本文選題：糖尿病腎病 + 內(nèi)皮源性一氧化氮合酶　； 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：目的:糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病最常見和最嚴(yán)重的慢性并發(fā)癥之一,亦是導(dǎo)致終末期腎功能衰竭的重要原因。我國DN的患病率呈快速增長的趨勢,DN已成為糖尿病患者致死的主要原因之一。DN的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,近來研究發(fā)現(xiàn)VEGF-NO軸解耦聯(lián)是DN的致病機(jī)制之一。我們前期研究證實(shí)還原型β2糖蛋白I(reducedβ2-Glycoprotein I,r-β2GPI)可調(diào)節(jié)VEGF信號通路,抑制糖尿病視網(wǎng)膜病變新生血管形成,此外r-β2GPI可抑制TGF-β1-p38 MAPK信號途徑減輕糖尿病小鼠腎病的程度及抑制高糖誘導(dǎo)的腎小球系膜細(xì)胞IV型膠原的表達(dá)。本研究以大鼠腎小球系膜細(xì)胞系HBZY-1為研究對象,旨在探討:1.β2GPI及r-β2GPI對高糖條件下HBZY-1細(xì)胞VEGF-NO軸功能的影響;2.β2GPI及r-β2GPI影響高糖條件下HBZY-1細(xì)胞VEGF-NO軸功能的機(jī)制。方法:1.培養(yǎng)HBZY-1細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)共分為6組:①正常對照組(NC組):5.5m M葡萄糖;②高滲對照組(MC組):5.5m M葡萄糖+19.5m M甘露醇;③高糖組(HG組):25m M葡萄糖;④高糖+HSA對照組(HSA組):25m M葡萄糖+100μg/ml HSA;⑤高糖+β2GPI干預(yù)組(β2GPI組):25m M葡萄糖+100μg/mlβ2GPI;⑥高糖+r-β2GPI干預(yù)組(r-β2GPI組):25m M葡萄糖+100μg/ml r-β2GPI。2.NO測試盒測定β2GPI和r-β2GPI對高糖條件下HBZY-1細(xì)胞分泌NO的影響;采用ROS熒光探針DCFH-DA,通過熒光顯微鏡定性觀察及流式細(xì)胞儀定量檢測β2GPI和r-β2GPI對高糖條件下HBZY-1細(xì)胞生成ROS的影響。3.q RT-PCR法檢測β2GPI和r-β2GPI對高糖條件下HBZY-1細(xì)胞VEGF-NO軸相關(guān)蛋白VEGF、VEGFR-2、e NOS、GCH-1 m RNA表達(dá)的影響。4.Western Blot法觀察β2GPI和r-β2GPI對高糖條件下HBZY-1細(xì)胞VEGF-NO軸關(guān)鍵蛋白e NOS活性的影響及對VEGF受體后信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中Akt磷酸化水平的影響。結(jié)果:1.高糖可明顯抑制HBZY-1細(xì)胞NO的生成達(dá)33%(P0.05),β2GPI及r-β2GPI可拮抗高糖引起的NO表達(dá)減少,促進(jìn)NO的生成(P0.05),且r-β2GPI的作用強(qiáng)于β2GPI,分別是HG組的2.10倍、1.88倍(P0.05)。2.與正常對照組相比,高滲及高糖均促進(jìn)HBZY-1細(xì)胞ROS的生成(P0.05),高糖條件下HG組及HSA組兩組間ROS平均熒光強(qiáng)度無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),均明顯高于NC組和MC組(P0.05),β2GPI及r-β2GPI可抑制高糖條件下HBZY-1細(xì)胞ROS的生成,降低ROS水平(P0.05),且r-β2GPI的作用強(qiáng)于β2GPI(P0.05)。3.高糖可促進(jìn)HBZY-1細(xì)胞VEGF、VEGFR-2 m RNA的表達(dá)(P0.05),抑制GCH-1 m RNA的表達(dá)(P0.05),但對e NOS m RNA的表達(dá)無明顯影響(P0.05)。β2GPI及r-β2GPI對高糖條件下HBZY-1細(xì)胞VEGF的表達(dá)無明顯影響(P0.05),可降低高糖條件下VEGFR-2 m RNA的表達(dá)水平(P0.05),增加高糖條件下GCH-1、e NOS m RNA的表達(dá)。β2GPI組和r-β2GPI組兩組間VEGF、VEGFR-2、GCH-1、e NOS m RNA的表達(dá)水平均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。4.高糖抑制HBZY-1細(xì)胞e NOS Ser1177的磷酸化(P0.05),β2GPI及r-β2GPI可提高高糖條件下e NOS Ser1177的磷酸化水平(P0.05),兩者之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。5.高糖抑制HBZY-1細(xì)胞Akt的磷酸化(P0.05),β2GPI及r-β2GPI可促進(jìn)高糖條件下Akt的磷酸化(P0.05),兩者之間的作用無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:1.高糖環(huán)境下HBZY-1細(xì)胞VEGF、VEGFR-2 m RNA水平升高,GCH-1m RNA表達(dá)減少,e NOS m RNA表達(dá)無明顯改變,但e NOS磷酸化水平明顯降低,致NO分泌減少且ROS生成增加,即存在高糖誘導(dǎo)下的系膜細(xì)胞VEGF-NO軸解偶聯(lián)。2.β2GPI及r-β2GPI均可拮抗高糖環(huán)境下HBZY-1細(xì)胞NO分泌減少和ROS生成增多,促進(jìn)GCH-1 m RNA的表達(dá),降低VEGFR-2 m RNA的表達(dá)水平,促進(jìn)Akt磷酸化,提高e NOS的磷酸化水平�？赡軝C(jī)制為β2GPI及r-β2GPI通過調(diào)節(jié)VEGFR-2的表達(dá)及VEGF受體后信號通路中的關(guān)鍵蛋白Akt的磷酸化水平,激活e NOS,增加NO分泌,減輕氧化應(yīng)激水平,對高糖環(huán)境下的系膜細(xì)胞起保護(hù)作用。3.與β2GPI相比,r-β2GPI促進(jìn)HBZY-1細(xì)胞NO分泌、抑制ROS生成的作用更強(qiáng)�？赡苁怯捎趓-β2GPI包含有游離巰基,空間構(gòu)象及表面所帶電荷發(fā)生改變,使其功能發(fā)生改變且具有更強(qiáng)的抗氧化能力,但兩者均通過調(diào)節(jié)VEGF受體及受體后信號通路發(fā)揮作用。
[Abstract]:Objective: diabetic nephropathy (diabetic nephropathy DN) is one of the chronic complications of diabetes and the most common and most serious, also is an important cause of end-stage renal failure. The prevalence of DN in China shows the trend of rapid growth, DN has become one of the main reasons for the pathogenesis of death in diabetic patients.DN complex, recent research VEGF-NO axis uncoupling is one of the pathogenic mechanism of DN. Our previous studies demonstrated reduced beta 2 glycoprotein I (reduced 2-Glycoprotein I r- beta, beta 2GPI) can regulate VEGF signaling pathway, inhibition of angiogenesis in diabetic retinopathy, the expression of r- in beta 2GPI can inhibit the TGF- 1-p38 beta MAPK signaling pathway to reduce nephropathy in diabetic mice the degree of inhibition and high glucose induced glomerular mesangial cells of type IV collagen. In this study, the rat mesangial cell line HBZY-1 as the research object, aims to explore: 1. beta 2GPI and r- beta 2GP I瀵歸珮緋栨潯浠朵笅HBZY-1緇嗚優(yōu)VEGF-NO杞村姛鑳界殑褰卞搷;2.尾2GPI鍙?qiáng)r-尾2GPI褰卞搷楂樼硸鏉′歡涓婬BZY-1緇嗚優(yōu)VEGF-NO杞村姛鑳界殑鏈哄埗.鏂規(guī)硶:1.鍩瑰吇HBZY-1緇嗚優(yōu).瀹為獙鍏卞垎涓，

本文編號：1752991