本文選題：G250 + DNA疫苗　； 參考：《山東大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：研究背景與目的 腎癌又稱腎細(xì)胞癌(renal cell carcinoma,RCC),是最常見的成人腎臟實(shí)質(zhì)惡性腫瘤,其發(fā)病率居泌尿系統(tǒng)腫瘤的第二位,占成人全身惡性腫瘤的3%,而且腎癌的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)。因腎癌早期癥狀不典型,起病隱襲,發(fā)現(xiàn)時(shí)多為晚期甚至已有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,死亡率高。目前,外科手術(shù)治療仍是腎癌的主要治療方法,腎癌對(duì)放、化療以及激素治療等均不敏感,故而預(yù)后較差。故而對(duì)腎癌的早期診斷以及有效的術(shù)后輔助治療尤其重要。近年來研究發(fā)現(xiàn),G250顯示出良好的腫瘤特異性。98%的腎癌原發(fā)灶高表達(dá)G250抗原,特別是腎透明細(xì)胞癌幾乎全部表達(dá)G250抗原,而該抗原在正常腎臟組織中不表達(dá)。它對(duì)腎臟腫瘤細(xì)胞的存活,生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移都發(fā)揮了重要的作用。被認(rèn)為是較為理想的腫瘤相關(guān)抗原(tumor associated antigen,TAA),在腎癌的早期診斷及預(yù)后判斷和術(shù)后的輔助生物治療等方面有較好的應(yīng)用前景。研究證實(shí)腎癌G250抗原中由氨基酸249-268(G250肽/249)形成的抗原肽,包含Th表位和CTL表位,可同時(shí)誘導(dǎo)CD4+及CD8+的T細(xì)胞免疫反應(yīng),可刺激機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)該肽的抗腎癌免疫反應(yīng),故G250肽／249可作為腎癌免疫治療的理想靶點(diǎn)。基于以上理論基礎(chǔ),本實(shí)驗(yàn)前期利用基因工程技術(shù)將編碼鼠G250肽/249的基因片段插入到HBcAg的主要免疫優(yōu)勢(shì)區(qū)(MIR),構(gòu)建出原核表達(dá)質(zhì)粒pET28a(+)/C-G250肽-C,并通過原核表達(dá)和純化獲得重組融合蛋白,本實(shí)驗(yàn)將前期重組構(gòu)建完成的原核表達(dá)質(zhì)粒pET28a(+)/C-G250肽-C重組至(?)PVAX1質(zhì)粒上,成功構(gòu)建了質(zhì)粒DNA疫苗PVAX1/C-G250肽-C。但DNA質(zhì)粒疫苗存在免疫原性弱的缺點(diǎn),為最大程度的加強(qiáng)免疫反應(yīng)水平,本課題應(yīng)用PEI做免疫佐劑增強(qiáng)DNA疫苗的免疫反應(yīng)水平。并應(yīng)用G250肽疫苗作為沖擊構(gòu)建異源性prime-boost免疫策略,探討PEI作為免疫佐劑對(duì)G250抗原肽基因PVAX1/C-G250肽-C免疫效果的增強(qiáng)及聯(lián)合應(yīng)用G250蛋白疫苗進(jìn)行PRIME—BOOST免疫程序免疫增強(qiáng)效果的研究。為腎癌免疫治療疫苗的研究方面做出補(bǔ)充和探索性創(chuàng)新。 目的 研究方法 1.重組質(zhì)粒PVAX1/C-G250肽-C的制備：用EcoR I.Xho I和EcoR I.Sal I分別雙酶切PVAXl及前期構(gòu)建的pET28a (+)/C-G250肽-C質(zhì)粒。因Xho1和Sal1共尾,故可利用DNA重組技術(shù)構(gòu)建重組質(zhì)粒PVAX1/C-G250肽-C。酶切分析鑒定正確。大量提取質(zhì)粒后,分光光度計(jì)測(cè)質(zhì)粒含量。 2.PEI佐劑提高效應(yīng)及prime-boost免疫策略免疫水平提升的研究：將24只雌性昆明小鼠隨機(jī)分為(A)裸DNA組,(B)DNA-PEI復(fù)合物組,(C)DNA-PEI+蛋白疫苗組(D)空白對(duì)照組。按0,10,20,30天程序經(jīng)股四頭肌注射免疫。(C)組在第20天及第30天進(jìn)行蛋白沖擊。初次免疫前和第40天鼠尾取血,ELISA法檢測(cè)抗體滴度。流式細(xì)胞術(shù)測(cè)淋巴細(xì)胞亞群,CD4+和CD8+。 研究結(jié)果 1.雙酶切及基因測(cè)序鑒定證實(shí)G250抗原肽cDNA正確插入PVAX1/C-G250肽-C重組質(zhì)粒中。 2.昆明小鼠經(jīng)4次免疫后,3個(gè)實(shí)驗(yàn)組都產(chǎn)生了特異性的體液和細(xì)胞免疫反應(yīng),但DNA-PEI復(fù)合物組的抗體滴度1：1.28×104及CD4+,CD8+分別占到26.12%和12.60%明顯高于裸DNA組的1：3.2×103和CD4+,CD8+占到19.32%和10.74%。而蛋白沖擊組的1：5.12×104和CD4+,CD8+占到41.96%和15.14%又明顯高于復(fù)合物組,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論 1.成功構(gòu)建重組質(zhì)粒DNA疫苗PVAX1/C-G250肽-C。 2.該DNA疫苗與PEI和G250蛋白疫苗聯(lián)合使用后產(chǎn)生極強(qiáng)的免疫原性,誘導(dǎo)產(chǎn)生了高滴度,高特異性抗體及細(xì)胞免疫反應(yīng)。證實(shí)G250DNA疫苗聯(lián)合PEI使用并進(jìn)行蛋白疫苗沖擊的免疫策略可產(chǎn)生強(qiáng)大的免疫保護(hù)作用。為腎癌的術(shù)后輔助治療提供新的思路和方法。
[Abstract]:Background and purpose of study

In recent years , it has been found that G250 peptide / 249 can be used as an ideal target for the immunotherapy of renal cancer .

Purpose

Research Methods

1 . Preparation of recombinant plasmid PVAX1 / C - G250 peptide - C : The recombinant plasmid PVAX1 / C - G250 peptide - C plasmid was digested with EcoR I . Xho I and EcoR I . Sal I . The recombinant plasmid PVAX1 / C - G250 peptide - C was constructed by DNA recombination technique .

2 . The effect of PEI ' s adjuvant and the improvement of the immune level of prime - boost immune strategy : Twenty - four female Kunming mice were randomly divided into ( A ) naked DNA group , ( B ) DNA - PEI complex group , ( C ) DNA - PEI + protein vaccine group ( D ) blank control group .

Results of the study

1 . Double enzyme digestion and gene sequencing confirmed that G250 antigen peptide cDNA was correctly inserted into the PVAX1 / C - G250 peptide - C recombinant plasmid .

2 . After 4 immunization in Kunming mice , the specific humoral and cellular immune responses were produced in three experimental groups , but the antibody titer of DNA - PEI complex group was 1 : 1.28 脳 104 and CD4 + , CD8 + accounted for 26.12 % and 12.60 % , respectively .

Conclusion

1 . The recombinant plasmid DNA vaccine PVAX1 / C - G250 peptide - C was successfully constructed .

2 . The DNA vaccine has strong immunogenicity after being used in combination with PEI and G250 protein vaccine to induce high titer , high specificity antibody and cellular immune response . It is confirmed that G250DNA vaccine is used in combination with PEI and the immune strategy of protein vaccine impact can produce powerful immune protective effect . It provides new idea and method for adjuvant treatment of renal cancer .

【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R737.11

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 肖毅;高昆;楊勇;閻瑾琦;張亮;王宇;徐元基;田仁禮;杜芝燕;于繼云;;電穿孔技術(shù)對(duì)DNA疫苗pVAX-tG250FcGB免疫效果的影響[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2013年11期

2 許長(zhǎng)寶;王曉甫;;腎細(xì)胞癌患者外周血中G250 mRNA表達(dá)水平檢測(cè)[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2008年02期

3 吳舒婷;黃超洋;常海艷;張風(fēng)華;方芳;李小曼;陳則;;鼠巨細(xì)胞病毒IE-1核酸疫苗和滅活疫苗聯(lián)合免疫抗病毒感染的研究[J];激光生物學(xué)報(bào);2014年03期

4 田仁禮;殷小濤;王偉;高江平;于繼云;;腫瘤基因疫苗的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2013年29期

5 趙祺;段曉明;蘇小芳;鄧彥君;楊陳;賀修勝;;HA納米載體轉(zhuǎn)hGM-CSF基因的HepG2疫苗聯(lián)合多柔比星抗肝癌作用[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2014年04期

6 趙俊峰;鄭少斌;姜耀東;趙善超;楊旭凱;;沉默G250基因?qū)δI癌786-0細(xì)胞體內(nèi)成瘤及生長(zhǎng)的影響[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2011年19期

7 趙俊峰;鄭少斌;趙善超;姜耀東;肖耀軍;楊旭凱;;G250基因沉默誘導(dǎo)腎癌786-0細(xì)胞凋亡[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué);2011年04期

8 趙俊峰;鄭少斌;趙善超;姜耀東;肖耀軍;;siRNA抑制腎癌786-0細(xì)胞G250基因的表達(dá)[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2011年04期

9 劉麗;汪巨峰;李波;;天花疫苗的研究現(xiàn)狀和進(jìn)展[J];中國(guó)藥事;2013年11期

10 郭大偉;朱玲英;顧寧;;磁性納米顆粒作為基因遞送載體的研究進(jìn)展[J];中國(guó)材料進(jìn)展;2013年10期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 沈弋楨;早期腎癌腎部分切除術(shù)安全切除邊距的選擇[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2008年

2 譚曉（？）;USP11抑制TNFα介導(dǎo)的NF-κB激活途徑及其在轉(zhuǎn)移性腎透明細(xì)胞癌中的作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

3 楊飛飛;基于細(xì)胞穿膜肽修飾的新型非病毒載體的構(gòu)建、篩選及遞送功能siRNA治療惡性腫瘤的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

4 張孝進(jìn);功能化脂肪族聚碳酸酯的合成及其性能研究[D];武漢大學(xué);2012年

5 陳富偈;苯硼酸修飾的高分子基因載體的設(shè)計(jì)、合成及性能研究[D];武漢大學(xué);2012年

6 趙東;天然高分子及多肽修飾的碳酸鈣共沉淀基因及藥物傳遞體系研究[D];武漢大學(xué);2012年

7 孫俊;聚乙烯亞胺衍生物的合成及其作為核酸載體的性能探討[D];華南理工大學(xué);2013年

8 李佩P;超聲聯(lián)合微泡促HGF修飾BMSCs靶向歸巢抗腎纖維化的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

9 肖海燕;慢病毒載體初免和牛痘病毒載體加強(qiáng)免疫對(duì)黑色素瘤的預(yù)防和治療作用的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

10 王清富;聚乙烯亞胺介導(dǎo)骨形態(tài)發(fā)生蛋白2基因轉(zhuǎn)染脂肪干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 崔旭;HIF-2α與VEGF聯(lián)合在腎細(xì)胞癌表達(dá)的臨床意義[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

2 李翠;聚甲基丙烯酸甘油酯胺基衍生物、硫脲衍生物的合成及其為基因載體的性能研究[D];天津理工大學(xué);2013年

3 葉婷;新型M細(xì)胞靶向性疫苗預(yù)防病毒性心肌炎的作用研究[D];蘇州大學(xué);2013年

4 肖勁鵬;新型兩親樹枝狀聚醚酯的合成與表征[D];湘潭大學(xué);2012年

5 簡(jiǎn)浩良;羧基甜菜堿修飾的聚乙烯亞胺作為非病毒型基因載體[D];華南理工大學(xué);2013年

6 馬金榮;傳染性法氏囊病病毒VP2與C3d串聯(lián)基因重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及其免疫功能分析[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

7 魏巍麗;攜siRNA真核表達(dá)載體靶向脂質(zhì)微泡的構(gòu)建與表征[D];福建醫(yī)科大學(xué);2013年

8 林建鴻;Ang2-siRNA質(zhì)粒殼聚糖磁性納米顆粒的制備及分析[D];福建醫(yī)科大學(xué);2013年

9 胡建邦;Fe_3O_4-SiO_2-識(shí)別配體復(fù)合材料的制備及對(duì)鈾（Ⅵ）的吸附研究[D];南華大學(xué);2013年

10 姚玲;梅毒螺旋體黏附素Tp0751抗原表位的預(yù)測(cè)與鑒定[D];南華大學(xué);2013年

，

本文編號(hào)：1851818