【摘要】：目的探討生物活性肽Apelin對單側(cè)輸尿管結(jié)扎(UUO)小鼠腎臟纖維化的影響及相關(guān)機制,分析在腎臟纖維化時血清和腎臟局部Apelin/APJ系統(tǒng)的代償性變化。方法 2014年1月選取7周齡雄性C57Bl/6j小鼠共60只,構(gòu)建UUO的小鼠模型,并設(shè)立假手術(shù)組(Sham)作為對照。術(shù)后每天給小鼠腹腔注射Apelin-13(0.1μmol/kg)或等量0.9%氯化鈉溶液(vehicle)。根據(jù)小鼠手術(shù)方式和術(shù)后用藥情況分為4組(15只/組):Sham+vehicle組、Sham+Apelin組、UUO+vehicle組、UUO+Apelin組。術(shù)后2周將小鼠處死,取手術(shù)側(cè)腎臟進行檢測。采用Masson染色觀察腎臟纖維化程度;采用實時熒光定量PCR(RT-PCR)法檢測腎臟細胞外基質(zhì)膠原〔纖維連接蛋白(Fibronectin)、Ⅰ型膠原(Collagen I)、Ⅲ型膠原(CollagenⅢ)〕表達水平以及腎臟Apelin、APJ表達水平;采用Western blotting法檢測腎小管上皮細胞標志物上皮細胞鈣黏蛋白(E-cadherin)、間充質(zhì)細胞標志物α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)表達水平以及轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)/Smads信號通路的主要信號分子(TGF-β1、TGF-βR1、p-Smad2)表達水平;采用ELISA法檢測小鼠血清Apelin表達水平。結(jié)果 4組小鼠腎臟纖維化程度比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。UUO+vehicle組和UUO+Apelin組小鼠腎臟纖維化程度均高于Sham+vehicle組和Sham+Apelin組(P0.05);UUO+Apelin組小鼠腎臟纖維化程度低于UUO+vehicle組(P0.05)。4組小鼠腎臟Fibronectin、CollagenⅠ、CollagenⅢ表達水平比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。UUO+vehicle組和UUO+Apelin組小鼠腎臟Fibronectin、CollagenⅠ、CollagenⅢ表達水平高于Sham+vehicle組和Sham+Apelin組(P0.05);UUO+Apelin組小鼠腎臟Fibronectin、CollagenⅠ、CollagenⅢ表達水平低于UUO+vehicle組(P0.05)。4組小鼠腎臟E-cadherin、α-SMA表達水平比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。UUO+vehicle組和UUO+Apelin組小鼠腎臟E-cadherin表達水平低于Sham+vehicle組和Sham+Apelin組,α-SMA表達水平高于Sham+vehicle組和Sham+Apelin組(P0.05);UUO+Apelin組小鼠腎臟E-cadherin表達水平高于UUO+vehicle組,α-SMA表達水平低于UUO+vehicle組(P0.05)。4組小鼠腎臟TGF-β1、TGF-βR1、p-Smad2表達水平比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。UUO+vehicle組和UUO+Apelin組小鼠腎臟TGF-β1、TGF-βR1、p-Smad2表達水平均高于Sham+vehicle組和Sham+Apelin組(P0.05);UUO+Apelin組小鼠腎臟TGF-β1、TGF-βR1、p-Smad2表達水平均低于UUO+vehicle組(P0.05)。4組小鼠腎臟Apelin表達水平比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);4組小鼠腎臟APJ、血清Apelin表達水平比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。UUO+vehicle組和UUO+Apelin組小鼠腎臟APJ表達水平高于Sham+vehicle組和Sham+Apelin組,血清Apelin表達水平低于Sham+vehicle組和Sham+Apelin組(P0.05);UUO+Apelin組小鼠腎臟APJ表達水平低于UUO+vehicle組,血清Apelin表達水平高于UUO+vehicle組(P0.05)。結(jié)論 Apelin通過干擾經(jīng)典的TGF-β/Smads信號通路抑制UUO小鼠腎臟的腎小管上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化,進而減輕腎臟纖維化。在腎臟纖維化時,小鼠血清Apelin表達水平降低,腎臟APJ表達水平升高,可能對慢性腎臟病的進展起到一定的代償作用。
[Abstract]:Objective To investigate the effect of bioactive peptide Apelin on renal fibrosis in unilateral ureteral ligation (UUO) mice and its related mechanism, and to analyze the compensatory changes of Apelin/APJ system in serum and kidney during renal fibrosis. The mice were injected intraperitoneally with Apelin-13 (0.1 micromol/kg) or 0.9% sodium chloride solution (vehicle) every day after operation. The mice were divided into four groups (15 mice/group) according to the operation mode and the medication after operation: Sham+vehicle group, Sham+Apelin group, UUUO+vehicle group, UUUUO+Apelin group. The mice were killed 2 weeks after operation and the kidneys on the operation side were taken for detection. Masson staining was used to observe the degree of renal fibrosis; real-time fluorescence quantitative PCR (RT-PCR) was used to detect the expression of extracellular matrix collagen (fibroronectin), collagen type I (Collagen I), collagen type I I I (Collagen I I I)) and Apelin and APJ; Western blotting was used to detect the epithelial fineness of renal tubules. The expression levels of E-cadherin, alpha-smooth muscle actin (alpha-SMA) and major signal molecules (TGF-beta, TGF-beta R1, p-Smad2) in the transforming growth factor beta (TGF-beta) / Smads signaling pathway were detected by ELISA. Results The expression levels of Apelin in serum of mice in four groups were detected by ELISA. The degree of renal fibrosis in UUO + vehicle group and UUO + Apelin group was higher than that in Sham + vehicle group and Sham + Apelin group (P 0.05); the degree of renal fibrosis in UUO + Apelin group was lower than that in UUO + vehicle group (P 0.05). The expression levels of Fibronectin, Collagen I and Collagen III in UUO+vehicle group and UUO+Apelin group were higher than those in Sham+vehicle group and Sham+Apelin group (P 0.05), while the expression levels of Fibronectin, Collagen I and Collagen III in UUO+Apelin group were lower than those in UUO+vehicle group (P 0.05). The expression level of E-cadherin in kidney of UUO+vehicle group and UUO+Apelin group was lower than that of Sham+vehicle group and Sham+Apelin group, and the expression level of alpha-SMA was higher than that of Sham+vehicle group and Sham+Apelin group (P 0.05). The expression levels of TGF-beta 1, TGF-beta 1 and p-Smad2 in the kidneys of UUO+vehicle group and UUO+Apelin group were lower than those of UUO+vehicle group (P 0.05). The expression levels of TGF-beta 1, TGF-beta 1 and p-Smad2 in the kidneys of UUO+vehicle group and UUUO+Apelin group were higher than those of Sham+vehicle group and Sham+Apelin group (P 0.05). The expression levels of GF-beta R1 and p-Smad2 were lower in UUO+vehicle group than in UUO+vehicle group (P 0.05). There was no significant difference in the expression levels of Apelin between the four groups (P 0.05). The expression levels of APJ in kidney and serum were significantly higher in UUO+vehicle group and UUO+vehicle group than in Sham+vehicle group and Sham+vehicle group (P 0.05). The expression of Apelin was lower in the + Apelin group than in the Sham + vehicle group and Sham + Apelin group (P 0.05). The expression of APJ in the kidney of UUO + Apelin group was lower than that of UUO + vehicle group, and the expression of Apelin in the serum was higher than that of UUO + vehicle group (P 0.05). Conclusion Apelin inhibited tubular epithelial-mesenchymal hypertrophy in the kidney of UUUO mice by interfering with the classical TGF-beta/Smads signaling pathway. In the course of renal fibrosis, the expression of Apelin in serum and APJ in kidney are decreased, which may play a compensatory role in the progression of chronic kidney disease.
【作者單位】： 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院腎內(nèi)科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(81570660,81300607) 北京市自然科學(xué)基金課題(7132091)
【分類號】：R692

【共引文獻】

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本文編號：2207090