【摘要】：研究背景： 去勢抵抗型前列腺癌(Castration resistant prostate cancer, CRPC)是目前臨床治療的難點和基礎研究的熱點,多西他賽是目前臨床上CRPC化療的一線藥物3。其作用機制是：多西他賽進入細胞后能優(yōu)先結(jié)合β-微管蛋白,導致微管在缺少GTP和其他一些輔助蛋白因子時發(fā)生聚合,這種靜態(tài)的聚合破壞了細胞正常的有絲分裂過程,并使細胞分裂停滯于G2/M期,最終將導致細胞凋亡。此外,多西他賽還能誘導Bcl-2蛋白的磷酸化,最終導致腫瘤細胞凋亡。但令人遺憾的是臨床上使用多西他賽化療,腫瘤緩解率僅為12.1%4,中位生存期僅延長2.5個月。且由于遺傳性或獲得性耐藥的產(chǎn)生,化療敏感性逐漸降低5。這種耐藥性的產(chǎn)生的機制還不明確,因而也成為研究的熱點。 睪丸孤核受體4(Testicular receptor4, TR4)是類固醇家族中的一員,TR4是NR2C2基因編碼的一種轉(zhuǎn)錄因子,又名TAK16。TR4廣泛分布于體內(nèi)各器官。目前發(fā)現(xiàn)的TR4靶基因有很多,如脂質(zhì)蛋白A,CD36,磷酸烯醇式丙酮酸激酶等。大量的研究表明TR4與脂質(zhì)代謝、糖代謝,中樞神經(jīng)發(fā)育、小腦發(fā)育、紅細胞代謝等重要生理功能密切相關(guān)。前期研究還發(fā)現(xiàn),TR4陰性細胞(TR4-/-,來源于TR4基因敲除小鼠)與正常細胞(來源于野生型小鼠)相比,氧化應激、基因修復等功能受損7-11,而氧化應激、基因修復等功能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。在我們的預實驗中,經(jīng)過多西他賽處理的前列腺癌細胞PC3細胞TR4表達水平升高,提示了TR4與多西他賽化療可能存在關(guān)聯(lián),但國內(nèi)外較少有TR4與前列腺癌多西他賽相關(guān)方面的研究報道。 研究目的： 本項研究主要的目的是通過細胞及臨床組織兩個層面明確TR4與前列腺癌多西他賽化療敏感性之間的關(guān)系,并探討其可能的機制。研究方法： 1.運用慢病毒感染技術(shù)建立不同TR4表達水平的前列腺癌細胞系。采用MTT法檢測不同TR4表達水平的PC3細胞藥物半數(shù)致死量(half maximal inhibitory concentration,IC50) 2.采用MTT法檢測不同TR4表達水平的PC3細胞在多西他賽的作用下,不同時間點細胞的存活情況。 3.采用凋亡檢測法檢測在多西他賽作用下,TR4表達水平對細胞凋亡的影響。 4.運用免疫組化(Immunohistochemistry,IHC)技術(shù)檢測接受多西他賽化療后不同預后前列腺癌穿刺標本TR4表達水平,觀察TR4表達水平與前列腺癌化療效果之間的聯(lián)系,在臨床層面驗證細胞實驗的結(jié)果。研究結(jié)果： 1.運用慢病毒感染技術(shù),我們建立了TR4基因敲除前列腺癌細胞系(PC3scr/siTR4)和TR4基因過表達細胞系(PC3vector/TR4).MTT實驗表明,在TR4敲除細胞系,PC3siTR4相對PC3scr細胞多西他賽的IC50下降,TR4過表達細胞PC3TR4相對PC3vector細胞多西他賽IC50升高。 2.生長曲線實驗表明,在多西他賽持續(xù)作用下,PC3siTR4存活情況不及PC3scr。與此相對應的是,在多西他賽持續(xù)作用下,PC3TR4存活情況優(yōu)于PC3vector. 3.凋亡檢測發(fā)現(xiàn),在多西他賽作用下,TR4敲除細胞凋亡率升高,TR4過表達細胞凋亡率降低。 4.免疫組化結(jié)果表明,TR4表達水平高低與多西他賽化療效果負相關(guān),在化療效果差(PSA下降50%)的病人中,TR4表達水平相對較高；在化療效果好(PSA下降50%)的病人中,TR4表達水平相對較低。 結(jié)論： TR4降低了前列腺癌多西他賽化療敏感性,其可能的作用機制為調(diào)節(jié)凋亡。TR4有可能成為預測前列腺癌多西他賽化療效果的標志物。多西他賽聯(lián)合TR4靶向治療可能成為治療前列腺癌的新手段。
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【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R737.25

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 葉定偉;朱一平;;激素抵抗性前列腺癌的治療選擇[J];現(xiàn)代泌尿外科雜志;2011年01期

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本文編號：2293049