本文選題：腎細(xì)胞癌 + miR-218　； 參考：《中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院》2014年博士論文

【摘要】：研究背景：腎癌是常見的泌尿系腫瘤，早期腎癌沒有典型的癥狀和表現(xiàn)，臨床上缺乏早期診斷預(yù)測和判斷預(yù)后的標(biāo)志物，而復(fù)發(fā)性及晚期轉(zhuǎn)移性腎癌的治療效果差，手術(shù)以外的放化療等輔助治療效果不明顯。目前臨床上需要一種新的生物學(xué)標(biāo)志物，能夠?qū)δI臟腫瘤進(jìn)行早期診斷和預(yù)后判斷，并有可能作為腫瘤治療的新靶點，提高腎癌，特別是晚期腎癌的治療效果，延長生存期，使患者受益。 研究目的：本課題擬通過對miR-218在腎癌腫瘤中的特異表達(dá)，以及對腎癌細(xì)胞調(diào)控作用的研究，明確miR-218在腎臟腫瘤中的作用機制，為腎癌的診治提供新的思路。 方法： 1.收集腎癌標(biāo)本，利用實時定量PCR技術(shù)對新鮮腎癌組織及癌旁組織的miR-218表達(dá)量進(jìn)行驗證，以明確miR-218在腎癌組織的表達(dá)情況。 2.應(yīng)用pcDNA3.1(+)載體，以人Has-miR-218設(shè)計引物，PCR法進(jìn)行擴增，再與載體相連接，構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)質(zhì)粒，并在腎癌細(xì)胞株中驗證其效果。 3.使用前期合成的質(zhì)粒，在體外研究中選擇合適腎癌細(xì)胞株，進(jìn)行轉(zhuǎn)染，調(diào)控在腎癌細(xì)胞株中miR-218的表達(dá)水平，研究miR-218對腎癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響，如增殖、侵襲、凋亡能力的改變等情況。 4.采用生物信息學(xué)方法對靶向基因進(jìn)行預(yù)測，篩選出候選靶向基因，利用設(shè)計的引物將目的基因連接入熒光報告載體，轉(zhuǎn)染至腎癌細(xì)胞株內(nèi)，，測定細(xì)胞裂解后的熒光表達(dá)量，并使用Western blot方法測定蛋白水平的表達(dá)變化，驗證miR-218對靶向基因的調(diào)控作用，進(jìn)一步明確調(diào)控的通路。 5.在動物體內(nèi)驗證，miR-218通過RAB6C對腎細(xì)胞癌的調(diào)控作用，以及上調(diào)miR-218的表達(dá)水平對腎癌腫瘤的抑制作用。 結(jié)果： 1．采用PCR方法對腎癌及癌旁組織標(biāo)本的miR-218的表達(dá)量進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)在腎癌組織中，miR-218的表達(dá)水平較正常組織呈現(xiàn)明顯的低表達(dá)，這提示了miR-218在腎細(xì)胞癌中可能是一種抑癌基因； 2.成功構(gòu)建了miR-218表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-miR-218，鑒定檢測符合設(shè)計要求，該載體可以應(yīng)用于miR-218功能及作用機制的研究； 3.應(yīng)用miR-218表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染至腎癌細(xì)胞株中，上調(diào)細(xì)胞株中miR-218的表達(dá)水平，使用一系列標(biāo)準(zhǔn)體外腫瘤實驗進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)上調(diào)miR-218的表達(dá)水平能夠明顯抑制腎癌腫瘤細(xì)胞的生長，減弱其增殖和侵襲能力，增強細(xì)胞的凋亡水平； 4.生物信息學(xué)預(yù)測miR-218的靶向基因之一是RAB6C，通過熒光素檢測驗證RAB6C確實是miR-218的靶向調(diào)控因子，Western blot結(jié)果提示，轉(zhuǎn)染miR-218的腫瘤細(xì)胞中RAB6C的表達(dá)明顯降低，說明miR-218通過RAB6C進(jìn)行調(diào)控，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲，促進(jìn)其凋亡； 5.動物體內(nèi)實驗證實，上調(diào)miR-218的表達(dá)水平，RAB6C表達(dá)水平降低，可以抑制腎癌腫瘤的生長。 結(jié)論：通過上述實驗，我們首次獲知，miR-218對腎癌細(xì)胞的生長、增殖、侵襲和凋亡具有調(diào)控作用，其調(diào)控作用通過調(diào)控RAB6C來實現(xiàn)。上調(diào)miR-218的表達(dá)，在體內(nèi)體外，均可以抑制腎癌腫瘤的生長，為腎癌的腫瘤生物學(xué)治療提供了新的途徑。
[Abstract]:Background: renal cancer is a common urological tumor. Early renal cancer has no typical symptoms and manifestations. It lacks the marker of early diagnosis and prognosis, but the therapeutic effect of recurrent and advanced metastatic renal cancer is poor. The effect of adjuvant chemotherapy other than surgery is not obvious. Biomarkers can be used for early diagnosis and prognosis of renal tumor, and may be a new target for cancer treatment. It can improve the therapeutic effect of renal cancer, especially for advanced renal cancer, prolong the survival period and benefit the patients.
The purpose of this study is to provide a new idea for the diagnosis and treatment of renal cancer by the specific expression of miR-218 in renal cancer and the study of the regulatory role of miR-218 in renal cancer cells.
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本文編號：1865984