本文選題：前列腺癌 + 乳腺癌　； 參考：《山東大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：研究背景與目的前列腺癌和乳腺癌分別是威脅男性和女性健康的最常見(jiàn)惡性腫瘤之一,具有很高的致死率。據(jù)美國(guó)癌癥協(xié)會(huì)統(tǒng)計(jì),僅2015年美國(guó)新增前列腺癌患者就達(dá)到220,800例,占當(dāng)年新增男性癌癥患者的26%。前列腺癌具有很高的致死率,其中四期前列腺癌患者的5年生存率僅為20%,10年生存率低于10%。盡管我國(guó)前列腺癌的發(fā)病率低于歐美國(guó)家,但是近年來(lái)也呈上升趨勢(shì),例如1998年到2008年間,我國(guó)前列腺癌發(fā)病率增加了212.5%,死亡率增加了124.9%。據(jù)據(jù)美國(guó)癌癥協(xié)會(huì)統(tǒng)計(jì),2015年美國(guó)新增乳腺癌患者約為231,840例,因乳腺癌死亡的患者約有40,290例。在我國(guó)乳腺癌的發(fā)病率也呈逐年上升的趨勢(shì),根據(jù)中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù),2010年我國(guó)新增乳腺癌患者約20萬(wàn)例。前列腺癌和乳腺癌的發(fā)生是一個(gè)多基因共同參與的積累過(guò)程,然而疾病發(fā)生的分子機(jī)制尚未完全清晰。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(Long non-coding RNA, lncRNA)是一類本身不編碼蛋白、轉(zhuǎn)錄本長(zhǎng)度超過(guò)200堿基的長(zhǎng)鏈非編碼RNA分子,在哺乳動(dòng)物中l(wèi)ncRNA約占RNA總量的4%到9%。lncRNA在一系列細(xì)胞活動(dòng)中發(fā)揮著重要作用,包括基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控、介導(dǎo)染色質(zhì)重建以及組蛋白修飾等。越來(lái)越多的研究表明：lncRNA的異常表達(dá)與包括前列腺癌和乳腺癌等疾病的發(fā)生相關(guān)。在前期研究中,研究者通過(guò)最新RNA測(cè)序技術(shù)和Real-Time PCR發(fā)現(xiàn)了一個(gè)在前列腺癌中出現(xiàn)頻率較高的長(zhǎng)鏈非編碼RNA, PlncRNA-1。PlncRNA-1在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著重要的作用,其除了能夠與雄激素受體(Androgen Receptor, AR)互相調(diào)節(jié)外,下調(diào)PlncRNA-1還會(huì)誘發(fā)腫瘤細(xì)胞的凋亡。作為在前列腺癌中首次發(fā)現(xiàn)的長(zhǎng)鏈非編碼RNA, PlncRNA-1在前列腺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用機(jī)制尚未完全闡明。前期研究發(fā)現(xiàn)：PlncRNA-1誘發(fā)的細(xì)胞凋亡過(guò)程中出現(xiàn)了Her-2的變化。由此推測(cè),PlncRNA-1誘發(fā)細(xì)胞凋亡的機(jī)制可能是通過(guò)Her-2信號(hào)途徑發(fā)揮作用的。在此背景下,本論文首先研究PlncRNA-1在前列腺癌發(fā)生中,是否通過(guò)Her-2途徑誘發(fā)前列腺癌細(xì)胞凋亡,繼而初探PlncRNA-1在乳腺癌發(fā)生中的作用機(jī)制,其最終研究成果有助于為前列腺癌和乳腺癌的防治提供新的理論依據(jù)和干預(yù)途徑。研究方法在前列腺癌的研究中,本論文首先通過(guò)Real-Time PCR檢測(cè)23例前列腺癌組織和癌旁正常組織標(biāo)本中PlncRNA-1和Her-2的表達(dá)情況。然后,利用Real-Time PCR檢測(cè)在LNCaP細(xì)胞中下調(diào)PlncRNA-1基因?qū)er-2基因表達(dá)的影響,以及在RWPE-1細(xì)胞中上調(diào)PlncRNA-1基因?qū)er-2基因表達(dá)的影響。本論文基于流式細(xì)胞檢測(cè)的方法檢驗(yàn)PlncRNA-1對(duì)細(xì)胞周期的影響,利用動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)分析PlncRNA-1對(duì)前列腺癌細(xì)胞移植瘤生長(zhǎng)的影響。最后,本論文基于Western blot探索PlncRNA-1對(duì)細(xì)胞周期蛋白CyclinD1表達(dá)的影響。在乳腺癌的研究中,本論文使用Real-Time PCR檢測(cè)81例乳腺癌組織和癌旁正常組織標(biāo)本中PlncRNA-1的表達(dá)情況,并且測(cè)量了不同乳腺癌細(xì)胞系中PlncRNA-1的表達(dá)情況。本論文用CCK8的方法檢測(cè)]PlncRNA-1對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖能力的影響；利用Transwell的方法研究PlncRNA-1對(duì)乳腺癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響；利用動(dòng)物內(nèi)實(shí)驗(yàn),研究PlncRNA-1對(duì)乳腺癌移植生長(zhǎng)及肺轉(zhuǎn)移的影響；利用Western bolt檢測(cè)研究PlncRNA-1與乳腺癌細(xì)胞EMT相關(guān)蛋白的關(guān)系以及PlncRNA-1對(duì)PTEN/PI3K/AKT信號(hào)通路的影響。結(jié)果1. PlncRNA-1在前列腺癌中作用機(jī)制1.1在前列腺癌組織中PlncRNA-1和Her-2均為高表達(dá)本論文通過(guò)Real-Time PCR檢測(cè)了23例前列腺癌組織和癌旁組織標(biāo)本中PlncRNA-1和Her-2的表達(dá)。檢測(cè)結(jié)果表明：PlncRNA-1和Her-2在前列腺癌組織中均為高表達(dá)。1.2 PlncRNA-1表達(dá)對(duì)Her-2表達(dá)的影響在LNCaP細(xì)胞中下調(diào)PlncRNA-1的表達(dá)可以促使Her-2表達(dá)的下調(diào)；在RWPE-1細(xì)胞中上調(diào)PlncRNA-1表達(dá)可以促使Her-2表達(dá)的上調(diào)。PlncRNA-1和Her-2表達(dá)之間存在高度的相關(guān)性。1.3 PlncRNA-1對(duì)細(xì)胞周期的影響在LNCaP細(xì)胞中下調(diào)PlncRNA-1能夠促進(jìn)CyclinD1表達(dá)的下降和G2/M期細(xì)胞比例明顯增多；在RWPE-1細(xì)胞中上調(diào)PlncRNA-1能夠造成CyclinD1表達(dá)的上升和G2/M期細(xì)胞比例明顯減少。1.4 PlncRNA-1表達(dá)對(duì)前列腺癌細(xì)胞移植瘤生長(zhǎng)的影響在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,PlncRNA-1下調(diào)后,前列腺癌細(xì)胞所形成移植瘤最終瘤體的重量也明顯輕于對(duì)照組。同時(shí)移植瘤免疫組化檢測(cè)和Western Blot檢測(cè)的結(jié)果也證實(shí)PlncRNA-1下調(diào)后,Her-2和Cyclin-D1的表達(dá)要明顯低于對(duì)照組。1.5 PlncRNA-1影響細(xì)胞周期的作用機(jī)制Her-2拮抗劑AC480可以阻斷PlncRNA-1對(duì)前列腺細(xì)胞周期分布的影響。PlncRNA-1是通過(guò)調(diào)控Her-2的表達(dá)以影響前列腺細(xì)胞的周期分布。2. PlncRNA-1在乳腺癌中的表達(dá)及作用2.1 PlncRNA-1在乳腺癌組織及乳腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)本論文首先采用定量Real-Time PCR的方法檢測(cè)了81例乳腺癌腫瘤組織和癌旁組織標(biāo)本中PlncRNA-1的表達(dá)情況。檢測(cè)結(jié)果表明：PlncRNA-1在乳腺癌組織中的表達(dá)要高于其在癌旁組織中的表達(dá)。在侵襲性較強(qiáng)的T47D, SK-BR3, AU565, MDA-MB-231和MDA-MB-435s細(xì)胞中PlncRNA-1的表達(dá)顯著高于在侵襲性弱的MCF10A, BT20,Hs578T, MDA-MB-468細(xì)胞中PlncRNA-1的表達(dá)。2.2 PlncRNA-1在乳腺癌組織及乳癌細(xì)胞增殖中的作用本論文首先利用shRNA下調(diào)MDA-MB-2311SK-BR3細(xì)胞中PlncRNA-1的表達(dá),在PlncRNA-1基因下調(diào)后,MDA-MB-231和SK-BR3細(xì)胞的增殖速度明顯減慢；其次上調(diào)Hs578T和MDA-MB-468細(xì)胞中PlncRNA-1的表達(dá),在PlncRNA-1基因上調(diào)后,Hs578T和MDA-MB-468細(xì)胞的增殖速度明顯加快。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：PlncRNA-1在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)能夠促進(jìn)細(xì)胞的增殖。2.3 PlncRNA-1的表達(dá)對(duì)乳腺癌細(xì)胞上皮間充質(zhì)化相關(guān)蛋白的影響在MDA-MB-231和SK-BR3細(xì)胞系中,PlncRNA-1下調(diào)后, E-cadherin和α-catenin的表達(dá)明顯增加,而N-cadherin和Vimentin的表達(dá)明顯下降。而在Hs578T和MDA-MB-468細(xì)胞系中,PlncRNA-1上調(diào)后,E-cadherin和α-catenin的表達(dá)明顯下降,而N-cadherin和Vimentin的表達(dá)上升。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明：PlncRNA-1的表達(dá)與乳腺癌細(xì)胞EMT密切相關(guān)。2.4 PlncRNA-1的表達(dá)對(duì)乳腺癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響本研究采用Transwell的方法對(duì)不同細(xì)胞系中PlncRNA-1基因修飾后細(xì)胞遷移和侵襲能力的變化進(jìn)行檢測(cè)。在MDA-MB-231和SK-BR3細(xì)胞系中,PlncRNA-1下調(diào)后,遷移和侵襲細(xì)胞的數(shù)量明顯減少。而在Hs578T和MDA-MB-468細(xì)胞系中,PlncRNA-1上調(diào)后,遷移和侵襲細(xì)胞的數(shù)量明顯增加。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：PlncRNA-1的表達(dá)可以增強(qiáng)乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。2.5 PlncRNA-1的表達(dá)對(duì)乳腺癌移植瘤生長(zhǎng)的影響本部分研究PlncRNA-1上調(diào)或下調(diào)對(duì)乳腺癌移植瘤生長(zhǎng)的影響。在研究中,將各組乳腺癌細(xì)胞株種植于裸鼠皮下,6周后處死裸鼠,取出移植瘤,稱重并記錄,繪制生長(zhǎng)曲線。在MDA-MB-231細(xì)胞系中,PlncRNA-1下調(diào)后,最終成瘤的大小減小,移植瘤的生長(zhǎng)速度也明顯下降。與之相反,在Hs578T細(xì)胞系中,PlncRNA-1上調(diào)后,最終成瘤的大小明顯增加,移植瘤的生長(zhǎng)速度也明顯上升。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明：PlncRNA-1的表達(dá)可以促進(jìn)乳腺癌腫瘤的生長(zhǎng)。2.6 PlncRNA-1的表達(dá)對(duì)乳腺癌肺轉(zhuǎn)移的影響本研究將各組乳腺癌細(xì)胞株種植于裸鼠皮下,6周后處死裸鼠,取出裸鼠的肺臟,切片觀察轉(zhuǎn)移灶的情況。在MDA-MB-231細(xì)胞系中,PlncRNA-1下調(diào)后,肺轉(zhuǎn)移灶明顯減少。而在Hs578T細(xì)胞系中,PlncRNA-1上調(diào)后,肺轉(zhuǎn)移灶顯著增多。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：PlncRNA-1的表達(dá)可以促進(jìn)乳腺癌肺發(fā)生轉(zhuǎn)移。2.7 PlncRNA-1與PTEN/Pl3K/AKT;通路的關(guān)系本研究利用基因芯片檢測(cè)PlncRNA-1高表達(dá)后,Hs578T細(xì)胞系中其他基因的變化情況。實(shí)驗(yàn)分析結(jié)果顯示：PlncRNA-1高表達(dá)后,PTEN/PI3K/AKT信號(hào)通路發(fā)生了明顯的變化。本研究對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞系中PlncRNA-1下調(diào)后以及Hs578T細(xì)胞系中PlncRNA-1上調(diào)后,PTEN/PI3K/AKT通路涉及的一系列蛋白進(jìn)行分析。分析結(jié)果表明：在MDA-MB-231細(xì)胞系中下調(diào)PlncRNA-1后,PTEN表達(dá)增強(qiáng),PI3K及AKT的表達(dá)水平無(wú)明顯變化,p-PI3K及p-AKT表達(dá)均下調(diào),PI3K/AKT信號(hào)通路活性下降。在Hs578T細(xì)胞系中,上調(diào)PlncRNA-1后,PTEN的表達(dá)下降,PI3K及AKT的表達(dá)水平無(wú)明顯變化,p-PI3K及p-AKT表達(dá)均上調(diào),PI3K/AKT信號(hào)通路活性上升。為了進(jìn)一步研究PlncRNA-1是否是通過(guò)作用于PTEN來(lái)影響乳腺癌細(xì)胞的增殖和遷移,本研究下調(diào)了MDA-MB-231-ShPlncRNA-1細(xì)胞中PTEN的表達(dá)。PTEN下調(diào)后,p-PI3K及p-AKT的表達(dá)、細(xì)胞增殖能力、細(xì)胞侵襲能力和遷移能力均恢復(fù)到PlncRNA-1下調(diào)前的水平。由此可見(jiàn),PlncRNA-1通過(guò)對(duì)PTEN的負(fù)調(diào)控來(lái)增加乳腺癌細(xì)胞的增殖,遷移及侵襲能力。結(jié)論1. PlncRNA-1是前列腺癌中一致癌基因,本論文通過(guò)開展體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)及動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：PlncRNA-1能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞周期及細(xì)胞周期蛋白Cyclin-D1的變化；PlncRNA-1通過(guò)Her-2途徑調(diào)控前列腺癌細(xì)胞的增殖與凋亡。2. PlncRNA-1在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中同樣發(fā)揮著致癌基因的作用,本論文通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)：PlncRNA-1可以促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲以及乳腺癌移植瘤的生長(zhǎng)和肺轉(zhuǎn)移。PlncRNA-1在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的上述作用與PlncRNA-1促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的EMT以及激活PTEN/PI3K/AKT通路有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.25;R737.9

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1749784