發(fā)布時間：2018-10-09 18:38

【摘要】：目的:探究中介素(Intermedin,IMD)對大鼠腎小球內皮細胞(rRGEC)缺氧損傷的影響及其可能的機制。方法:(1)實驗分組:將rRGEC傳代培養(yǎng),選取生長狀態(tài)良好的細胞,隨機分成正常組(N組),缺氧組(H組)及IMD組,N組置于二氧化碳培養(yǎng)箱內(5%CO2、37℃)培養(yǎng),H組與IMD組置于三氣培養(yǎng)箱內(90%N2、5%CO2、5%O2、37℃)缺氧培養(yǎng),按培養(yǎng)液中IMD的最終濃度將IMD組分為10-8mol/L(IMD1組)、10-7mol/L(IMD2組)、10-6mol/L(IMD3組)。6h后留取各組細胞及其培養(yǎng)液用于檢測。(2)相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)學特點。(3)流式細胞術分析細胞凋亡率。(4)Elisa法檢測細胞上清液中4-羥壬烯醛(4-HNE)、活性氧(ROS)及超氧化物歧化酶(SOD)含量。(5)tanswell聚碳酸酯膜小室內制備內皮細胞單層,并測其底室與頂室FITC-BSA熒光強度,以底室與頂室熒光強度比值的變化來表示細胞通透性變化。(6)實時定量PCR檢測各組細胞缺氧誘導因子1α(HIF-1α)及血管內皮生長因子(VEGF)mRNA的相對表達量。(7)免疫細胞化學法檢測細胞HIF-1α及VEGF蛋白的表達并進行半定量分析。結果:(1)細胞形態(tài)學改變:相差顯微鏡下,N組細胞生長狀態(tài)良好,無懸浮死亡細胞;H組細胞腫脹、懸浮死亡細胞較多;與H組相比,IMD1、IMD2、IMD3組細胞損害均減輕,懸浮死亡細胞較少,與N組接近。(2)細胞凋亡率的變化:與N組相比,IMD1、IMD2、IMD3組細胞凋亡率降低(P0.05);與H組相比,IMD1、IMD2、IMD3組細胞凋亡率均降低(P0.05)。(3)培養(yǎng)液上清中4-HNE、ROS、SOD的含量:與N組相比,H組細胞培養(yǎng)液上清中4-HNE、ROS升高,SOD降低(P0.05);與H組相比,IMD1、IMD2、IMD3組細胞培養(yǎng)液上清中4-HNE、ROS降低,SOD升高(P0.05)。(4)細胞通透性的改變:與N組相比,H組transwell聚碳酸酯膜小室的底室與頂室FITC-BSA熒光強度比值增加,細胞通透性增加(P0.05);與H組相比,IMD1、IMD2、IMD3組transwell聚碳酸酯膜小室的底室與頂室FITC-BSA熒光強度比值降低,細胞通透性降低(P0.05)。(5)HIF-1αmRNA及蛋白的相對表達量:與N組相比,H組HIF-1αmRNA及蛋白相對表達量增高(P0.05);與H組相比,IMD2組HIF-1αmRNA及蛋白相對表達量增高(P0.05)。(6)VEGFmRNA及蛋白的相對表達量:與N組相比,H組VEGFmRNA及蛋白相對表達量增高(P0.05);與H組相比,IMD2組VEGFmRNA及蛋白相對表達量增高(P0.05)。(7)相關分析發(fā)現(xiàn)HIF-1αmRNA、VEGFmRNA相對表達量與細胞凋亡率呈較強負相關(r1=-0.919,r2=-0.911,P0.05)。結論:中介素可使缺氧損傷的細胞形態(tài)改善且細胞通透性降低,脂質過氧化物產(chǎn)生減少,細胞凋亡減輕,因此減輕了缺氧損傷,進而保護了腎小球內皮細胞,與其上調HIF-1α與VEGF生成有關。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of Intermedin,IMD on (rRGEC) hypoxia injury in rat glomerular endothelial cells and its possible mechanism. Methods: (1) Experimental group: rRGEC was subcultured, and the cells in good growth state were selected. They were randomly divided into normal group (N group), hypoxia group (H group) and IMD group (N group) cultured in carbon dioxide incubator (5CO2 + 37 鈩，

本文編號：2260368