發(fā)布時間：2018-06-07 09:28

  本文選題：前列腺增生 + 雄激素受體��； 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：研究背景： 良性前列腺增生(BPH)簡稱前列腺增生,是困擾老年男性的一個常見疾病,在我國隨著人均壽命的延長、生活質(zhì)量的提高及生活環(huán)境的變化,其患病率已接近發(fā)達(dá)國家。盡管前列腺增生的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢,但其發(fā)病機(jī)制尚待明確。雖然手術(shù)治療是目前治療前列腺增生較為理想的手段,但該病的患者均為高齡人群,因此相當(dāng)一部分病人不能耐受手術(shù)。如能夠從基因水平分析其發(fā)病機(jī)制,找到發(fā)病的關(guān)鍵位點(diǎn)并進(jìn)行靶向治療,則對于治療這部分病人并且減輕社會負(fù)擔(dān)有著重大和積極的意義。 對于前列腺增生病因的研究從最初的組織形態(tài)到細(xì)胞,再到深入至分子領(lǐng)域,不同的研究方法和實驗?zāi)Ｐ偷慕⑹沟门c前列腺增生的基因和細(xì)胞因子不斷地被發(fā)現(xiàn)。在研究方向上主要集中于增殖、分化、凋亡和衰老四個方面,在理論上陸續(xù)提出了雄雌激素失調(diào)、胚胎再喚醒及多肽類生長因子作用等學(xué)說。一般情況下,人的組織器官會隨著人體的衰老而退化,表現(xiàn)為細(xì)胞增殖能力的下降、組織器官體積的萎縮,而前列腺卻表現(xiàn)相反,隨著年齡的增長表現(xiàn)出細(xì)胞增生、體積增大的趨勢。為此,我們提出了細(xì)胞衰老逃逸機(jī)制,即細(xì)胞一方面通過對凋亡缺乏敏感性使得細(xì)胞存活更長時間,另一方面也通過延緩衰老使得細(xì)胞擁有更多的分裂次數(shù),其總的作用導(dǎo)致了前列腺細(xì)胞數(shù)量上的增加。從BPH的組織學(xué)表現(xiàn)來看,這是前列腺增生發(fā)病機(jī)制的一個合理解釋。在這個思路的指導(dǎo)下,我們首先研究了端粒酶在這個機(jī)制中的重要性,在正常情況下細(xì)胞中的端粒酶活性是受到嚴(yán)格控制的,端粒酶活性升高會使細(xì)胞端粒延長,從而使細(xì)胞增殖次數(shù)增加、壽命延長。通過檢測端粒酶分別在前列腺正常和增生組織中的活性表達(dá),發(fā)現(xiàn)端粒酶活性在增生組織中高于正常組織,初步得出了衰老逃逸在前列腺增生中的存在。進(jìn)一步的研究我們比較了具有代表性的衰老基因p16iak4a在前列腺正常組織和增生組織中的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)p16iak4a基因在增生組織中低表達(dá),這種低表達(dá)可能延緩了細(xì)胞的衰老,使前列腺細(xì)胞衰老逃逸,造成積累導(dǎo)致組織增生。這都有力地肯定了衰老逃逸機(jī)制在前列腺發(fā)病機(jī)制中的重要性。 Bcl-xL是Bcl-2家族蛋白,在細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。Bcl-xL可以和其它促凋亡蛋白形成異源二聚體而抑制細(xì)胞凋亡,也可以直接在線粒體外膜上形成寡聚體通道以在細(xì)胞應(yīng)激時維持線粒體膜的正常狀態(tài)。大量研究表明抗凋亡蛋白Bcl-xL在衰老的細(xì)胞當(dāng)中能使細(xì)胞對凋亡作用更具有抵抗性,從而破壞正常細(xì)胞的凋亡,使得細(xì)胞存活時間延長而得以累計。前列腺增生作為一個典型的年齡相關(guān)性疾病,Bcl-xL與其的關(guān)系尚不清楚。 目前所知前列腺的生長發(fā)育過程中雄激素及其受體發(fā)揮著重要的作用,大量的研究表明增生的前列腺組織中雄激素受體的表達(dá)較正常組織明顯升高。在此,將前列腺增生組織中雄激素受體與BCL-XL的表達(dá)關(guān)聯(lián)性作一分析,有利于了解兩者在發(fā)病機(jī)制中的相互作用,為進(jìn)一步揭示發(fā)病原理提供依據(jù)。進(jìn)而為前列腺增生分子靶向治療藥物的開發(fā)提供重要理論依據(jù)。研究目的： 本實驗擬通過收集增生的前列腺組織與正常的前列腺組織,檢測兩種組織中抗凋亡蛋白BCL-XL和雄激素受體的表達(dá)情況；分別分析抗凋亡蛋白BCL-XL與雄激素受體的表達(dá)關(guān)系、抗凋亡蛋白BCL-XL與前列腺增生發(fā)病進(jìn)展危險因素的關(guān)系,為臨床靶向藥物治療前列腺增生提供理論依據(jù)。 研究方法： 1.收集正常前列腺及增生前列腺的組織標(biāo)本。正常前列腺標(biāo)本來源于腦死亡移植腎供者,增生前列腺組織來源于恥骨上前列腺摘除術(shù)或膀胱癌根治術(shù)患者,組織經(jīng)取材后均用4%的甲醛固定48小時,首先經(jīng)過病理切片后進(jìn)行HE染色,在顯微鏡下觀察組織標(biāo)本確定為正常組織或增生組織后,再用石蠟包埋封存,同時記錄每個標(biāo)本的來源、日期、分類和相關(guān)臨床指標(biāo)信息。前列腺增生發(fā)病進(jìn)展危險因素的臨床指標(biāo)有年齡(歲)、體積(cm3)、前列腺特異性抗原PSA(ng/ml)、IPSS評分(分)和最大尿流率Qmax(ml/s)。包埋標(biāo)本組織后的石蠟塊存放于4℃的低溫環(huán)境中,防止標(biāo)本受損。 2.檢測抗凋亡蛋白BCL-XL和雄激素受體的表達(dá)情況。石蠟塊進(jìn)行組織切片制成組織玻片后,依次經(jīng)烤片、二甲苯脫蠟、梯度酒精水化至水,3%過氧化氫溶液消除內(nèi)源性過氧化物酶和0.01mol/L pH6.0的檸檬酸鹽緩沖液微波爐高溫抗原修復(fù)后進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色：用0.01mo1/L pH7.2～7.4的PBS洗3次,每次3min,滴加一抗后放于4℃濕盒中過夜；再依次經(jīng)封閉、滴加二抗和SABC試劑后在顯微鏡控制下進(jìn)行DAB染色,蘇木素復(fù)染；最后行脫水、透明和封片鏡檢。實驗陰性對照組以PBS代替一抗,陽性對照組采用乳腺癌和肺癌切片對照。圖像分析：所有免疫組化切片均在同一條件下采用Image pro-plus圖像采集分析系統(tǒng)進(jìn)行圖像采集和分析。圖像采集系統(tǒng)預(yù)熱20分鐘后,調(diào)整并固定各項設(shè)置,如光源、光圈、白平衡、曝光強(qiáng)度、敏感度和對比度等等,每張切片選取具有代表性地區(qū)域按3×3攝取9個高倍視野,再導(dǎo)入圖像分析系統(tǒng)計算出每張切片的積分光密度值(IOD值),再用IOD值除以測量面積,得到平均光密度值(MD值)作為一個切片的最終結(jié)果。分別檢測出正常前列腺組織與增生前列腺組織中抗凋亡蛋白BCL-XL和雄激素受體的表達(dá)情況后記錄兩組數(shù)據(jù)。 3.實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。將記錄的各項臨床指標(biāo)和組織中抗凋亡蛋白BCL-XL和雄激素受體的表達(dá)情況數(shù)據(jù)綜合分析,實驗數(shù)據(jù)采用(x±s)表示,使用SPSS13.0數(shù)據(jù)包進(jìn)行分析,兩個變量之間的相關(guān)性用Spearman等級相關(guān)分析。取PO.05為統(tǒng)計學(xué)有顯著性差異。分別評估抗凋亡蛋白BCL-XL的表達(dá)與雄激素受體表達(dá)的關(guān)系、與前列腺增生(BPH)的關(guān)系和與前列腺增生進(jìn)展危險因素的關(guān)系。研究結(jié)果： 1.抗凋亡蛋白Bcl-xl和雄激素受體(AR)在前列腺組織中的表達(dá)及分布。免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果顯示：在正常的前列腺組織中不管是上皮細(xì)胞還是間質(zhì)細(xì)胞,抗凋亡蛋白Bcl-xl的顯色微弱,證明其表達(dá)極少；而雄激素受體(AR)在上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞中都有不同程度的表達(dá),顯色為陽性,而且在上皮細(xì)胞中的表達(dá)多于間質(zhì)細(xì)胞。在增生的前列腺組織中抗凋亡蛋白Bcl-xl和雄激素受體(AR)的顯色均為強(qiáng)陽性,說明其表達(dá)均明顯,且上皮細(xì)胞的表達(dá)強(qiáng)于間質(zhì)細(xì)胞。經(jīng)檢驗分析發(fā)現(xiàn)良性前列腺增生組織中抗凋亡蛋白Bcl-xl和雄激素受體(AR)的表達(dá)均高于正常前列腺組織(P0.05),而且等級相關(guān)分析顯示抗凋亡蛋白Bcl-xl的表達(dá)與雄激素受體(AR)的表達(dá)呈正相關(guān)�？沟蛲龅鞍譈cl-xl與雄激素受體(AR)兩者表達(dá)的相關(guān)系數(shù)在正常組和BPH組中分別為0.0399(P=0.1472)和0.5397(P=0.0028),說明兩者的表達(dá)在良性前列腺增生組織中明顯相關(guān)。 2.良性前列腺增生(BPH)患者中抗凋亡蛋白Bcl-xl表達(dá)與臨床指標(biāo)的關(guān)系。本研究中的30例良性前列腺增生(BPH)患者均在標(biāo)本獲取的同時記錄臨床檢測指標(biāo)如下：年齡為(67.3±6.9)歲、前列腺體積為(170.1±70.7)cm3、前列腺特異抗原PSA為(3.7±6.1)ng/m1、IPSS評分(24.4±4.3)分、最大尿流率Qmax為(11.0±7.0)m1/s。采用Spearman等級相關(guān)分析后顯示：抗凋亡蛋白Bcl-xl的表達(dá)與患者年齡呈正相關(guān)(P0.05)；與前列腺體積呈正相關(guān)(P0.05)；與PSA值呈正相關(guān)(P0.05)；與IPSS評分無明顯相關(guān)性(P0.05)；與最大尿流率Qmax無明顯相關(guān)性(P0.05)。結(jié)論： 本研究證明了抗凋亡蛋白Bcl-xl在前列腺增生組織細(xì)胞中的高表達(dá)及其與雄激素受體存在的正相關(guān)關(guān)系,有力支持了抗凋亡蛋白Bcl-xl可能通過與雄激素的協(xié)同作用導(dǎo)致前列腺細(xì)胞衰老逃逸、進(jìn)而造成細(xì)胞增殖積累的推測；此外,分析發(fā)現(xiàn)Bcl-xl與患者年齡、前列腺體積和PSA值成正相關(guān)關(guān)系,說明了其也在一定程度上促進(jìn)了前列腺增生的發(fā)展,為前列腺增生的發(fā)生發(fā)展機(jī)制提供了新的思路,并且在治療上為可能的藥物新靶點(diǎn)提供了理論依據(jù)。
[Abstract]:Background of Study :

Benign prostatic hyperplasia ( BPH ) is a common disease which troubles the elderly men . In our country , with the extension of life expectancy , the improvement of the quality of life and the change of living environment , the prevalence of BPH has been close to the developed countries . Although the incidence of prostate hyperplasia is the ideal method for the treatment of prostate hyperplasia , the pathogenesis of the disease has yet to be clarified . Although the surgical treatment is the ideal means for the treatment of prostate hyperplasia , the disease has a significant and positive significance for the treatment of this part of the patient and alleviating the social burden .

In this paper , we studied the importance of telomerase activity in the normal tissues of the prostate and the growth of the prostate gland .

Bcl - xL plays an important role in the regulation of apoptosis . Bcl - xL can inhibit apoptosis by forming heterodimers with other pro - apoptotic proteins .

At present , the androgen receptor and its receptor play an important role in the growth and development of prostate gland . A large number of studies show that the expression of androgen receptor in prostatic tissue is higher than that of normal tissue .

The expression of anti - apoptotic protein Bcl - XL and androgen receptor in both tissues was determined by collecting prostatic tissue and normal prostate tissue .
The relationship between the expression of anti - apoptotic protein Bcl - XL and androgen receptor , the relationship between anti - apoptotic protein Bcl - XL and the risk factors of prostatic hyperplasia were analyzed , and the theoretical basis for the treatment of prostate hyperplasia was provided for clinical targeting drugs .

Study method :

1 . Tissue specimens of normal prostate and prostatic hyperplasia were collected . The normal prostate specimens were derived from donor kidney donors , hyperplasia of prostate tissue derived from suprapubic prostatectomy or bladder cancer radical operation . The tissue samples were then stained with formalin for 48 hours . The source , date , classification and relevant clinical index information of each specimen were recorded . The clinical parameters of the risk factors for the progression of prostate hyperplasia were age ( years ) , volume ( cm3 ) , prostate specific antigen PSA ( ng / ml ) , IPSS score ( min ) and maximum urine flow rate Qmax ( ml / s ) . The paraffin blocks after embedding specimen tissue were stored in a low temperature environment of 4 鈩，

本文編號：1990694