【摘要】：賴氨酸特異性組蛋白去甲基化酶(Lysine specific demethylase 1,LSD1)屬于單胺氧化酶家族,它的活性依賴于黃素腺嘌呤二核苷酸(Flavin adenine dinucleotide,FAD),能夠特異性使單甲基化和二甲基化H3K4和H3K9位點(diǎn)上的甲基基團(tuán)去除,從而調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄活性。染色質(zhì)是真核細(xì)胞遺傳物質(zhì)的載體。核小體是構(gòu)成它的基本結(jié)構(gòu)單位,是由DNA和組蛋白共同構(gòu)成的。每個組蛋白通常含有一個由核小體DNA包繞形成的球形芯和一個N-末端尾部,N-末端尾的核心/DNA結(jié)構(gòu)域受到多種翻譯后修飾的調(diào)節(jié),例如乙�；�、磷酸化、甲基化和泛素化等。在2004年以前,人們一直認(rèn)為組蛋白的乙�；�、磷酸化和泛素化等都是可逆的,但是組蛋白甲基化是不可逆的,而第一個組蛋白去甲基化酶LSD1的出現(xiàn)改變了人們的這一觀點(diǎn)。LSD1在哺乳動物的發(fā)育過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用,它參與許多生物學(xué)過程,如細(xì)胞分化、基因活化和基因抑制等。研究發(fā)現(xiàn),LSD1在多種腫瘤中表達(dá)增高,也包括前列腺癌。在前列腺癌中,LSD1通過影響細(xì)胞轉(zhuǎn)錄、DNA甲基化和P53的功能,來促進(jìn)腫瘤形成。LSD1的高表達(dá)不僅預(yù)示著前列腺癌的術(shù)后可能復(fù)發(fā)率增高,還預(yù)示著療效差。第一部分LSD1和E-cadherin在前列腺癌中的表達(dá)關(guān)系目的：為了探討LSD1和E-cadherin在前列腺癌中的表達(dá)、兩者之間表達(dá)關(guān)系以及它們跟前列腺癌預(yù)后的聯(lián)系。方法：用免疫組織化學(xué)方法檢測LSD1和E-cadherin在良性前列腺增生組織和前列腺癌組織中的表達(dá),然后用相關(guān)性分析分析LSD1和E-cadherin兩者之間的表達(dá)關(guān)系。同時,我們用或不用LSD1抑制劑優(yōu)降寧處理雄激素依賴性前列腺癌細(xì)胞株LNCap,然后用免疫印跡的方面檢測優(yōu)降寧處理前后LNCap細(xì)胞內(nèi)LSD1和E-cadherin的表達(dá)水平。結(jié)果：跟良性前列腺增生組織比較,LSD1在前列腺癌組織中表達(dá)明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；同時,LSD1在前列腺癌中的表達(dá)跟Gleason評分、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和預(yù)后不良呈明顯正相關(guān)(P0.05)。然而,跟良性前列腺增生組織比較,E-cadherin在前列腺癌組織中表達(dá)明顯減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；同時,E-cadherin在前列腺癌中的表達(dá)跟Gleason評分、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和預(yù)后不良呈明顯負(fù)相關(guān)(P0.05)。我們進(jìn)一步用相關(guān)性分析分析LSD1和E-cadherin兩者之間在良性前列腺增生組織和前列腺癌組織中的表達(dá)關(guān)系發(fā)現(xiàn),兩者呈明顯的負(fù)相關(guān)(rs=-0.486, P=0.001)。LSD1高表達(dá)和E-cadherin氐表達(dá)預(yù)示前列腺癌患者兩年內(nèi)更容易進(jìn)展為去勢抵抗性前列腺癌以及較低的五年生存率(P0.05)。另外,我們的細(xì)胞實驗發(fā)現(xiàn),用優(yōu)降寧抑制LNCap細(xì)胞內(nèi)LSD1活性,可以上調(diào)E-cadherin蛋白的表達(dá)水平。結(jié)論：LSD1在前列腺癌中高表達(dá),并跟Gleason評分、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和預(yù)后不良呈正相關(guān)；而E-cadherin在前列腺癌中低表達(dá),并跟Gleason評分、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和預(yù)后不良呈負(fù)相關(guān)。LSD1和E-cadherin的表達(dá)在前列腺癌組織中呈負(fù)相關(guān)。LSD1高表達(dá)聯(lián)合E-cadherin低表達(dá)可能能作為判斷前列腺癌進(jìn)展和轉(zhuǎn)移的一個標(biāo)志。抑制LSD1活性可能為治療前列腺癌提供新的治療方向。第二部分LSD1抑制劑優(yōu)降寧抑制前列腺癌EMT發(fā)生并延緩前列腺癌的進(jìn)展目的：探討LSD1在前列腺癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程以及向去勢抵抗性前列腺進(jìn)展中發(fā)揮的作用。方法：首先,我們用優(yōu)降寧處理激素依賴性前列腺癌細(xì)胞株LNCap進(jìn)行體外實驗,用免疫印跡的方法檢測H3K4me1、H3K4me2、H3K9me1、H3K9me2、 AR、PSA、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin等蛋白的表達(dá)水平；用免疫熒光的方法檢測優(yōu)降寧處理前后LNCap細(xì)胞E-cadherin的表達(dá)改變；用transwel細(xì)胞侵襲和遷移實驗檢測優(yōu)降寧處理前后LNCap細(xì)胞的侵襲能力改變。另外,我們用NOD/SCID小鼠皮下種植LNCap細(xì)胞建立皮下腫瘤模型,再切除小鼠的雙側(cè)睪丸建立去勢抵抗性前列腺癌模型；用免疫印跡的方法檢測LSD1、H3K4me1、 H3K4me2、H3K9me1、H3K9me2、AR、PSA、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin等蛋白的表達(dá)水平；觀察優(yōu)降寧處理對腫瘤生長的影響和對去勢后小鼠血清PSA變化的影響。結(jié)果： 在體外,優(yōu)降寧降低LNCap細(xì)胞的侵襲和遷移能力；優(yōu)降寧處理LNCap細(xì)胞后抑制LSD1功能,減少H3K4me1、H3K4me2、H3K9me1、 H3K9me2的表達(dá)；優(yōu)降寧處理LNCap細(xì)胞后不改變AR的表達(dá),但是減少PSA的表達(dá)；優(yōu)降寧處理LNCap細(xì)胞后,增加E-cadherin蛋白的表達(dá),同時減少N-cadherin蛋白和Vimentin蛋白的表達(dá),從而抑制上皮基質(zhì)轉(zhuǎn)化過程。在動物模型體內(nèi)實驗,LSD1蛋白的表達(dá)隨著前列腺癌向激素抵抗性前列腺癌進(jìn)展而增加；優(yōu)降寧處理小鼠后抑制LSD1功能,減少H3K4me1、H3K4me2、H3K9me1、 H3K9me2的表達(dá)；優(yōu)降寧處理小鼠后不改變AR的表達(dá),但是減少PSA的表達(dá)；優(yōu)降寧處理小鼠后,增加E-cadherin蛋白的表達(dá),同時減少N-cadherin蛋白和Vimentin蛋白的表達(dá),從而抑制上皮基質(zhì)轉(zhuǎn)化過程。結(jié)論：抑制LSD1功能能夠抑制前列腺癌的侵襲、轉(zhuǎn)移能力,抑制上皮基質(zhì)轉(zhuǎn)化過程,LSD1抑制劑也許可以作為抗雄激素治療治療局部進(jìn)展性前列腺癌和轉(zhuǎn)移性前列腺癌的的輔助治療。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.25

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本文編號：2283981