【摘要】：目的： 心血管疾病（cardiovascular disease，CVD）是慢性腎衰竭患者最常見的并發(fā)癥和最主要的致死原因，占慢性腎衰竭患者全因死亡的50%。血管彈性功能減低與慢性腎衰竭患者心血管死亡率相關(guān)，其與血管壁彈性蛋白的降解關(guān)系密切。多種蛋白酶可以降解彈性蛋白，其中主要是基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2），但目前關(guān)于慢性腎衰竭動脈彈性功能與MMP-2表達(dá)之間的關(guān)系尚不明確。本研究旨在通過檢測慢性腎衰竭大鼠主動脈彈性功能與相應(yīng)部位MMP-2表達(dá)，探討二者之間的關(guān)系，為臨床治療提供靶點。 方法： 1實驗大鼠 購自河北醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心的20只清潔級、健康、7周齡的雄性SD大鼠，于河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院動物中心屏障環(huán)境適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。 2分組及造模 分組將20只SD大鼠隨機分為3組，即正常對照組（6只），慢性腎衰竭組（7只），慢性腎衰竭血管鈣化組（7只）。 造模正常對照組：在實驗1-3周給予1.5%甲基纖維素6ml/kg每天灌胃，在4-8周給予1.5%甲基纖維素6ml/kg隔日灌胃；慢性腎衰竭組：在實驗1-3周給予100mg/ml的硫酸腺嘌呤懸濁液6ml/kg每天灌胃，在實驗4-8周給予1.5%甲基纖維素6ml/kg隔日灌胃；慢性腎衰竭血管鈣化組：在實驗1-3周給予100mg/ml的硫酸腺嘌呤6ml/kg每天灌胃，在實驗4-8周給予骨化三醇200ng/kg隔日灌胃。 3實驗方法 對大鼠腎臟組織進(jìn)行HE染色，觀察腎臟結(jié)構(gòu)的病理改變，化驗血清尿素氮、肌酐，以判斷慢性腎衰竭大鼠模型是否建立成功。測量主動脈PWV，EVG染色觀察血管彈性纖維改變；主動脈MMP-2、cbfa1表達(dá)：對大鼠胸主動脈上段進(jìn)行免疫組化MMP-2、cbfa1染色，檢測三組血管MMP-2、cbfa1蛋白的表達(dá)情況；取胸主動脈下段用RT-PCR方法檢測血管壁核心結(jié)合因子a1（cbfa1）及MMP-2mRNA的表達(dá)情況；取胸主動脈中段進(jìn)行von Kossa染色檢測血管壁鈣化情況，取腹主動脈用鄰甲酚酞絡(luò)合酮比色法測定血管壁鈣含量情況。 4統(tǒng)計分析 用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件對所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，實驗結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x s）表示，兩組間均數(shù)比較用t檢驗，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析（ANOVA），用S-N-K檢驗（Student-Newman-Keuls，SNK）作多組間均數(shù)兩兩比較，相關(guān)分析符合雙變量正態(tài)分布作Pearson積差相關(guān)分析。P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果： 1慢性腎衰竭大鼠模型的構(gòu)建 腎臟病理染色：正常對照組腎小球、腎小管、間質(zhì)結(jié)構(gòu)正常，慢性腎衰竭組和慢性腎衰竭血管鈣化組腎小球發(fā)生硬化，腎小管內(nèi)可見結(jié)晶。 與正常對照組比較，慢性腎衰竭組、慢性腎衰竭血管鈣化組血肌酐明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，分別為82.3±4.73vs32.0±2.0，P0.05；87.6±3.18vs32.0±2.0，P0.05；與正常對照組比較，慢性腎衰竭組、慢性腎衰竭血管鈣化組血尿素氮明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，分別為18.1±1.60vs7.1±0.43，P0.05；19.0±1.78vs7.1±0.43，P0.05；與慢性腎衰竭組比較，慢性腎衰竭血管鈣化組血肌酐、尿素氮升高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義，分別為87.6±3.18vs82.3±4.73，P＞0.05；19.0±1.78vs18.1±1.60，P＞0.05。 2慢性腎衰竭大鼠主動脈鈣化情況 von Kossa染色發(fā)現(xiàn)慢腎衰血管鈣化組發(fā)生明顯的主動脈鈣化，但是慢性腎衰竭組和正常對照組均未發(fā)生主動脈鈣化。與正常對照組相比，慢性腎衰竭組主動脈鈣含量升高，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，為7.17±2.54vs6.46±2.14，P＞0.05；慢性腎衰竭血管鈣化組主動脈鈣含量顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，為16.88±6.40vs6.46±2.14，P＜0.05。 3慢性腎衰竭大鼠主動脈彈性纖維的改變 EVG染色結(jié)果顯示，與正常對照組比較，慢性腎衰竭組和慢腎衰竭血管鈣化組主動脈彈性纖維變直，彈性纖維間的微纖維減少；與慢性腎衰竭組比較，慢性腎衰竭血管鈣化組主動脈彈性纖維數(shù)量明顯較少，，鈣化處發(fā)生斷裂。 4慢性腎衰竭大鼠主動脈彈性功能的改變 與正常對照組比較，慢性腎衰竭組主動脈PWV、慢性腎衰竭血管鈣化組主動脈PWV值均明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，分別為5.90±0.022vs2.87±0.006，P0.05；9.032±0.041vs2.87±0.006，P0.05；與慢性腎衰竭組比較，慢性腎衰竭血管鈣化組主動脈PWV值明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，為9.032±0.041vs5.90±0.022，P0.05。 5慢性腎衰竭大鼠主動脈cbfa1及MMP-2的表達(dá) 與正常對照組比較，慢性腎衰竭組及慢性腎衰竭血管鈣化組主動脈cbfa1及MMP-2mRNA的表達(dá)均明顯升高（P0.05）；與慢性腎衰竭組比較，慢性腎衰竭血管鈣化組主動脈cbfa1及MMP-2mRNA的表達(dá)明顯升高（P0.05）。與正常對照組比較，慢性腎衰竭組及慢性腎衰竭血管鈣化組主動脈MMP-2蛋白的表達(dá)明顯升高（P0.05），與慢性腎衰竭組相比，慢性腎衰竭血管鈣化組主動脈MMP-2蛋白的表達(dá)明顯升高（P0.05）。 6慢性腎衰竭大鼠主動脈PWV改變與相應(yīng)部位血管MMP-2及鈣含量的關(guān)系 主動脈PWV與主動脈MMP-2蛋白表達(dá)做相關(guān)分析呈正相關(guān)（r=0.754，P=0.02）。主動脈PWV與主動脈鈣含量做相關(guān)分析呈正相關(guān)（r=0.736，P=0.03）。主動脈MMP-2mRNA與主動脈cbfa1mRNA表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.924，P=0.000）。 結(jié)論： 1慢性腎衰竭大鼠主動脈彈性功能下降，與相應(yīng)部位MMP-2的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)； 2慢性腎衰竭大鼠主動脈彈性功能下降的可能的機制之一是MMP-2通過降解彈性蛋白，進(jìn)而促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞發(fā)生表型轉(zhuǎn)化所致。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R692.5

【參考文獻(xiàn)】

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2 徐婭楠;趙亞珍;浦奎;;冠心病患者血漿RANTES及MMP-9水平及與冠狀動脈狹窄的相關(guān)性研究[J];中國循證心血管醫(yī)學(xué)雜志;2011年05期

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本文編號：2417080