本文選題：TRIM38 + 狼瘡腎炎復發(fā)　； 參考：《河北醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus,SLE)是一種侵犯多系統(tǒng)的,以多器官功能損傷為特征的自身免疫性疾病,狼瘡腎炎(Lupus nephritis,LN)是系統(tǒng)性紅斑狼瘡常見的并發(fā)癥,也是患者致殘的主要病因之一。LN是免疫復合物介導的腎炎,其發(fā)病機制尚不確切。目前認為LN的發(fā)病機制可能與遺傳因素及T細胞、B細胞、單核細胞等多種免疫細胞功能紊亂有關。本課題組前期曾行基因篩查實驗發(fā)現(xiàn),TRIM38(tripartite motif-containing 38)m RNA在初治的LN患者外周血中表達水平升高,提示其可能參與了LN的發(fā)病過程,但是目前暫無該基因在復發(fā)的LN中的表達情況及與LN病情活動度、臨床指標等相關性的研究報道。目的:本研究通過實時定量聚合酶鏈式反應的方法檢測復發(fā)的LN患者治療前后外周血中TRIM38 m RNA表達水平變化,觀察其與臨床指標的相關性,探討其與LN復發(fā)的關系,旨在初步探索TRIM38作為判斷LN患者復發(fā)、療效預測的分子標志物的可能性。該項無創(chuàng)性指標的檢測,可能對于復發(fā)的LN患者的預后和治療方案的調(diào)整具有重大意義。方法:1研究對象及分組收集河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院風濕免疫科2015年7月至2016年10月住院的復發(fā)的LN患者25例臨床資料作為治療前組,14例復發(fā)的LN患者接受2周激素及免疫抑制劑治療作為治療后組,所有入組患者均符合ACR修訂的SLE診斷標準(2009)(附表1),無肝炎、結核等傳染性疾病、各種感染性疾病、腫瘤及其他結締組織病。所有患者治療前后均進行病情活動度評分(附SLEDAI評分表)。選取32例與患者組年齡、性別相匹配的健康志愿者作為健康對照組。所有患者均經(jīng)河北醫(yī)大二院倫理委員會批準并簽署書面知情同意書。2研究方法留取所有患者治療前后清晨空腹外周血,并記錄:24小時尿蛋白定量、血尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(Serum creatinine,Scr)、免疫球蛋白A(Immunoglobulin A,Ig A)、免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,Ig G)、免疫球蛋白M(Immunoglobulin M,Ig M)、補體C3、補體C4、甘油三酯(triglyceride,TG)、總膽固醇(total cholesterol,TC)、總膽固醇(Total bilirubin,TBIL)及其他實驗室輔助檢查結果。空腹外周血提取總RNA,反轉錄為c DNA。采用q PCR技術擴增目的基因與內(nèi)參基因(GAPDH),結果以單個PCR反應達到對數(shù)擴增期的循環(huán)數(shù)(cycle threshold,Ct)來表示。目的基因的Ct值減去GAPDH的Ct值,得到△Ct,基因的表達量由2-△Ct來表示。比較健康對照組、治療前及治療后組三組間目的基因表達水平的差異,及其與臨床、實驗室各項指標的相關性,并分析患者臨床指標間的相關性。3統(tǒng)計方法采用SPSS 21.0版統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。對所有原始數(shù)據(jù)進行分析及處理。實驗數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布,應用均數(shù)±標準差(±s)表示,不符合正態(tài)分布,應用中位數(shù)(四分位數(shù)間距)M(QR)表示。兩樣本計量資料的比較,若符合正態(tài)分布且方差齊時采用兩獨立樣本的t檢驗,若不符合正態(tài)分布采用秩和檢驗(U檢驗)。多個獨立樣本比較服從正態(tài)分布采用方差分析,不服從正態(tài)分布采用秩和檢驗(H檢驗)。兩變量間的相關性分析采用Pearson相關分析法,不服從正態(tài)分布采用Spearman相關分析。為研究基因表達水平的影響因素,采用多元線性回歸分析,方法采用逐步回歸分析。以α=0.05作為檢驗水準,P0.05認為有統(tǒng)計學意義。結果:1健康對照組及患者血液標本提取RNA健康對照組RNA濃度為49.50(50.28),LN患者RNA濃度為84.60(74.06),純度OD 260nm/280nm的比值約2.08±0.04,采用1%瓊脂糖凝膠電泳結果顯示18S和28s條帶清晰,28S的亮度是18S的2倍左右,說明完整性良好。2 TRIM m RNA的擴增瓊脂糖電泳結果顯示TRIM38 m RNA條帶清晰且為單一條帶,與預期大小172 bp相一致。3 TRIM38 m RNA實時熒光定量PCR結果實時熒光定量RCR結果顯示擴增良好,融解曲線為單峰,峰值為88.36,電泳結果顯示條帶單一、大小正確。4 TRIM38 m RNA在健康對照組、復發(fā)的LN治療前組及治療后組中的表達情況4.1患者無論治療前0.768(0.690)及治療后0.587(0.472),其TRIM38m RNA表達水平較健康對照組0.361±(0.603)均升高,三組之間比較有統(tǒng)計學意義(P0.05)。4.2與健康對照組相比,復發(fā)的LN患者在治療前其TRIM38 m RNA的表達水平顯著增加,兩組間較有統(tǒng)計學意義(P0.05)。4.3治療后,TRIM38 m RNA的表達水平較治療前減低,但兩組間比較無統(tǒng)計學意義(P0.05)。4.4治療后,TRIM38 m RNA的表達水平仍高于健康對照組,但無統(tǒng)計學意義(P0.05)。5 TRIM38 m RNA表達水平與患者臨床指標的相關性TRIM38 m RNA表達水平與TG呈正相關(r=0.500,P=0.015),與補體C3呈顯著負相關(r=-0.513,P=0.009),與補體C4、SLEDAI評分、24小時尿蛋白定量、BUN、Scr、Ig A、Ig G、Ig M、TC、TBIL無相關性(P0.05)。6研究基因表達水平的影響因素多元線性回歸中采用逐步回歸分析顯示只有C3進入方程,方程為:2-△Ct=1.143-0.782 C3(P0.05)。7按照抗ds-DNA抗體水平進行分組,不同抗ds-DNA抗體水平患TRIM38m RNA表達水平的比較采用抗ds-DNA抗體比值取倒數(shù)進行分組,不同抗ds-DNA抗體水平的患者TRIM38 m RNA的表達量(0.887±0.714vs0.857±0.339)無顯著差異(P0.05)。8按照24小時尿蛋白水平進行分組,不同尿蛋白水平的患者TRIM38m RNA表達水平的比較不同尿蛋白水平的患者TRIM38 m RNA的表達量(0.763±0.463)vs(0.577±0.302)vs(0.832±0.474)無顯著差異(P0.05)。學意義(P0.05),Ig A、24小時尿蛋白定量無統(tǒng)計學差異(P0.05)。9經(jīng)激素及免疫抑制劑治療后:SLEDAI評分,BUN、Scr、TBIL有統(tǒng)計結論:1 TRIM38 m RNA在復發(fā)的LN患者外周血中表達升高,提示該基因可能參與了LN復發(fā)過程,對探索LN的發(fā)病機制有重大意義,為LN的治療提供經(jīng)驗。2 TRIM38 m RNA表達量經(jīng)激素及免疫抑制劑治療后下降,但治療前后并無統(tǒng)計學差異,需擴大樣本量進一步研究。3 TRIM38很可能參與了LN的脂代謝異常。4 TRIM38可能與LN復發(fā)病情輕重程度無關。
[Abstract]:Systemic lupus erythematosus ( SLE ) is a kind of autoimmune disease with multiple systemic lupus erythematosus ( SLE ) , which is characterized by multi - organ dysfunction . ,鍏嶇柅鐞冭泲鐧紾(Immunoglobulin G,Ig G),鍏嶇柅鐞冭泲鐧組(Immunoglobulin M,Ig M),琛ヤ綋C3,琛ヤ綋C4,鐢樻補涓夐叝(triglyceride,TG),鎬昏儐鍥洪唶(total cholesterol,TC),鎬昏儐鍥洪唶(Total bilirubin,TBIL)鍙婂叾浠栧疄楠屽杈呭姪媯，

本文編號：1930464