本文選題：腫瘤干細(xì)胞 + Notch1信號(hào)通路��； 參考：《浙江理工大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：Ⅰ.喉鱗狀細(xì)胞癌,常發(fā)生于人體腫瘤中,發(fā)病率和病死率極高,嚴(yán)重危害著人類健康。隨著蛋白質(zhì)組學(xué)、分子醫(yī)學(xué)等技術(shù)的發(fā)展,與LSCC發(fā)生發(fā)展相關(guān)的許多靶點(diǎn)和信號(hào)通路(TP53、Notch信號(hào)通路等)被發(fā)現(xiàn)。在靶向LSCC特異的突變位點(diǎn)和信號(hào)通路的研究上,也取得了一定的治療效果�；熕幬镯樸K在減少喉癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、提高患者生存率、保護(hù)器官功能方面至關(guān)重要。靶向性或選擇性殺傷腫瘤干細(xì)胞,有望提高化放療敏感性,減少癌癥轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)。本課題通過體外懸浮培養(yǎng)類喉癌干細(xì)胞,并利用分子克隆構(gòu)建載體pKC-Notch1和pLK0.1-shRNA載體,包裝慢病毒后感染喉癌細(xì)胞,然后篩選出Notch1信號(hào)沉默和Notch1信號(hào)過表達(dá)的喉癌細(xì)胞株Hep2~(Notch1+),Hep2~(~(Notch1-))。用細(xì)胞計(jì)數(shù)法、Q-PCR、Weastern blot等實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)上述細(xì)胞相關(guān)因子的表達(dá)和細(xì)胞周期等生物學(xué)特性。MTT實(shí)驗(yàn)以及流式分析化療藥物順鉑對(duì)Hep2~(WT),Hep2~(Notch1+),Hep2~(~(Notch1-))的殺傷效果。運(yùn)用克隆形成實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)得到類喉癌干細(xì)胞增殖能力弱,多處于靜息狀態(tài)G0-G1期。Q-PCR和RT-PCR結(jié)果顯示在類喉癌干細(xì)胞中,CD44、ALDH、p-AKT、bcl2和p21表達(dá)顯著上調(diào),而Notch1、bax和AKT下調(diào);進(jìn)一步運(yùn)用western blot方法證實(shí):在Hep2~(sphere)細(xì)胞中p-AKT、bcl2和p21蛋白表達(dá)表達(dá)顯著上調(diào),Bax和AKT蛋白表達(dá)下調(diào)。Notch1信號(hào)沉默后,細(xì)胞增殖速度加快,AKT蛋白,促凋亡蛋白Bax下調(diào),同時(shí)p21蛋白表達(dá)也減少。在用化療藥物順鉑處理后,細(xì)胞存活率相較野生型喉癌細(xì)胞更高。相反,Notch1信號(hào)過表達(dá)的喉癌細(xì)胞,細(xì)胞增殖速度明顯下降,促凋亡蛋白Bax表達(dá)增加,AKT蛋白和抑癌蛋白P21表達(dá)量也上升。在相同濃度DDP處理后,細(xì)胞存活率明顯低于Hep2~(WT),Hep2~(Notch1-)細(xì)胞。結(jié)果說明懸浮培養(yǎng)的類喉癌干細(xì)胞具有喉癌干細(xì)胞特性。并且阿司匹林(Aspirin)和腺病毒ZD55-TRAIL對(duì)類喉癌干細(xì)胞具有較強(qiáng)殺傷效果而對(duì)分化的喉癌細(xì)胞影響較弱;DDP、DOX和5-Fu則相反。Noch1信號(hào)在喉癌細(xì)胞表現(xiàn)出抑制喉癌細(xì)胞增殖,促進(jìn)Hep2細(xì)胞凋亡的特性,并且促進(jìn)p21信號(hào)表達(dá),啟動(dòng)抑癌機(jī)制,使細(xì)胞更多地停留在G1期。同時(shí),Notch1信號(hào)的過表達(dá)促進(jìn)了化療藥物順鉑對(duì)喉癌細(xì)胞的殺傷作用。而阻斷Notch1信號(hào)通路,會(huì)促進(jìn)喉癌細(xì)胞增殖,減少凋亡,并且增強(qiáng)喉癌細(xì)胞對(duì)DDP的耐藥性。由此可見,Notch1信號(hào)在喉癌中起抑癌作用。Ⅱ.前列腺癌已成為危害男性健康的最大問題之一。與其他腫瘤相比,前列腺癌具有更明顯的腫瘤異質(zhì)性,從而很大程度影響了腫瘤的診斷、治療以及預(yù)后監(jiān)測(cè)。因此,對(duì)前列腺癌的研究治療變得尤為重要。溶瘤病毒能夠在不損傷正常細(xì)胞的情況下,特異性感染和裂解腫瘤細(xì)胞。隨著人們對(duì)基因和癌癥的深入研究,現(xiàn)代生物技術(shù)得道逐漸完善,治療癌癥的新型藥物和方法不斷更新,有些甚至已經(jīng)應(yīng)用于臨床研究。溶瘤病毒作為抗腫瘤藥物的關(guān)鍵在于提高其靶向性和溶瘤效應(yīng)。目前,開發(fā)了一種新型的GP73調(diào)控的溶瘤腺病毒GD55靶向前列腺癌、肝癌等,并表現(xiàn)出明顯的細(xì)胞毒性作用。本課題利用懸浮培養(yǎng)物來豐富類前列腺癌干細(xì)胞,通過MTT、Q-PCR和Western blot等實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)GD55在前列腺癌干細(xì)胞自我更新,分化,細(xì)胞周期,耐藥性和致瘤性中的性質(zhì)。結(jié)果表明相比普通溶瘤病毒ZD55,GD55可以顯著引起類前列腺癌干細(xì)胞的凋亡,并表現(xiàn)出更強(qiáng)的溶瘤作用。并且,GD55可以更強(qiáng)地抑制類前列腺癌干細(xì)胞的生長。此外,GD55可以在體外和體內(nèi)顯著誘導(dǎo)類前列腺癌干細(xì)胞的凋亡,并抑制異種移植腫瘤組織中細(xì)胞的傳播和血管生成。因此,GD55可能實(shí)際上代表一種有吸引力的治療劑,用于靶向類前列腺癌干細(xì)胞,以實(shí)現(xiàn)前列腺癌患者的更好的臨床結(jié)果。
[Abstract]:The results showed that the expression of CD44 , ALDH , p53 and p21 in human laryngeal cancer cells were significantly higher than those of wild type laryngeal cancer cells . The results showed that the proliferation of human prostate cancer stem cells and the inhibition of proliferation of human prostate cancer stem cells were promoted by MTT , Q - PCR and Western blot .

【學(xué)位授予單位】：浙江理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R739.65;R737.25

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 韓蘇軍;張思維;陳萬青;李長嶺;;中國前列腺癌發(fā)病現(xiàn)狀和流行趨勢(shì)分析[J];臨床腫瘤學(xué)雜志;2013年04期

2 徐成志;董頻;王s罨，

本文編號(hào)：1750547