【摘要】：目的:探究中介素(Intermedin,IMD)對大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞(rRGEC)缺氧損傷的影響及其可能的機(jī)制。方法:(1)實(shí)驗(yàn)分組:將rRGEC傳代培養(yǎng),選取生長狀態(tài)良好的細(xì)胞,隨機(jī)分成正常組(N組),缺氧組(H組)及IMD組,N組置于二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)(5%CO2、37℃)培養(yǎng),H組與IMD組置于三氣培養(yǎng)箱內(nèi)(90%N2、5%CO2、5%O2、37℃)缺氧培養(yǎng),按培養(yǎng)液中IMD的最終濃度將IMD組分為10-8mol/L(IMD1組)、10-7mol/L(IMD2組)、10-6mol/L(IMD3組)。6h后留取各組細(xì)胞及其培養(yǎng)液用于檢測。(2)相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)特點(diǎn)。(3)流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡率。(4)Elisa法檢測細(xì)胞上清液中4-羥壬烯醛(4-HNE)、活性氧(ROS)及超氧化物歧化酶(SOD)含量。(5)tanswell聚碳酸酯膜小室內(nèi)制備內(nèi)皮細(xì)胞單層,并測其底室與頂室FITC-BSA熒光強(qiáng)度,以底室與頂室熒光強(qiáng)度比值的變化來表示細(xì)胞通透性變化。(6)實(shí)時(shí)定量PCR檢測各組細(xì)胞缺氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)mRNA的相對表達(dá)量。(7)免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測細(xì)胞HIF-1α及VEGF蛋白的表達(dá)并進(jìn)行半定量分析。結(jié)果:(1)細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變:相差顯微鏡下,N組細(xì)胞生長狀態(tài)良好,無懸浮死亡細(xì)胞;H組細(xì)胞腫脹、懸浮死亡細(xì)胞較多;與H組相比,IMD1、IMD2、IMD3組細(xì)胞損害均減輕,懸浮死亡細(xì)胞較少,與N組接近。(2)細(xì)胞凋亡率的變化:與N組相比,IMD1、IMD2、IMD3組細(xì)胞凋亡率降低(P0.05);與H組相比,IMD1、IMD2、IMD3組細(xì)胞凋亡率均降低(P0.05)。(3)培養(yǎng)液上清中4-HNE、ROS、SOD的含量:與N組相比,H組細(xì)胞培養(yǎng)液上清中4-HNE、ROS升高,SOD降低(P0.05);與H組相比,IMD1、IMD2、IMD3組細(xì)胞培養(yǎng)液上清中4-HNE、ROS降低,SOD升高(P0.05)。(4)細(xì)胞通透性的改變:與N組相比,H組transwell聚碳酸酯膜小室的底室與頂室FITC-BSA熒光強(qiáng)度比值增加,細(xì)胞通透性增加(P0.05);與H組相比,IMD1、IMD2、IMD3組transwell聚碳酸酯膜小室的底室與頂室FITC-BSA熒光強(qiáng)度比值降低,細(xì)胞通透性降低(P0.05)。(5)HIF-1αmRNA及蛋白的相對表達(dá)量:與N組相比,H組HIF-1αmRNA及蛋白相對表達(dá)量增高(P0.05);與H組相比,IMD2組HIF-1αmRNA及蛋白相對表達(dá)量增高(P0.05)。(6)VEGFmRNA及蛋白的相對表達(dá)量:與N組相比,H組VEGFmRNA及蛋白相對表達(dá)量增高(P0.05);與H組相比,IMD2組VEGFmRNA及蛋白相對表達(dá)量增高(P0.05)。(7)相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)HIF-1αmRNA、VEGFmRNA相對表達(dá)量與細(xì)胞凋亡率呈較強(qiáng)負(fù)相關(guān)(r1=-0.919,r2=-0.911,P0.05)。結(jié)論:中介素可使缺氧損傷的細(xì)胞形態(tài)改善且細(xì)胞通透性降低,脂質(zhì)過氧化物產(chǎn)生減少,細(xì)胞凋亡減輕,因此減輕了缺氧損傷,進(jìn)而保護(hù)了腎小球內(nèi)皮細(xì)胞,與其上調(diào)HIF-1α與VEGF生成有關(guān)。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of Intermedin,IMD on (rRGEC) hypoxia injury in rat glomerular endothelial cells and its possible mechanism. Methods: (1) Experimental group: rRGEC was subcultured, and the cells in good growth state were selected. They were randomly divided into normal group (N group), hypoxia group (H group) and IMD group (N group) cultured in carbon dioxide incubator (5CO2 + 37 鈩，

本文編號：2260368