發(fā)布時(shí)間：2018-06-18 09:43

  本文選題：CatSper3 + SEPT7��； 參考：《鄭州大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：精子是大自然創(chuàng)造的神奇的細(xì)胞,它唯一的功能就是獲得動(dòng)能,尋找到卵細(xì)胞,并且與卵細(xì)胞結(jié)合,形成受精卵。像其它很多特殊和復(fù)雜的人類器官和細(xì)胞一樣,精子也含有許多特殊的成分和元件來(lái)完成自身的生物合成。通常來(lái)說(shuō),人類,小鼠等等哺乳動(dòng)物儲(chǔ)存的精子處于沉默狀態(tài),通過(guò)射精使精子進(jìn)入生殖道,噴射出的精子在生殖道強(qiáng)制成熟,獲得動(dòng)能,稱為“精子獲能”,進(jìn)而完成最終受精過(guò)程,形成受精卵。近年來(lái),隨著男性科學(xué)研究的不斷深入和發(fā)展,精液形態(tài)和功能檢查越來(lái)越普及,同時(shí),精液質(zhì)量和功能也成為人們?cè)絹?lái)越關(guān)注的問(wèn)題。男性不育與男性精液質(zhì)量密切相關(guān),任何因素導(dǎo)致的男性精液質(zhì)量都可能引起男性不育,其中精子活力低下就是引起男性精液質(zhì)量下降的一個(gè)因素。精子活力低下稱為弱精子癥(asthenozoospermia AZS)。世界衛(wèi)生組織(World Health Organization,WHO)在2010年給出標(biāo)準(zhǔn),將精子運(yùn)動(dòng)能力分為三個(gè)等級(jí):精子的前向運(yùn)動(dòng)(Progressive Motility PR),指精子的快速或者緩慢的前向運(yùn)動(dòng);精子的非前向運(yùn)動(dòng)(Non-Progressive Motility NP),指精子的原地運(yùn)動(dòng);精子不活動(dòng)(Immotility IM)。正常精液的精子前向運(yùn)動(dòng)率(PR)≥32%,精子密度(Sperm Density)≥15×106/m L。精液中的精子前向運(yùn)動(dòng)率(PR)32%,精子密度≥15×106/m L就稱為弱精子癥。弱精子癥成因復(fù)雜,導(dǎo)致弱精子癥的原因有很多,如染色體異常、感染、精液液化不良、精索靜脈曲張等,原因不明的弱精子癥稱為特發(fā)性弱精子癥(Idiopathic Asthenozoospermia)。弱精子癥引起的男性不育成為男性科學(xué)中重要的課題之一,研究弱精子癥的發(fā)病機(jī)制和尋求治療途徑成為無(wú)法規(guī)避的難題。目前與弱精子相關(guān)的因子家族有很多,研究這些因子的蛋白分子通路和這些因子在弱精子癥的發(fā)生發(fā)展中的作用有利于揭示弱精子的病因,并為臨床提供治療依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)利用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse Transcription-PCR,RT-PCR)和蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western Blot)分別檢測(cè)正常精子和弱精子癥中CatSper3、SEPT7的表達(dá),證明CatSper3、SEPT7的表達(dá)與弱精子癥的聯(lián)系,為弱精子癥的研究提供更多的依據(jù)。材料與方法1研究對(duì)象標(biāo)本收集:弱精子癥標(biāo)本來(lái)自于2015年9月~12月期間鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院男科門(mén)診的病人,正常對(duì)照組是各項(xiàng)檢查合格者的精液標(biāo)本,來(lái)自于鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院河南省人類精子庫(kù)的供精者。兩組精液間的年齡、精液量、PH、液化時(shí)間等各項(xiàng)精液指標(biāo)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。受試者禁欲2~7天,手淫法收集精液至無(wú)菌杯中,37℃孵育,60min內(nèi)液化完全。兩組各采集30例標(biāo)本。正常對(duì)照組濃度≥60×106/m L,PR≥32%,弱精子組濃度≥60×106/m L,PR32%。2方法2.1 RT-PCR弱精子癥和正常男性精子(對(duì)照組)中CatSper3和SEPT7 mRNA的表達(dá)采用RT-PCR進(jìn)行檢測(cè)。2.2 Western Blot弱精子癥和正常男性精子(對(duì)照組)中CatSper3和SEPT7蛋白的表達(dá)采用Western Blot蛋白免疫印跡法進(jìn)行檢測(cè)。3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 22.0軟件。結(jié)果中計(jì)量的資料數(shù)據(jù)以(?)±s表示,對(duì)正常對(duì)照組和弱精子組精液基本參數(shù)、mRNA和蛋白表達(dá)采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行分析,精子前向運(yùn)動(dòng)能力與CatSper3和SEPT7表達(dá)的相關(guān)性采用Pearson相關(guān)系數(shù)(r)進(jìn)行描述。α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。結(jié)果1兩組精子中CatSper3 mRNA的表達(dá)正常對(duì)照組和弱精子癥組中CatSper3 mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為:1.04±0.33、0.55±0.17,與正常對(duì)照組相比,特發(fā)性弱精子癥患者精子中CatSper3 mRNA的表達(dá)顯著降低(t=7.321,P0.01)。2兩組精子中的CatSper3蛋白表達(dá)正常對(duì)照組和弱精子癥組中CatSper3蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別為:0.81±0.08、0.41±0.11,與正常對(duì)照組相比,特發(fā)性弱精子癥患者精子中CatSper3蛋白的表達(dá)顯著降低(t=15.298,P0.01)。3兩組精子中SEPT7 mRNA的表達(dá)正常對(duì)照組和弱精子癥組中SEPT7 mRNA的相對(duì)表達(dá)量分別為:0.81±0.08、0.52±0.06,與正常對(duì)照組相比,特發(fā)性弱精子癥組精子中SEPT7 mRNA的表達(dá)顯著降低(t=14.930,P0.01)。4兩組精子中SEPT7蛋白的表達(dá)正常對(duì)照組和弱精子癥組中SEPT7蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別為:0.79±0.09、0.47±0.11,與正常對(duì)照組相比,特發(fā)性弱精子癥組精子中SEPT7蛋白的表達(dá)顯著降低(t=11.840,P0.01)。5 CatSper3、SEPT7在精子中表達(dá)水平與精子前向運(yùn)動(dòng)的相關(guān)性精子前向運(yùn)動(dòng)能力與CatSper3 mRNA和蛋白表達(dá)水平(r=0.620,P0.01;r=0.830,P0.01)、SEPT7 mRNA和蛋白表達(dá)水平(r=0.806,P0.05;r=0.776,P0.05)分別具有相關(guān)性。結(jié)論CatSper3作為精子鈣離子通道蛋白的家族成員之一,在精子中表達(dá)下降可能引起鈣離子通道失衡,精子無(wú)法獲能,導(dǎo)致精子活力下降。SEPT7作為Septin家族成員之一,是精子環(huán)的重要組成部分,在精子中表達(dá)下降可能導(dǎo)致精子結(jié)構(gòu)缺失使精子活力低下。
[Abstract]:Sperm is a magic cell created by nature . The only function is to get kinetic energy , to find eggs , and to combine with egg cells to form fertilized eggs . In recent years , sperm motility , like many other special and complex human organs and cells , is becoming more and more popular . In recent years , sperm motility is a factor leading to a decline in semen quality . In recent years , sperm motility is called asthenospermia . The sperm motility rate ( PR ) of normal semen is 鈮，

本文編號(hào)：2035040