本文選題：尿源干細胞 + 細胞療法��； 參考：《第二軍醫(yī)大學》2014年博士論文

【摘要】：背景： 慢性腎病是一種可以導致尿毒癥和心血管系統(tǒng)并發(fā)癥的常見疾病，且發(fā)病率一直處于上升趨勢。全世界慢性腎病患者約占總?cè)丝诘?3%，使之成為一個重大的公共衛(wèi)生問題。我國慢性腎病的流行病學也不容樂觀，慢性腎病患者約占總?cè)丝诘?0.25%左右，且發(fā)病率逐年升高。慢性腎病為進展性疾病，可發(fā)展至終末期腎病，給患者身體上及心理上造成巨大的創(chuàng)傷。與此同時，隨之而來的經(jīng)濟負擔也十分沉重。2007年，僅美國的終末期腎病支出就高達230多億，占其全部醫(yī)療支出的5.8%。目前對于終末期腎病的治療手段仍十分有限，主要依賴透析和腎移植。透析成本高昂、并發(fā)癥多、且降低患者的生活質(zhì)量。此外，透析僅僅替代腎臟的濾過功能，而不能替代其內(nèi)分泌等功能。另一方面，供體的短缺嚴重制約了腎移植的開展，，且免疫排斥和免疫抑制藥物對患者造成的影響也難以解決。因此，臨床上需要新的治療慢性腎病的手段。 細胞療法近年來逐漸受到重視，尤其在干細胞方面，由于其強大的自我更新和多向分化能力，在各個研究領域均取得了長足的進展。尿源干細胞是一種新的干細胞來源，屬于間充質(zhì)干細胞，可從新鮮尿液中獲取，其獲取手段無創(chuàng)，可反復收集從而得到大量的起始細胞。間充質(zhì)干細胞對腎功能有改善作用，而尿源干細胞最可能的來源是腎臟，組織來源上的優(yōu)勢使之可能對腎功能具備更明顯的改善作用。 研究目的： 研究尿源干細胞是否對慢性腎病具有治療作用，并初探其機制。 研究方法： 1.從健康供體新鮮尿液中提取尿源干細胞，通過自我更新能力、多向分化能力、表面標志物情況對尿源干細胞進行鑒定和確認。 2.向裸小鼠腎臟中注射尿源干細胞，在注射細胞1周、2周、3周、4周后處死小鼠、收集腎臟，觀察尿源干細胞的分布情況，并通過觀察其表面標志物的表達情況初探其分化為腎臟細胞的可能性。 3.實驗動物分為3組，第一組為年齡匹配的正常對照，第二組為接受注射尿源干細胞的慢性腎病大鼠模型，第三組為注射磷酸鹽緩沖液的慢性腎病大鼠模型，通過對其血清肌酐、腎小球濾過率的隨訪判斷尿源干細胞對腎功能的改善作用，并對3組腎臟進行組織形態(tài)學的評估。 結果： 1.新鮮尿液中獲得的細胞克隆可自我更新，能夠分化成為脂肪細胞和骨細胞。尿源干細胞表達間充質(zhì)干細胞的表面標志物：CD24、CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD146等；不表達造血細胞表面抗原：CD31、CD34、CD45等。 2.尿源干細胞可以在腎臟組織內(nèi)存活，在有限的隨訪時間內(nèi)，顯微鏡下未發(fā)現(xiàn)與腎臟組織結構的融合，且尿源干細胞始終表達間充質(zhì)干細胞的表面抗原，分化的可能性較小。 3.尿源干細胞對腎功能具有改善作用，相較于注射磷酸鹽緩沖液的對照組，注射尿源干細胞的動物模型血清肌酐降低、腎小球濾過率升高。尿源干細胞對腎臟的組織學形態(tài)有改善作用，相較于注射磷酸鹽緩沖液的對照組，注射尿源干細胞的動物模型健康腎單元的數(shù)量增加、一型膠原和三型膠原數(shù)量減少、腎臟間質(zhì)炎性細胞浸潤減輕。 結論： 尿源干細胞可能對慢性腎病患者的腎功能有改善作用，可能成為無創(chuàng)的、自體的治療慢性腎病的新的細胞來源，其作用機制和優(yōu)化的治療手段仍需要進一步的研究。
[Abstract]:Background :

Chronic kidney disease is a common disease that can lead to uremia and cardiovascular system complications . The incidence of chronic kidney disease in the world is increasing . The epidemiology of chronic kidney disease in China is about 10 . 25 % of the total population .

Cell therapy has been paid more and more attention in recent years , especially in stem cells , due to its strong self - renewal and multi - directional differentiation ability , it has made great progress in various research fields . The urine source stem cells are a new source of stem cells , which can be obtained from fresh urine , and can be collected repeatedly to obtain a large number of initial cells .

Purpose of study :

To study whether urine source stem cells have therapeutic effect on chronic kidney disease and explore its mechanism .

Study method :

1 . The urine source stem cells are extracted from fresh urine of healthy donors , and the urine source stem cells are identified and confirmed by self - updating capability , multi - directional differentiation ability and surface markers .

2 . To inject urine source stem cells into the kidney of nude mice . After 1 week , 2 weeks , 3 weeks and 4 weeks of injection , mice were sacrificed , the kidney was collected , the distribution of urine source stem cells was observed , and the possibility of differentiation into kidney cells was investigated by observing the expression of their surface markers .

3 . The experimental animals were divided into three groups , the first group is the normal control group matched with age , the second group is the rat model of chronic kidney disease receiving the injection urine source stem cell , the third group is the rat model of chronic kidney disease injected with phosphate buffer solution , and the function of improving the renal function of the urine source stem cell is judged by the follow - up of serum creatinine and glomerular filtration rate , and the three groups of kidneys are evaluated .

Results :

1 . The cell clones obtained in fresh urine can be self - updated to differentiate into adipocytes and osteocytes . Surface markers of mesenchymal stem cells expressed by urine derived stem cells : CD24 , CD29 , CD44 , CD73 , CD90 , CD105 , CD146 , etc . ;
Do not express hematopoietic cell surface antigen : CD31 , CD34 , CD45 , etc .

2 . The urine source stem cells can survive in the renal tissue , and in a limited follow - up time , there is no fusion with the kidney tissue structure under the microscope , and the urine source stem cells always express the surface antigen of the mesenchymal stem cells , and the possibility of differentiation is small .

3 . Urine derived stem cells have an improved effect on renal function . Compared with the control group injected with phosphate buffer solution , the serum creatinine of the animal model injected with urine source stem cells is decreased , and the glomerular filtration rate is increased . The number of healthy kidney cells in the animal model of the injected urine source stem cells is increased compared with the control group injected with phosphate buffer solution , the number of the type I collagen and the type III collagen is reduced , and the infiltration of the renal interstitial inflammatory cell is reduced .

Conclusion :

Urine derived stem cells may improve the renal function of patients with chronic kidney disease , and may be non - invasive , autologous therapy for chronic kidney disease . The mechanism of action and optimization of treatment still need further research .
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R692;R-332

【共引文獻】

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本文編號：1941930