【摘要】：賴氨酸特異性組蛋白去甲基化酶(Lysine specific demethylase 1,LSD1)屬于單胺氧化酶家族,它的活性依賴于黃素腺嘌呤二核苷酸(Flavin adenine dinucleotide,FAD),能夠特異性使單甲基化和二甲基化H3K4和H3K9位點上的甲基基團去除,從而調節(jié)靶基因的轉錄活性。染色質是真核細胞遺傳物質的載體。核小體是構成它的基本結構單位,是由DNA和組蛋白共同構成的。每個組蛋白通常含有一個由核小體DNA包繞形成的球形芯和一個N-末端尾部,N-末端尾的核心/DNA結構域受到多種翻譯后修飾的調節(jié),例如乙�；�、磷酸化、甲基化和泛素化等。在2004年以前,人們一直認為組蛋白的乙�；⒘姿峄头核鼗榷际强赡娴�,但是組蛋白甲基化是不可逆的,而第一個組蛋白去甲基化酶LSD1的出現(xiàn)改變了人們的這一觀點。LSD1在哺乳動物的發(fā)育過程中發(fā)揮著至關重要的作用,它參與許多生物學過程,如細胞分化、基因活化和基因抑制等。研究發(fā)現(xiàn),LSD1在多種腫瘤中表達增高,也包括前列腺癌。在前列腺癌中,LSD1通過影響細胞轉錄、DNA甲基化和P53的功能,來促進腫瘤形成。LSD1的高表達不僅預示著前列腺癌的術后可能復發(fā)率增高,還預示著療效差。第一部分LSD1和E-cadherin在前列腺癌中的表達關系目的：為了探討LSD1和E-cadherin在前列腺癌中的表達、兩者之間表達關系以及它們跟前列腺癌預后的聯(lián)系。方法：用免疫組織化學方法檢測LSD1和E-cadherin在良性前列腺增生組織和前列腺癌組織中的表達,然后用相關性分析分析LSD1和E-cadherin兩者之間的表達關系。同時,我們用或不用LSD1抑制劑優(yōu)降寧處理雄激素依賴性前列腺癌細胞株LNCap,然后用免疫印跡的方面檢測優(yōu)降寧處理前后LNCap細胞內LSD1和E-cadherin的表達水平。結果：跟良性前列腺增生組織比較,LSD1在前列腺癌組織中表達明顯增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)；同時,LSD1在前列腺癌中的表達跟Gleason評分、遠處轉移和預后不良呈明顯正相關(P0.05)。然而,跟良性前列腺增生組織比較,E-cadherin在前列腺癌組織中表達明顯減少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)；同時,E-cadherin在前列腺癌中的表達跟Gleason評分、遠處轉移和預后不良呈明顯負相關(P0.05)。我們進一步用相關性分析分析LSD1和E-cadherin兩者之間在良性前列腺增生組織和前列腺癌組織中的表達關系發(fā)現(xiàn),兩者呈明顯的負相關(rs=-0.486, P=0.001)。LSD1高表達和E-cadherin氐表達預示前列腺癌患者兩年內更容易進展為去勢抵抗性前列腺癌以及較低的五年生存率(P0.05)。另外,我們的細胞實驗發(fā)現(xiàn),用優(yōu)降寧抑制LNCap細胞內LSD1活性,可以上調E-cadherin蛋白的表達水平。結論：LSD1在前列腺癌中高表達,并跟Gleason評分、遠處轉移和預后不良呈正相關；而E-cadherin在前列腺癌中低表達,并跟Gleason評分、遠處轉移和預后不良呈負相關。LSD1和E-cadherin的表達在前列腺癌組織中呈負相關。LSD1高表達聯(lián)合E-cadherin低表達可能能作為判斷前列腺癌進展和轉移的一個標志。抑制LSD1活性可能為治療前列腺癌提供新的治療方向。第二部分LSD1抑制劑優(yōu)降寧抑制前列腺癌EMT發(fā)生并延緩前列腺癌的進展目的：探討LSD1在前列腺癌上皮間質轉化過程以及向去勢抵抗性前列腺進展中發(fā)揮的作用。方法：首先,我們用優(yōu)降寧處理激素依賴性前列腺癌細胞株LNCap進行體外實驗,用免疫印跡的方法檢測H3K4me1、H3K4me2、H3K9me1、H3K9me2、 AR、PSA、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin等蛋白的表達水平；用免疫熒光的方法檢測優(yōu)降寧處理前后LNCap細胞E-cadherin的表達改變；用transwel細胞侵襲和遷移實驗檢測優(yōu)降寧處理前后LNCap細胞的侵襲能力改變。另外,我們用NOD/SCID小鼠皮下種植LNCap細胞建立皮下腫瘤模型,再切除小鼠的雙側睪丸建立去勢抵抗性前列腺癌模型；用免疫印跡的方法檢測LSD1、H3K4me1、 H3K4me2、H3K9me1、H3K9me2、AR、PSA、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin等蛋白的表達水平；觀察優(yōu)降寧處理對腫瘤生長的影響和對去勢后小鼠血清PSA變化的影響。結果： 在體外,優(yōu)降寧降低LNCap細胞的侵襲和遷移能力；優(yōu)降寧處理LNCap細胞后抑制LSD1功能,減少H3K4me1、H3K4me2、H3K9me1、 H3K9me2的表達；優(yōu)降寧處理LNCap細胞后不改變AR的表達,但是減少PSA的表達；優(yōu)降寧處理LNCap細胞后,增加E-cadherin蛋白的表達,同時減少N-cadherin蛋白和Vimentin蛋白的表達,從而抑制上皮基質轉化過程。在動物模型體內實驗,LSD1蛋白的表達隨著前列腺癌向激素抵抗性前列腺癌進展而增加；優(yōu)降寧處理小鼠后抑制LSD1功能,減少H3K4me1、H3K4me2、H3K9me1、 H3K9me2的表達；優(yōu)降寧處理小鼠后不改變AR的表達,但是減少PSA的表達；優(yōu)降寧處理小鼠后,增加E-cadherin蛋白的表達,同時減少N-cadherin蛋白和Vimentin蛋白的表達,從而抑制上皮基質轉化過程。結論：抑制LSD1功能能夠抑制前列腺癌的侵襲、轉移能力,抑制上皮基質轉化過程,LSD1抑制劑也許可以作為抗雄激素治療治療局部進展性前列腺癌和轉移性前列腺癌的的輔助治療。
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【學位授予單位】：武漢大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.25

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本文編號：2283981