本文選題：TRIM38 + 狼瘡腎炎復(fù)發(fā)　； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus,SLE)是一種侵犯多系統(tǒng)的,以多器官功能損傷為特征的自身免疫性疾病,狼瘡腎炎(Lupus nephritis,LN)是系統(tǒng)性紅斑狼瘡常見的并發(fā)癥,也是患者致殘的主要病因之一。LN是免疫復(fù)合物介導(dǎo)的腎炎,其發(fā)病機(jī)制尚不確切。目前認(rèn)為LN的發(fā)病機(jī)制可能與遺傳因素及T細(xì)胞、B細(xì)胞、單核細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞功能紊亂有關(guān)。本課題組前期曾行基因篩查實驗發(fā)現(xiàn),TRIM38(tripartite motif-containing 38)m RNA在初治的LN患者外周血中表達(dá)水平升高,提示其可能參與了LN的發(fā)病過程,但是目前暫無該基因在復(fù)發(fā)的LN中的表達(dá)情況及與LN病情活動度、臨床指標(biāo)等相關(guān)性的研究報道。目的:本研究通過實時定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的方法檢測復(fù)發(fā)的LN患者治療前后外周血中TRIM38 m RNA表達(dá)水平變化,觀察其與臨床指標(biāo)的相關(guān)性,探討其與LN復(fù)發(fā)的關(guān)系,旨在初步探索TRIM38作為判斷LN患者復(fù)發(fā)、療效預(yù)測的分子標(biāo)志物的可能性。該項無創(chuàng)性指標(biāo)的檢測,可能對于復(fù)發(fā)的LN患者的預(yù)后和治療方案的調(diào)整具有重大意義。方法:1研究對象及分組收集河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院風(fēng)濕免疫科2015年7月至2016年10月住院的復(fù)發(fā)的LN患者25例臨床資料作為治療前組,14例復(fù)發(fā)的LN患者接受2周激素及免疫抑制劑治療作為治療后組,所有入組患者均符合ACR修訂的SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)(2009)(附表1),無肝炎、結(jié)核等傳染性疾病、各種感染性疾病、腫瘤及其他結(jié)締組織病。所有患者治療前后均進(jìn)行病情活動度評分(附SLEDAI評分表)。選取32例與患者組年齡、性別相匹配的健康志愿者作為健康對照組。所有患者均經(jīng)河北醫(yī)大二院倫理委員會批準(zhǔn)并簽署書面知情同意書。2研究方法留取所有患者治療前后清晨空腹外周血,并記錄:24小時尿蛋白定量、血尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(Serum creatinine,Scr)、免疫球蛋白A(Immunoglobulin A,Ig A)、免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,Ig G)、免疫球蛋白M(Immunoglobulin M,Ig M)、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4、甘油三酯(triglyceride,TG)、總膽固醇(total cholesterol,TC)、總膽固醇(Total bilirubin,TBIL)及其他實驗室輔助檢查結(jié)果。空腹外周血提取總RNA,反轉(zhuǎn)錄為c DNA。采用q PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因與內(nèi)參基因(GAPDH),結(jié)果以單個PCR反應(yīng)達(dá)到對數(shù)擴(kuò)增期的循環(huán)數(shù)(cycle threshold,Ct)來表示。目的基因的Ct值減去GAPDH的Ct值,得到△Ct,基因的表達(dá)量由2-△Ct來表示。比較健康對照組、治療前及治療后組三組間目的基因表達(dá)水平的差異,及其與臨床、實驗室各項指標(biāo)的相關(guān)性,并分析患者臨床指標(biāo)間的相關(guān)性。3統(tǒng)計方法采用SPSS 21.0版統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。對所有原始數(shù)據(jù)進(jìn)行分析及處理。實驗數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布,應(yīng)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,不符合正態(tài)分布,應(yīng)用中位數(shù)(四分位數(shù)間距)M(QR)表示。兩樣本計量資料的比較,若符合正態(tài)分布且方差齊時采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗,若不符合正態(tài)分布采用秩和檢驗(U檢驗)。多個獨(dú)立樣本比較服從正態(tài)分布采用方差分析,不服從正態(tài)分布采用秩和檢驗(H檢驗)。兩變量間的相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析法,不服從正態(tài)分布采用Spearman相關(guān)分析。為研究基因表達(dá)水平的影響因素,采用多元線性回歸分析,方法采用逐步回歸分析。以α=0.05作為檢驗水準(zhǔn),P0.05認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1健康對照組及患者血液標(biāo)本提取RNA健康對照組RNA濃度為49.50(50.28),LN患者RNA濃度為84.60(74.06),純度OD 260nm/280nm的比值約2.08±0.04,采用1%瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示18S和28s條帶清晰,28S的亮度是18S的2倍左右,說明完整性良好。2 TRIM m RNA的擴(kuò)增瓊脂糖電泳結(jié)果顯示TRIM38 m RNA條帶清晰且為單一條帶,與預(yù)期大小172 bp相一致。3 TRIM38 m RNA實時熒光定量PCR結(jié)果實時熒光定量RCR結(jié)果顯示擴(kuò)增良好,融解曲線為單峰,峰值為88.36,電泳結(jié)果顯示條帶單一、大小正確。4 TRIM38 m RNA在健康對照組、復(fù)發(fā)的LN治療前組及治療后組中的表達(dá)情況4.1患者無論治療前0.768(0.690)及治療后0.587(0.472),其TRIM38m RNA表達(dá)水平較健康對照組0.361±(0.603)均升高,三組之間比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4.2與健康對照組相比,復(fù)發(fā)的LN患者在治療前其TRIM38 m RNA的表達(dá)水平顯著增加,兩組間較有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4.3治療后,TRIM38 m RNA的表達(dá)水平較治療前減低,但兩組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4.4治療后,TRIM38 m RNA的表達(dá)水平仍高于健康對照組,但無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。5 TRIM38 m RNA表達(dá)水平與患者臨床指標(biāo)的相關(guān)性TRIM38 m RNA表達(dá)水平與TG呈正相關(guān)(r=0.500,P=0.015),與補(bǔ)體C3呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.513,P=0.009),與補(bǔ)體C4、SLEDAI評分、24小時尿蛋白定量、BUN、Scr、Ig A、Ig G、Ig M、TC、TBIL無相關(guān)性(P0.05)。6研究基因表達(dá)水平的影響因素多元線性回歸中采用逐步回歸分析顯示只有C3進(jìn)入方程,方程為:2-△Ct=1.143-0.782 C3(P0.05)。7按照抗ds-DNA抗體水平進(jìn)行分組,不同抗ds-DNA抗體水平患TRIM38m RNA表達(dá)水平的比較采用抗ds-DNA抗體比值取倒數(shù)進(jìn)行分組,不同抗ds-DNA抗體水平的患者TRIM38 m RNA的表達(dá)量(0.887±0.714vs0.857±0.339)無顯著差異(P0.05)。8按照24小時尿蛋白水平進(jìn)行分組,不同尿蛋白水平的患者TRIM38m RNA表達(dá)水平的比較不同尿蛋白水平的患者TRIM38 m RNA的表達(dá)量(0.763±0.463)vs(0.577±0.302)vs(0.832±0.474)無顯著差異(P0.05)。學(xué)意義(P0.05),Ig A、24小時尿蛋白定量無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。9經(jīng)激素及免疫抑制劑治療后:SLEDAI評分,BUN、Scr、TBIL有統(tǒng)計結(jié)論:1 TRIM38 m RNA在復(fù)發(fā)的LN患者外周血中表達(dá)升高,提示該基因可能參與了LN復(fù)發(fā)過程,對探索LN的發(fā)病機(jī)制有重大意義,為LN的治療提供經(jīng)驗。2 TRIM38 m RNA表達(dá)量經(jīng)激素及免疫抑制劑治療后下降,但治療前后并無統(tǒng)計學(xué)差異,需擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究。3 TRIM38很可能參與了LN的脂代謝異常。4 TRIM38可能與LN復(fù)發(fā)病情輕重程度無關(guān)。
[Abstract]:Systemic lupus erythematosus ( SLE ) is a kind of autoimmune disease with multiple systemic lupus erythematosus ( SLE ) , which is characterized by multi - organ dysfunction . ,鍏嶇柅鐞冭泲鐧紾(Immunoglobulin G,Ig G),鍏嶇柅鐞冭泲鐧組(Immunoglobulin M,Ig M),琛ヤ綋C3,琛ヤ綋C4,鐢樻補(bǔ)涓夐叝(triglyceride,TG),鎬昏儐鍥洪唶(total cholesterol,TC),鎬昏儐鍥洪唶(Total bilirubin,TBIL)鍙?qiáng)鍏朵粬瀹為獙瀹よ緟鍔⿱偅?

本文編號：1930464