the occurrence of allograft rejection, the results of this study can be complement inhibition.
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R699.2

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本文編號：2421522