本文選題：Capn4腎透明細胞癌 + 侵襲��； 參考：《蘇州大學》2014年博士論文

【摘要】：腎細胞癌（renal cell carcinoma，RCC）是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，大約有70%的腎細胞癌是透明細胞腎細胞癌（clear cell renal cell carcinoma，ccRCC），轉移是腎細胞癌導致死亡的主要原因，而腎癌發(fā)生轉移的機制尚不清楚。μ-型鈣蛋白酶（μ-calpains）在哺乳動物各組織中廣泛表達，它是一種由催化亞基和調節(jié)亞基組成的異源二聚體，其中小的調節(jié)亞基為鈣蛋白酶小亞基-1（Calpain small subunit1，Capn4）。研究發(fā)現(xiàn)Capn4在促進細胞的遷移、增殖和分化中發(fā)揮重要作用，已經發(fā)現(xiàn)其在肝癌、膽管癌及乳腺癌的轉移過程中發(fā)揮重要作用。本研究應用人腎透明細胞癌組織標本及細胞模型，檢測Capn4在腎透明細胞癌組織中的表達水平，并分析Capn4表達與預后的相關性；研究Capn4對腎透明細胞癌細胞趨化運動及遷移、侵襲能力的影響，并初步探討可能的作用機制，以期找到腎透明細胞癌新的預后標志物和有效的治療靶點。 第一部分Capn4在腎透明細胞癌中的表達及臨床意義 目的：研究腎透明細胞癌組織及癌旁組織中Capn4的表達，分析其與臨床病理特征之間的關系，探討其與ccRCC患者臨床預后的關系。 方法：采用實時定量逆轉錄-聚合酶鏈反應(quantitative reverse transcriptionpolymerase chain reaction，qRT PCR)、Western blotting及免疫組化檢測75例ccRCC組織和癌旁正常腎組織的Capn4的基因及蛋白表達情況，并對其進行比較和相關分析。 結果: qRT-PCR、Western blotting結果顯示：ccRCC組織與正常腎組織中均有Capn4的基因和蛋白表達，在ccRCC組織中Capn4的表達明顯高于癌旁組織，差異具有統(tǒng)計學意義。免疫組化檢測結果顯示Capn4的表達與ccRCC的分期、分級、淋巴結轉移、腫瘤大小及局部侵潤有關，Capn4與ccRCC患者生存期之間Kaplan-Meier生存曲線分析提示，Capn4高表達組的ccRCC患者的生存率低于Capn4低表達組患者，差異有統(tǒng)計學意義。 結論：人ccRCC中Capn4高表達，，其表達水平與腎癌的分期及淋巴結轉移相關；Capn4高表達患者預后較差，生存期較短，提示Capn4高表達在腎透明細胞癌中可能具有重要意義。 第二部分Capn4在腎透明細胞癌侵襲轉移中的作用及機制探討 目的：通過檢測Capn4對腎透明細胞癌細胞增殖、運動、粘附及遷移侵襲能力的影響，初步探討Capn4在腎透明細胞癌侵襲轉移中的作用及機制，以期找到腎透明細胞癌新的預后標記物和治療靶點。 方法： 1.qRT PCR方法檢測786-0、ACHN、Caki-1、Caki-2四種不同轉移潛能的腎癌細胞系中Capn4的表達水平。 2.應用合成的小干擾RNA質粒轉染786-0腎癌細胞，建立Capn4穩(wěn)定降表達細胞系，用qRT PCR技術檢測轉染效率。 3.采用CCK-8檢測Capn4降表達對786-0腎癌細胞增殖能力的影響。 4.“傷口愈合”實驗檢測Capn4降表達對786-0腎癌細胞運動能力的影響。 5.用粘附實驗檢測Capn4降表達對786-0腎癌細胞間，細胞與細胞外基質之間粘附能力的影響。 6.Transwell體外侵襲實驗檢測Capn4降表達對786-0腎癌細胞侵襲能力的影響。 7.用Western blotting方法檢測Capn4降表達對ERK1/2、p-ERK1/2、MMP-2及MMP-9表達的影響，初步探討Capn4影響腎癌細胞轉移浸潤的機制。 結果：qRT PCR檢測發(fā)現(xiàn)Capn4在786-0、ACHN、Caki-1、Caki-2四種不同轉移潛能的腎癌細胞系中均有表達，且在786-0中表達最高。小干擾RNA技術轉染786-0腎癌細胞后，建立Capn4穩(wěn)定降表達細胞系，qRT PCR檢測Capn4表達明顯下降。Capn4降表達明顯抑制786-0腎癌細胞增殖，且Capn4降表達的786-0腎癌細胞與對照組相比，其運動、粘附及侵襲能力均減弱。Capn4降表達減弱了ERK1/2磷酸化水平，降低了基質金屬蛋白酶MMP-2及MMP-9的表達。 結論：Capn4降表達后786-0腎癌細胞增殖、運動、遷移、粘附及侵襲能力均受到顯著抑制，顯示Capn4參與對腎癌細胞的趨化運動和轉移能力的調控。Capn4可能是通過持續(xù)激活ERK1/2，而使MMP-2和MMP-9的表達顯著增加，增強人786-0腎癌細胞系細胞的侵襲能力。Capn4有望成為判斷腎透明細胞癌預后的重要標志物及新的治療靶點。
[Abstract]:Renal cell carcinoma ( RCC ) is one of the most common malignant tumors in urinary system . About 70 % of renal cell carcinoma is clear cell renal cell carcinoma ( ccRCC ) , and metastasis is the main cause of death due to renal cell carcinoma . It was found that Cap4n4 plays an important role in promoting cell migration , proliferation and differentiation . It has been found that it plays an important role in the metastasis of liver cancer , cholangiocarcinoma and breast cancer .
To investigate the effects of Capn4 on the chemoattractant movement , migration and invasion ability of renal clear cell carcinoma cells , and to explore possible mechanism of action , with a view to finding new prognostic markers and effective treatment targets for renal clear cell carcinoma .

Expression and clinical significance of first part Capn4 in renal clear cell carcinoma

Objective : To study the expression of Cap3n4 in renal clear cell carcinoma ( RCC ) and adjacent tissues , and to analyze its relationship with clinicopathological features and to investigate the relationship between them and the clinical prognosis of ccRCC .

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本文編號：1840825