發(fā)布時間：2018-05-19 14:28

  本文選題：草酸鈣晶體 + 腎小管上皮��； 參考：《廣東醫(yī)學(xué)》2017年14期

【摘要】：目的探討草酸鈣晶體黏附腎小管上皮引起緊密連接(TJs)損傷與TRPV5變化的調(diào)節(jié)機(jī)制。方法利用一水草酸鈣晶體(COM)暴露犬腎小管上皮細(xì)胞(MDCK)及TRPV5穩(wěn)定過表達(dá)HEK-293細(xì)胞,2 mmol/L EGTA處理構(gòu)建細(xì)胞TJs損傷模型;采用Western blot、熒光免疫、偏光顯微鏡等手段,分別檢測TJs主要結(jié)構(gòu)蛋白、Na~+-K~+-ATPase、TRPV5、晶體黏附量等指標(biāo),評估草酸鈣晶體引起腎小管上皮細(xì)胞TJs損傷及TRPV5表達(dá)的變化。結(jié)果 COM呈下調(diào)MDCK細(xì)胞TJs蛋白Occludin和ZO-1表達(dá)水平(P0.01)。TJs損害后,COM黏附增加(P0.05);Na~+-K~+-ATPase介導(dǎo)TJs修復(fù),在1 min時表達(dá)最強(qiáng),隨著TJs修復(fù)完成而逐步減弱,晶體黏附力也逐漸減弱(P0.01)。COM與TRPV5穩(wěn)轉(zhuǎn)HEK-293細(xì)胞株共培養(yǎng),下調(diào)TRPV5總蛋白及膜蛋白表達(dá)水平(P0.01)。結(jié)論草酸鈣晶體引起腎小管上皮細(xì)胞之間的TJs受損,促進(jìn)草酸鈣晶體黏附;細(xì)胞極性破壞,TRPV5膜蛋白轉(zhuǎn)運失調(diào),最終引起TRPV5膜蛋白表達(dá)減少。尿鈣增加,負(fù)反饋激發(fā)Na~+-K~+-ATPase表達(dá)使TJs進(jìn)入修復(fù)環(huán)節(jié);隨著TJs的自我修復(fù),草酸鈣晶體黏附減少。
[Abstract]:Objective to investigate the mechanism of TJs damage induced by calcium oxalate crystal adhesion to renal tubule epithelium and the change of TRPV5. Methods using calcium oxalate monohydrate to expose canine renal tubular epithelial cells (MDCK) and TRPV5 stable overexpression HEK-293 cell line 2 mmol/L EGTA to construct cell TJs injury model, Western blot, fluorescence immunoassay, polarizing microscope, etc. The changes of TJs damage and TRPV5 expression in renal tubular epithelial cells induced by calcium oxalate crystals were evaluated by detecting the main structural protein of TJs, Na ~ -K ~ -AT Paseate TRPV5 and the amount of crystal adhesion. Results COM down-regulated the expression level of TJs protein Occludin and ZO-1 in MDCK cells. After P0.01TJs damage, com adhesion increased and TJs repair was mediated by Na ~ -K ~ -ATPase mediated by P0.05K ~ -ATPase. The expression of TJs was strongest at 1 min, and gradually weakened with the completion of TJs repair. The adhesion force of crystal was also decreased gradually. Com and TRPV5 stabilized HEK-293 cell line co-culture, and down-regulated the expression level of TRPV5 total protein and membrane protein (P0.01). Conclusion calcium oxalate crystals can damage TJs between renal tubular epithelial cells and promote the adhesion of calcium oxalate crystals, and the cell polarity disrupts TRPV5 membrane protein transport disorder, and finally leads to the decrease of TRPV5 membrane protein expression. The increase of urine calcium and negative feedback stimulated the expression of Na ~ -K ~ -ATPase made TJs enter the repair stage, and the adhesion of calcium oxalate crystals decreased with the self-repair of TJs.
【作者單位】： 廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院泌尿外科廣東省泌尿外科重點實驗室廣州市泌尿外科研究所;
【基金】：廣東省優(yōu)秀青年教師培養(yǎng)計劃項目(編號:B158027) 廣州市科技計劃項目(編號:201610010169) 廣州市市屬高�？蒲许椖�(編號:1201620038)
【分類號】：R692.4

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本文編號：1910460