本文選題：尿路上皮腫瘤 + TERT啟動(dòng)子　； 參考：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2016年博士論文

【摘要】：背景尿路上皮腫瘤(Urothelial Carcinoma, UC)是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤,近年來(lái)其發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈逐年上升的趨勢(shì),目前其發(fā)病機(jī)理尚未明確。膀胱癌的診斷及術(shù)后復(fù)查除影像學(xué)外,還需要膀胱鏡檢查,費(fèi)用高且有創(chuàng),尋求無(wú)創(chuàng)的檢查如生物標(biāo)記物成為研究熱點(diǎn)。在真核生物染色體末端由8ˉ20kb串聯(lián)重復(fù)DNA(TTAGGG)序列組成,稱為端粒,并被相關(guān)蛋白質(zhì)保護(hù)形成端粒蛋白復(fù)合體,是封閉染色體末端、避免染色體融合和降解的重要結(jié)構(gòu)單元。在正常體細(xì)胞中,每次有絲分裂時(shí)端粒不完全復(fù)制,導(dǎo)致隨著細(xì)胞分裂次數(shù)增多,端粒序列逐漸縮短。當(dāng)端粒磨損至不足以維持染色體正常結(jié)構(gòu)及功能時(shí),則染色體DNA發(fā)生斷裂,最終進(jìn)入細(xì)胞衰老或凋亡程序,稱為Hayflick界限。端粒酶是RNA依賴的DNA聚合酶,是由蛋白質(zhì)和RNA構(gòu)成的核糖蛋白體,其功能主要由端粒逆轉(zhuǎn)錄酶(Telomerase Reverse Transcriptase, TERT)和端粒酶RNA模板完成,還包括相關(guān)結(jié)合因子,如DKC、NOP10、 GAR1和NHP2, DNA復(fù)制末期在染色體末端通過RNA模板逆轉(zhuǎn)錄合成端粒重復(fù)序列,TERT是端粒酶的活性組分及限速步驟。85%-90%的腫瘤細(xì)胞存在端粒酶的持續(xù)高表達(dá),依靠端粒酶異常激活和／或非傳統(tǒng)端粒延長(zhǎng)機(jī)制以合成丟失的端粒序列,被認(rèn)為在細(xì)胞永生化和腫瘤形成過程中發(fā)揮著重要作用。人類TERT基因位于染色體5p15.33,正常體細(xì)胞攜帶2倍復(fù)制的TERT基因,其調(diào)控受到多因素影響,包括轉(zhuǎn)錄、RNA剪切、RNA成熟、轉(zhuǎn)錄后修飾、翻譯、裝配、表觀遺傳學(xué)調(diào)控以及基因拷貝數(shù)改變,特別體現(xiàn)在轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控。近年有研究認(rèn)為TERT基因啟動(dòng)子突變與多種腫瘤相關(guān)。目的本課題通過檢測(cè)尿路上皮腫瘤患者的腫瘤組織及尿液中TERT啟動(dòng)子的突變情況,旨在探討TERT啟動(dòng)子能否作為尿路上皮腫瘤的理想生物標(biāo)記,協(xié)助診斷并有助于術(shù)后隨訪,早期發(fā)現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)。擬檢測(cè)TERT啟動(dòng)子在腫瘤組織及尿液中的突變情況,比較腫瘤組織和尿液中TERT啟動(dòng)子突變的表達(dá)差異,分析TERT啟動(dòng)子突變與臨床病理的相關(guān)性,以及探討患者術(shù)后隨訪時(shí)尿液中TERT啟動(dòng)子突變與腫瘤復(fù)發(fā)的相關(guān)性。方法選取2015年7月至2016年3月在北京協(xié)和醫(yī)院泌尿外科住院行手術(shù)治療的尿路上皮腫瘤患者的腫瘤組織標(biāo)本(石蠟包埋)42例,手術(shù)前尿液標(biāo)本99例,非尿路上皮腫瘤患者尿液標(biāo)本26例,以及門診膀胱鏡室行膀胱鏡檢查的膀胱癌術(shù)后患者尿液標(biāo)本22例。查閱研究對(duì)象的臨床病歷資料,獲得基線資料、臨床分期和術(shù)后病理等信息,采用Sanger測(cè)序方法,檢測(cè)TERT啟動(dòng)子在腫瘤組織及尿液中的突變情況。運(yùn)用SPSS19.0軟件,分析TERT啟動(dòng)子突變?cè)诿谀蛳到y(tǒng)疾病中的表達(dá)差異,與臨床病理的相關(guān)性,以及作為生物標(biāo)記用于尿路上皮腫瘤的臨床診斷和預(yù)后隨訪。結(jié)果1.腫瘤組織TERT啟動(dòng)子突變?cè)?2例腫瘤組織標(biāo)本中(7例腎盂癌、7例輸尿管癌和28例膀胱癌),共有25例(59.5%)組織存在TERT肩動(dòng)子突變,其中8例(32.0%)發(fā)生-124bp GA突變,17例(68.0%)發(fā)生-146bD GA突變。男性患者腫瘤組織TERT啟動(dòng)子突變率(77.8%)要高于女性患者(26.7%)(P=0.001)。在7例腎盂癌中,有3例(42.9%)發(fā)生TERT啟動(dòng)子突變,均為-146bp GA突變。在7例輸尿管癌中,有3例(42.9%)發(fā)生TERT啟動(dòng)子突變,其中1例(33.3%)發(fā)生一-124bp GA突變,2例(66.7%)發(fā)生-146bp GA突變。在28例膀胱癌中,有1 9例(67.9%)發(fā)生TERT啟動(dòng)子突變,其中7例(36.8%)發(fā)生-124bp G A突變,1 2例(63.2%)發(fā)生-146bp GA突變,并且腫瘤直徑≥3cm腫瘤組織TERT啟動(dòng)子突變率(90.9%)要高于腫瘤直徑3cm(52.9%)(P=0.049)2.尿液TERT啟動(dòng)子突變2.1尿路上皮腫瘤尿液TERT啟動(dòng)子突變?cè)?9例尿液標(biāo)本中(9例腎盂癌、1 6例輸尿管癌和74例膀胱癌),共有23例(23.2%)尿液存在TERT啟動(dòng)子突變,其中1 3例(56.5%)發(fā)生-124bp GA突變,1 0例(43.5%)發(fā)生-146bp GA突變。男性患者尿液TERT啟動(dòng)子突變率(30.8%)要高于女性患者(8.8%)(P=0.014),臨床分期≥pT2尿液TERT啟動(dòng)子突變率(40.7%)要高于臨床分期pTa+pTl(16.7％)(P=0.012),腫瘤直徑≥3cm尿液TERT啟動(dòng)子突變率(38.7%)要高于腫瘤直徑＜3cm(16.2%)(P=0.014)。在9例腎盂癌中,有2例(22.2%)發(fā)生TERT啟動(dòng)子突變,其中1例(50.0%)發(fā)生-124bp GA突變,1例(50.0%)發(fā)生-146bp GA突變。在16例輸尿管癌中,有2例(12.5%)發(fā)生TERT啟動(dòng)子突變,其中1例(50.0%)發(fā)生-124bp GA突變,1例(50.0%)發(fā)生-146bp GA突變。在74例膀胱癌中,有19例(25.7%)發(fā)生TERT啟動(dòng)子突變,其中11例(57.9%)發(fā)生-124bp GA突變,8例(42.1%)發(fā)生-146bp GA突變,并且病理分級(jí)G3尿液TERRI啟動(dòng)子突變率(35.0%)要高于病理分級(jí)Gl+G2(14.7%)(P=0.046)。以腫瘤組織Sanger測(cè)序法作為金標(biāo)準(zhǔn),在42例尿路上皮腫瘤患者中,尿液Sanger測(cè)序法檢測(cè)TERT啟動(dòng)子突變的敏感性為52.0%,特異性為100%,準(zhǔn)確性為71.4%。2.2術(shù)后尿液TERT啟動(dòng)子突變?cè)?2例行膀胱鏡檢查的膀胱癌術(shù)后患者尿液標(biāo)本中(6例腫瘤復(fù)發(fā),16例腫瘤未復(fù)發(fā)),僅有3例(13.6%)尿液存在TERT啟動(dòng)子突變,其中2例(66.7%)發(fā)生-124bp GA突變,1例(33.3%)發(fā)生-146bp GA突變。在6例腫瘤復(fù)發(fā)患者中,有2例(33.3%)尿液存在TERT啟動(dòng)子突變。術(shù)后隨訪尿液TERT啟動(dòng)子突變與腫瘤復(fù)發(fā)無(wú)明顯相關(guān)性。2.3非尿路上皮腫瘤尿液TERT啟動(dòng)子突變26例非尿路上皮腫瘤患者作為對(duì)照組,其中包括9例腎腫瘤、6例腎上腺腫瘤、6例泌尿系結(jié)石、3例前列腺增生和2例前列腺癌,其尿液均未檢測(cè)到TERT啟動(dòng)子突變,說(shuō)明TERT啟動(dòng)子突變具有相對(duì)的組織特異性。結(jié)論TERT啟動(dòng)子突變?cè)谀蚵飞掀つ[瘤中普遍存在,且能在腫瘤組織及尿液中均檢測(cè)到。在腫瘤組織中,尿路上皮腫瘤的TERT突變率為59.5%(25／42),是高概率事件,并廣泛存在于各個(gè)病理分級(jí)、臨床分期中,提示TERT啟動(dòng)子突變發(fā)生在腫瘤形成早期,可能與腫瘤發(fā)生的啟動(dòng)有關(guān)。在尿液中,尿路上皮腫瘤的TERT突變率為23.2%(23／99),并且與患者性別、臨床分期、病理分級(jí)以及腫瘤直徑有相關(guān)性。而非尿路上皮腫瘤患者尿液均未檢測(cè)到TERT啟動(dòng)子突變,因此可能作為腫瘤標(biāo)記物對(duì)于高分級(jí)(35.0%)、高分期(40.7%)的尿路上皮腫瘤具有臨床診斷和術(shù)后監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā)的意義。腫瘤組織和尿液檢測(cè)到TERT啟動(dòng)子突變位點(diǎn)完全相同,尿液Sanger測(cè)序法檢測(cè)TERT啟動(dòng)子突變的特異性很高而敏感性較低,因此需要找到一種敏感性更高的檢測(cè)方法來(lái)檢測(cè)尿液中存在的微小比例的TERT啟動(dòng)子突變。
[Abstract]:In recent years , the expression of telomerase in tumor tissues and urine of tumor cells , such as DKC , NOP10 , GAR1 and NHP2 , has been studied . In 7 cases of bladder cancer , there were 3 cases ( 76.9 % ) of the tumor tissue samples ( 76.9 % ) . The mutation rate ( 79.8 % ) was higher than that in female patients ( 26.7 % ) ( P = 0.001 ) . There were 2 cases ( 50.0 % ) in urinary tract epithelial tumors ( 55.0 % ) . There were only 3 cases ( 57.0 % ) in urinary tract epithelial tumors .

【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.1

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本文編號(hào)：1883073