本文選題：微小RNA- + 慢病毒載體　； 參考：《中國病理生理雜志》2017年07期

【摘要】：目的:探討沉默微小RNA-218(microRNA-218,miR-218)表達(dá)對(duì)鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)誘導(dǎo)的糖尿病腎病大鼠腎臟組織的保護(hù)作用及其可能機(jī)制。方法:采用單次腹腔注射STZ(50 mg/kg)方法制備糖尿病大鼠模型并構(gòu)建miR-218短發(fā)夾RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒載體。SD大鼠被隨機(jī)分為健康對(duì)照組、糖尿病模型組、空載慢病毒組及miR-218-shRNA組。于自動(dòng)生化儀上檢測(cè)不同時(shí)點(diǎn)(4、8和12周)大鼠血糖、24h尿蛋白量、血清肌酐(serum creatinine,SCr)及血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)含量。實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RTqPCR)檢測(cè)腎臟組織miR-218的表達(dá)。RT-qPCR和Western blot檢測(cè)血紅素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)、腎病蛋白(nephrin)和p38絲裂原激活的蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)的mRNA及蛋白表達(dá)水平。Caspase-3活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)caspase-3活性。末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)法檢測(cè)腎臟組織細(xì)胞凋亡。結(jié)果:與健康對(duì)照組相比,STZ處理后大鼠miR-218表達(dá)水平顯著升高。同時(shí)模型大鼠的血糖、24 h尿蛋白量、SCr及BUN含量顯著升高(P0.05);模型大鼠腎臟組織中HO-1和nephrin的mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著降低,而p38 MAPK蛋白的磷酸化水平顯著升高;另外,模型大鼠腎臟組織中的caspase-3活性也顯著升高。模型大鼠感染miR-218-shRNA后,miR-218表達(dá)水平顯著下降并可以顯著逆轉(zhuǎn)上述效應(yīng)。miR-218-shRNA組腎臟組織細(xì)胞的凋亡水平顯著低于糖尿病模型組及空載慢病毒組。結(jié)論:miR-218參與了糖尿病大鼠的腎臟損傷,慢病毒載體沉默其表達(dá)能有效抑制腎臟組織細(xì)胞的凋亡,提示miR-218可以作為糖尿病腎病的基因治療靶點(diǎn)。
[Abstract]:Aim: to investigate the protective effect of silencing microRNA-218mRNA-218miR-218 on renal tissue of streptozotocincinin-induced diabetic nephropathy (DN) rats and its possible mechanism. Methods: diabetic rats were induced by single intraperitoneal injection of STZ(50 mg / kg and miR-218 short hairpin RNA(short hairpin RNAs were constructed. SD rats were randomly divided into healthy control group, diabetes model group, no-load lentivirus group and miR-218-shRNA group. 24 hours urine protein, serum creatinine (SCR) and blood urea nitrogen (urea nitrogenn bun) were measured at different time points (4 weeks and 12 weeks). Real-time quantitative PCR was used to detect the expression of miR-218 in renal tissues. RT-qPCR and Western blot were used to detect the expression of heme oxygenase 1(heme oxygenase-1 (HO-1), p38 mitogen-activated protein kinase p38 (p38 mitogen-activated protein kinasep38 MAPK) and the activity of caspase-3. Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP Nick end labeling terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling was used to detect apoptosis in renal tissue. Results: compared with the control group, the expression of miR-218 increased significantly in rats treated with STZ. At the same time, the contents of SCR and BUN in 24 h urine protein of model rats were significantly increased, while the expression of mRNA and protein of HO-1 and nephrin in renal tissues of model rats was significantly decreased, while the phosphorylation level of p38 MAPK protein was significantly increased. The activity of caspase-3 in kidney tissue of model rats was also significantly increased. The expression of miR-218 decreased significantly after miR-218-shRNA infection in model rats, and the apoptosis level of renal tissue cells in miR-218-shRNA group was significantly lower than that in diabetic model group and no-loaded lentivirus group. Conclusion: 1 miR-218 is involved in renal injury in diabetic rats, and lentivirus vector silencing its expression can effectively inhibit the apoptosis of renal tissue cells, suggesting that miR-218 can be used as a target of gene therapy for diabetic nephropathy.
【作者單位】： 西安市中心醫(yī)院腎臟內(nèi)科;銅川礦務(wù)局中心醫(yī)院腎臟內(nèi)科;
【分類號(hào)】：R587.2;R692.9

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本文編號(hào)：1891171