發(fā)布時(shí)間：2018-05-09 03:41

  本文選題：雌激素相關(guān)受體 + 腎透明細(xì)胞癌�。� 參考：《中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院》2016年碩士論文

【摘要】：目的：大量相關(guān)文獻(xiàn)研究證實(shí)細(xì)胞核受體家族在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用,同時(shí)其表達(dá)水平的變化與腫瘤預(yù)后存在密切相關(guān)。根據(jù)前期芯片結(jié)果提示,ERRy在不同分期的腎透明細(xì)胞癌中存在明顯的差異化表達(dá),而這一現(xiàn)象在腎透明細(xì)胞癌中的可能的作用還未見相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)旨在研究核受體家族中ERRy受體在腎透明細(xì)胞癌腫瘤組織和瘤旁組織中的mRNA水平和蛋白水平表達(dá)情況及其在腎透透明細(xì)胞中的增殖侵襲相關(guān)的生物學(xué)作用。方法：選取56對腎透明細(xì)胞癌手術(shù)冰凍標(biāo)本和相應(yīng)癌旁正常腎實(shí)質(zhì)組織,采用免疫組化、Western blot法和實(shí)時(shí)定量PCR檢測ERRy在腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞株和離體組織標(biāo)本中蛋白和mRNA水平的表達(dá)情況,同時(shí)在體外培養(yǎng)的腎小管上皮HKC細(xì)胞系、腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系786-O和769-P中檢測相應(yīng)表達(dá)。設(shè)計(jì)慢病毒過表達(dá)質(zhì)粒pLV-EGFP(2A)Puro-ESRRG和空載體對照組,構(gòu)建腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系786-O和769-P穩(wěn)定高表達(dá)ERRy的細(xì)胞株,通過MTS法、流式細(xì)胞儀和劃痕試驗(yàn)分別檢測細(xì)胞增值率、細(xì)胞周期和細(xì)胞橫向遷移的變化。結(jié)果：免疫組化和western blot的檢測結(jié)果表明與癌旁正常腎實(shí)質(zhì)組織相比,ERRy蛋白的表達(dá)水平在腎透明細(xì)胞癌組織中明顯降低,和腎小管上皮HKC細(xì)胞系相比,ERRy的表達(dá)水平在腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系786-O和769-P中均降低(p值均0.05);同時(shí)在臨床病理中ERRy的mRNA水平與腎透明細(xì)胞癌病理的Fuhrman核分級呈顯著負(fù)相關(guān)(p0.05),而且女性腎癌患者組織中的ERRymRNA表達(dá)要顯著高于男性患者(p0.05)。在786-O和769-P細(xì)胞系的功能實(shí)驗(yàn)中,穩(wěn)定高表達(dá)ERRy的細(xì)胞株與空載體轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞株相對照比較,MTS法顯示前者的增值率明顯降低,流式細(xì)胞儀檢測顯示高表達(dá)ERRy的細(xì)胞株S期細(xì)胞比例明顯降低并有G0/G1細(xì)胞比例明顯增加,劃痕試驗(yàn)顯示高表達(dá)ERRy后的細(xì)胞系其橫向遷移生長速率明顯減慢。結(jié)論：ERRy在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)顯著降低,其表達(dá)水平與病理Fuhrman核分級之間存在顯著相關(guān)性,且明顯受患者性別影響。腎透明細(xì)胞癌的腫瘤發(fā)生發(fā)展中ERRy可能發(fā)揮了抑制腫瘤生長的作用。
[Abstract]:Objective: the nuclear receptor family plays an important role in the occurrence and development of many kinds of tumors, and the expression level of nuclear receptor family is closely related to the prognosis of tumor. According to the results of early microarray, there is obvious differential expression of ERRy in renal clear cell carcinoma at different stages, but the possible role of this phenomenon in renal clear cell carcinoma has not been reported. The purpose of this study was to investigate the expression of ERRy receptors in the nuclear receptor family in tumor tissues and adjacent tissues of renal clear cell carcinoma (RCC) and its biological role in the proliferation and invasion of renal transparent cells. Methods: 56 pairs of frozen specimens of renal clear cell carcinoma and normal renal parenchyma adjacent to the carcinoma were selected. The expression of protein and mRNA in renal clear cell carcinoma cell line and in vitro tissue was detected by immunohistochemistry and real-time quantitative PCR, and the renal tubular epithelial HKC cell line was cultured in vitro. The corresponding expression was detected in renal clear cell carcinoma cell lines 786-O and 769-P. Lentivirus overexpression plasmid pLV-EGFP(2A)Puro-ESRRG and empty vector control group were designed to construct renal clear cell carcinoma cell lines 786-O and 769-P with stable and high expression of ERRy. The proliferation rate was detected by MTS, flow cytometry and scratch test, respectively. Changes in cell cycle and cell transversal migration. Results: the results of immunohistochemistry and western blot showed that the expression of ERRy protein in renal clear cell carcinoma was significantly lower than that in adjacent normal renal parenchyma. Compared with the renal tubular epithelial HKC cell line, the expression level of erry in renal clear cell carcinoma cell line 786-O and 769-P decreased by 0.05, and the mRNA level of ERRy was significantly negative in clinical pathology and the Fuhrman nuclear grade of renal clear cell carcinoma was significantly lower than that of renal tubular epithelial cell carcinoma cell line 786-O and 769-P. The expression of ERRymRNA in female patients with renal cell carcinoma was significantly higher than that in male patients. In the functional experiments of 786-O and 769-P cell lines, the cell lines with stable high expression of ERRy were compared with those of the empty vector transfection group. Flow cytometry showed that the proportion of S phase cells with high expression of ERRy was significantly decreased and the proportion of G0/G1 cells was increased. Scratch test showed that the transversal migration and growth rate of cell lines with high expression of ERRy decreased obviously. Conclusion the expression of 1% ERRy in renal clear cell carcinoma was significantly decreased, and the expression level was significantly correlated with the nuclear grade of pathological Fuhrman, and was significantly affected by the sex of the patients. ERRy may play a role in inhibiting tumor growth in the tumorigenesis and progression of renal clear cell carcinoma.
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.11

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本文編號：1864437