本文選題：胰高血糖素樣肽-1 + 人腎小球系膜細胞��； 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)是一種治療2型糖尿病的新型藥物,在平穩(wěn)降糖的同時還可以保護靶器官功能,比如可以通過抑制炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激等實現(xiàn)對腎臟的保護作用,延緩糖尿病腎病(DN)的發(fā)生發(fā)展。有研究發(fā)現(xiàn),GLP-1可以降低肝細胞、心肌細胞、胰腺細胞等細胞的凋亡,因此我們推測,GLP-1也可以降低腎臟細胞的凋亡從而實現(xiàn)腎臟保護作用。本研究以人腎小球系膜細胞(HRMC)為研究對象,觀察在高糖及波動性高糖培養(yǎng)條件下,加入GLP-1前后細胞形態(tài)、增殖活性及凋亡率的變化,同時從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激角度初步探討GLP-1降低細胞凋亡的機制。方法:1.體外培養(yǎng)人腎小球系膜細胞(HRMC),通過倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)學(xué);2.以單純高糖培養(yǎng)基(30mmol/L)干預(yù)細胞不同時間(0、3h、6h、12h、24h、48h)后,分別用熒光定量PCR法和Western blotting法檢測GRP78表達量的變化;3.以高糖培養(yǎng)基(30mmol/L)+GLP-1(100nmol/L)共同干預(yù)HRMC不同時間(0、3h、6h、12h、24h、48h)后,分別用熒光定量PCR法和Western blotting法檢測GRP78表達量的變化,并與單純高糖干預(yù)進行對比;4.將HRMC分為6組:正常葡萄糖對照組(CON組,5.6mmol/L葡萄糖培養(yǎng));持續(xù)性高糖組(HG組,30mmol/L葡萄糖培養(yǎng));波動性高糖組(HNF組,30mmol/L葡萄糖培養(yǎng)3h,之后棄舊培養(yǎng)液,換用5.6mmol/L葡萄糖培養(yǎng)2h,一天反復(fù)3次,最后于5.6mmol/L葡萄糖培養(yǎng)基中過夜);正常葡萄糖+100nmol/L GLP-1組(CON+G組);持續(xù)性高糖+100nmol/L GLP-1組(HG+G組);波動性高糖組+100nmol/L GLP-1組(HNF+G組)。各組細胞干預(yù)24h后,(1)用MTT法檢測HRMC細胞活性;(2)Annexin V-FITC/PI染色后,用流式細胞儀測定細胞凋亡率;(3)分別用熒光定量PCR法和Western blotting法檢測各組GRP78表達水平。結(jié)果:1.倒置顯微鏡下觀察,HNF組細胞數(shù)量明顯減少,細胞形態(tài)明顯改變,而加入GLP-1共孵育后,細胞數(shù)量及形態(tài)均明顯改善。2.MTT結(jié)果:HG組較CON組可顯著增加細胞活性(P0.05),加入GLP-1共孵育后細胞活性可明顯下降(P0.05)。HNF組與CON組和HG組相比細胞活性明顯較低(P0.05),加入GLP-1共孵育后細胞活性可明顯增加(P0.05),但細胞活性仍明顯低于HG+G組。3.流式檢測細胞凋亡率結(jié)果:HG組和HNF組細胞凋亡率較CON組明顯升高(P0.05),而加入GLP-1共同干預(yù)后細胞凋亡率均明顯下降(P0.05);HNF組與HG組相比細胞凋亡率明顯升高(P0.05),HNF+G組較HG+G組凋亡率也是明顯升高的(P0.05)。4.不同干預(yù)時間條件下,單純高糖處理細胞3h時GRP78表達水平明顯升高(P0.05),到6h時表達水平達到高峰(P0.05),12h后GRP78表達量開始下降,但與0h相比仍較高(P0.05),24h、48h后表達量進一步下降,與0h相比差異無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。加入GLP-1共孵育與單純高糖干預(yù)相比,可顯著增加24h及48h時GRP78的表達量(P0.05),其余時間點二者比較無明顯變化(P0.05)。5.不同葡萄糖培養(yǎng)條件干預(yù)細胞24h,HG組GRP78表達水平與CON組相比,表達量相當(dāng)(P0.05),HNF組表達量較CON組和HG組明顯降低(P0.05);HG+G組GRP78表達量較HG組明顯升高(P0.05);HNF+G組表達量較較HNF組也明顯升高(P0.05),但仍明顯低于HG+G組(P0.05)。結(jié)論:1.一定程度的高糖刺激可以促進腎小球系膜細胞的增殖活性,可能參與糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展,而GLP-1可以降低這一作用,其具體機制還有待進一步研究。2.持續(xù)高糖干預(yù)腎小球系膜細胞,早期可以通過上調(diào)GRP78表達對抗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,隨著應(yīng)激持續(xù)時間的延長,GRP78表達逐漸下降,難以對抗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激而發(fā)生細胞凋亡。3.波動性高糖與持續(xù)高糖相比,對腎小球系膜細胞的應(yīng)激及損害更嚴重,前者引起的細胞凋亡率更高、GRP78表達水平更低。4.GLP-1可以改善高糖及波動性高糖引起的腎小球系膜細胞凋亡,其機制可能是通過上調(diào)GRP78表達水平從而降低內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激引起的細胞損害,延緩糖尿病腎病的發(fā)生及發(fā)展,對腎臟起到保護作用。
[Abstract]:Objective : Glucagon - like peptide - 1 ( GLP - 1 ) was a new drug for the treatment of type 2 diabetes mellitus . The expression of GRP78 in HG + G group was significantly higher than that in CON group ( P0.05 ) . The expression level of GRP78 in HG + G group was significantly higher than that in group ( P0.05 ) .
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R587.2;R692.9

【參考文獻】

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本文編號：1973986