本文選題：腎細(xì)胞癌 + Rce1�。� 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:Rce1(Ras and a-factor-converting enzyme 1)是一種位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(Endoplasmic Reticulum,ER)膜上的駐留蛋白酶,負(fù)責(zé)絕大多數(shù)CAAX類(lèi)蛋白的加工。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(Endoplasmic Reticulum Stress,ERS)在腎細(xì)胞癌(Renal Cell Carcinoma,RCC)發(fā)展過(guò)程中起重要作用;然而在腎細(xì)胞癌中,Rce1的表達(dá),及其與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激作用機(jī)制間的關(guān)系尚未得到深入研究。本實(shí)驗(yàn)旨在探討Rce1在腎細(xì)胞癌中的表達(dá)及其通過(guò)ERS誘導(dǎo)腎癌細(xì)胞786-O凋亡的分子機(jī)制。方法:采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(q RT-PCR)、蛋白質(zhì)免疫印記雜交(western blot)及免疫組化技術(shù)(Immunohistochemical)檢測(cè)腎細(xì)胞癌組織及相應(yīng)癌旁組織中Rce1表達(dá)情況。采用q RT-PCR和western blot技術(shù)檢測(cè)人胚腎細(xì)胞株HEK293及腎癌細(xì)胞株786-O、ACHN、A498中Rce1表達(dá)差異情況。sh RNA慢病毒干擾載體感染786-O細(xì)胞,敲降Rce1表達(dá)水平,應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)及CCK-8檢測(cè)786-O細(xì)胞凋亡和增值改變情況。采用western blot技術(shù)檢測(cè)Rce1敲降前后,786-O細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白的變化情況。結(jié)果:Rce1的表達(dá)水平,相較于腎細(xì)胞癌旁組織,在腎細(xì)胞癌組織中明顯上調(diào),其陽(yáng)性表達(dá)水平與患者臨床病理特征密切相關(guān)。Rce1在人腎癌細(xì)胞株中表達(dá)上調(diào),尤其是786-O細(xì)胞。慢病毒敲降786-O細(xì)胞中Rce1表達(dá)后,細(xì)胞凋亡增加,抑制被增殖(P0.05)。此外,敲降Rce1后,促凋亡蛋白Bax的表達(dá)上調(diào),抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)下調(diào)。進(jìn)一步研究表明,Rce1的下調(diào)也影響內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激因子的表達(dá)。結(jié)論:Rce1在腎細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。Rce1低表達(dá)可以通過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激使腎癌細(xì)胞的凋亡增加并抑制腎癌細(xì)胞增殖。
[Abstract]:Objective: Rce1Ras and a-factor-converting enzyme 1 is a resident protease located on the endoplasmic reticulum Endoplasmic Reticulum enzyme, which is responsible for the processing of most CAAX proteins. Endoplasmic reticulum stress (ERS) plays an important role in the development of renal cell carcinoma (RCC), but the expression of rce1 in renal cell carcinoma and its relationship with the mechanism of endoplasmic reticulum stress have not been further studied. The purpose of this study was to investigate the expression of Rce1 in renal cell carcinoma and the molecular mechanism of 786-O apoptosis induced by ERS. Methods: the expression of Rce1 in renal cell carcinoma (RCC) and adjacent tissues was detected by real-time quantitative PCR(q RT-PCR, Western blot hybridization and immunohistochemical technique. Q RT-PCR and western blot techniques were used to detect the differential expression of Rce1 in human embryonic kidney cell line HEK293 and renal cell line 786-OHCNN A498. Sh RNA lentivirus interference vector was used to infect 786-O cells, and the Rce1 expression level was reduced. Apoptosis and proliferation of 786-O cells were detected by flow cytometry (FCM) and CCK-8. Western blot technique was used to detect the changes of apoptosis related protein Bcl-2 and endoplasmic reticulum stress-related protein before and after Rce1 knockdown. Results compared with the tissues adjacent to renal cell carcinoma, the expression level of Rce1 was significantly up-regulated, and the positive expression level was closely related to the clinicopathological features of the patients. Rce1 was up-regulated in human renal cell carcinoma cell lines, especially 786-O cells. After lentivirus knock down the expression of Rce1 in 786-O cells, the apoptosis increased and the proliferation was inhibited (P0.05). In addition, the expression of pro-apoptotic protein Bax was up-regulated and the expression of anti-apoptotic protein Bcl-2 was down-regulated after knockout of Rce1. Further studies showed that down-regulation of Rce1 also affected the expression of ER stress factors. Conclusion the low expression of Rce1 plays an important role in the genesis and development of renal cell carcinoma. The low expression of Rce1 can increase the apoptosis and inhibit the proliferation of renal cell carcinoma cells through endoplasmic reticulum stress.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R737.11

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本文編號(hào)：1782499