本文選題：腎移植 + miR-338-5p��； 參考：《蘇州大學》2014年碩士論文

【摘要】：目的：本課題旨在研究miR-338-5p在腎移植患者的表達特點，及其對BAFF信號的調(diào)控作用，進而探討其在抗體介導的腎移植排斥中的作用及意義。 方法：⑴采用共轉(zhuǎn)染方法，利用雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)進行miR-338-5p的靶基因驗證。⑵收集腎移植患者的血清（健康志愿者為對照），應(yīng)用real-timePCR法檢測患者血清中miR-338-5p的表達差異；ELISA法檢測血清sBAFF的表達量；液相芯片技術(shù)檢測血清中抗HLA-Ⅰ類抗體、抗HLA-Ⅱ類抗體、抗MICA抗體滴度。從而分析miR-338-5p、sBAFF、抗體間的相關(guān)性。⑶在體外試驗中，采用以抗IgM抗體和/或重組人BAFF蛋白刺激的CD20+扁桃體B細胞培養(yǎng)體系，觀察miR-338-5p激動劑/拮抗劑、及TRAF3siRNA干擾作用下，B細胞分泌IgG、IL-10的水平，來分析miR-338-5p對B細胞生物學功能的影響。采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件包進行分析。兩個獨立樣本均數(shù)間的比較采用雙側(cè)t檢驗；配對樣本均數(shù)間的比較采用配對樣本t檢驗；相關(guān)性分析采用Spearman法及Pearson法；P0.05被認為具有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果：⑴雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)驗證結(jié)果表明TRAF3和NF-κB1均是miR-338-5p的靶分子，TRAF3被負向調(diào)控，，NF-κB1被正向調(diào)控；⑵與健康對照組比較，腎移植受者血清miR-338-5p水平顯著下降（P0.001）、血清sBAFF水平顯著增高（P0.01）。移植術(shù)后1年內(nèi)者血清miR-338-5p水平顯著低于移植術(shù)后1年以上者（P0.01）；移植術(shù)后3年內(nèi)者血清miR-338-5p水平顯著低于移植術(shù)后3年以上者（P0.01）；⑶對全部研究對象進行統(tǒng)計分析顯示，血清miR-338-5p與sBAFF、抗HLA-Ⅱ抗體均呈顯著負相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為-0.51（P0.001）、-0.322（P0.05）；術(shù)后3年內(nèi)者，血清miR-338-5p與抗HLA-Ⅱ抗體、抗MICA抗體均呈顯著負相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為-0.423（P0.05）、-0.411（P0.05）；術(shù)后3年以上者，血清miR-338-5p與抗MICA抗體、抗HLAMICA抗體均呈顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.486（P0.05）、0.578（P0.01）；⑷CD20+B淋巴細胞的體外培養(yǎng)試驗結(jié)果顯示，存在BAFF信號共同作用時，miR-338-5p經(jīng)靶向作用于TRAF3增強了BAFF信號，使得B細胞分泌IgG顯著增多（132±5.29ng/mlvs155±5.57ng/ml，P0.05）。 結(jié)論：miR-338-5p經(jīng)靶向作用于TRAF3，間接調(diào)控BAFF信號，參與腎移植術(shù)后免疫反應(yīng)過程，影響移植腎長期存活。
[Abstract]:Objective: to study the expression of miR-338-5p in renal transplantation patients and its role in regulating BAFF signal, and to explore its role and significance in antibody mediated renal allograft rejection. Methods 1: 1 was cotransfected, Double luciferase reporter gene detection system was used to detect the target gene of miR-338-5p. 2 the serum samples of renal transplantation patients were collected (healthy volunteers as control group). The expression of miR-338-5p in serum was detected by real-timePCR method and the expression of sBAFF in serum was detected by Elisa. The titers of anti-HLA- 鈪

本文編號：1789055