發(fā)布時間：2018-08-03 13:07

【摘要】：目的探討LATS1基因去甲基化對人腎癌細胞生物學功能及其Hippo-YAP信號通路的影響。方法利用RT-PCR檢測人腎透明細胞癌細胞系786-O和人胚腎細胞系HEK-293中Hippo-YAP信號通路大腫瘤抑制基因1(large tumor suppressor gene 1,LATS1)mRNA和下游癌基因Yes-相關(guān)蛋白(yes-associated protein,YAP)mRNA的表達水平,用亞硫酸氫鹽測序法(bisulfite sequence-PCR,BSP)對LATS1低表達細胞786-O進行甲基化分析,5-氮雜-2脫氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,DAC)處理786-O和HEK-293后,用RT-PCR、Western blot檢測各組細胞LATS1和YAP的mRNA和蛋白表達水平,流式細胞術(shù)檢測各組細胞凋亡和周期,CCK-8檢測各組細胞增殖抑制情況。結(jié)果 786-O較HEK-293 LATS1mRNA表達水平顯著降低(P0.05),YAP mRNA表達水平顯著升高(P0.05),BSP顯示LATS1在人腎癌細胞系786-O中高度甲基化;DAC處理786-O后,LATS1 mRNA和蛋白表達水平顯著升高(P0.05),YAP mRNA和蛋白表達水平顯著降低(P0.05),周期停滯在G0/G1期(P0.05)、細胞增殖受到明顯抑制(P0.05)、細胞凋亡顯著增加(P0.05),而HEK-293組均無明顯變化(P0.05)。結(jié)論 LATS1基因去甲基化后下調(diào)YAP基因表達,抑制786-O細胞增殖并誘導其凋亡。LATS1基因甲基化在腎癌發(fā)生中起重要作用。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of LATS1 gene demethylation on the biological function and Hippo-YAP signaling pathway of human renal carcinoma cells. Methods RT-PCR was used to detect the expression of mRNA and yes-associated protein (Yap) mRNA in Hippo-YAP signaling pathway 1 (large tumor suppressor gene 1 and LATS1 in human renal clear cell carcinoma cell line 786-O and human embryonic kidney cell line HEK-293. Bisulfite sequence-PCRP-BSP was used to methylate LATS1 low-expression cells 786-O to analyze the mRNA and protein expression levels of LATS1 and YAP in each group treated with 5-aza-2na-deoxycytidine dinoside (5-aza-2ox-deoxycytidine DAC). The mRNA and protein expression levels of LATS1 and YAP in each group were detected by RT-PCRG Western blot. Apoptosis was detected by flow cytometry and inhibition of cell proliferation was detected by CCK-8. Results the expression level of 786-O was significantly lower than that of HEK-293 LATS1mRNA (P0.05). (P0.05) the expression of LATS1 in human renal cell carcinoma cell line 786-O was significantly higher than that of HEK-293 LATS1mRNA (P0.05). (P0.05) the expression of LATS1 mRNA and protein in human renal cell carcinoma cell line 786-O treated with hypermethylated LATS1 was significantly increased (P0.05). Significantly decreased (P0.05), cycle arrest in the G0/G1 phase (P0.05), cell proliferation was significantly inhibited (P0.05), apoptosis significantly increased (P0.05), but no significant change in HEK-293 group (P0.05). Conclusion LATS1 gene demethylation down-regulates the expression of YAP gene, inhibits the proliferation of 786-O cells and induces apoptosis. The methylation of LATS1 gene plays an important role in the pathogenesis of renal cell carcinoma.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院泌尿外科;重慶市綦江區(qū)人民醫(yī)院泌尿外科;重慶醫(yī)科大學附屬大學城醫(yī)院消化神經(jīng)中心;
【基金】：國家自然科學基金面上項目(30972999) 重慶市自然科學基金(cqpc2012jja1698) 重慶市衛(wèi)生局基金(2013-2-082)~~
【分類號】：R737.11

【參考文獻】

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【共引文獻】

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本文編號：2161839