本文選題：慶大霉素 + 自噬��； 參考：《中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院》2014年博士論文

【摘要】：目的：急性腎損傷（acute kidney injury, AKI）是一種常見，具有高致死率的特點的臨床綜合征，目前尚缺乏有效的預(yù)防和治療措施。同時，AKI也是導(dǎo)致慢性腎臟病和終末期腎病最終進(jìn)展的重要因素，給社會帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。慶大霉素等氨基糖苷類抗生素是治療革蘭陰性菌感染最常用的抗生素。腎毒性和耳毒性等嚴(yán)重并發(fā)癥極大限制了氨基糖苷類抗生素的臨床應(yīng)用。目前，研究發(fā)現(xiàn)氧化損傷在慶大霉素腎毒性的發(fā)生中具有重要作用。自噬（autophagy）是細(xì)胞中清除損傷生物大分子和線粒體等細(xì)胞器，維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的重要保護(hù)機(jī)制。同時，自噬具有減輕細(xì)胞氧化損傷的作用。目前，自噬在慶大霉素誘導(dǎo)腎毒性中的作用機(jī)制以及具有抗氧化作用的N-乙酰半胱氨酸（NAC)和自噬增強(qiáng)劑雷帕霉素對慶大霉素腎損傷中自噬的影響還未明確。 本研究擬構(gòu)建慶大霉素腎損傷小型豬模型，觀察在不同慶大霉素給藥時間腎臟自噬水平，氧化損傷，炎癥和凋亡的變化。此外，觀察N-乙酰半胱氨酸和雷帕霉素對慶大霉素腎病理損傷，腎臟氧化損傷，凋亡和自噬的影響。這對于進(jìn)一步明確慶大霉素腎損傷的發(fā)生和發(fā)展機(jī)制以及探索改善慶大霉素腎毒性的新型治療方案具有重要意義。 方法：第一，我們采用5,6.85,10,15,20,40,60,80和100mg/kg慶大霉素連續(xù)肌注10天，觀察小型豬血生化和腎臟病理損傷。第二，連續(xù)10天肌注80mg/kg慶大霉素，觀察0天，1天，3天，5天，7天和10天組腎臟病理，血生化，凋亡，氧化損傷，炎癥和自噬的變化。第三，我們觀察給予N-乙酰半胱氨酸或雷帕霉素干預(yù)后，慶大霉素腎損傷中腎臟病理損傷，血生化，氧化損傷以及自噬的變化。 結(jié)果：首先，在劑量依賴性研究中，與正常對照組相比，80mg/kg組和100mg/kg組小型豬血肌酐和尿素氮水平顯著升高，腎臟病理病理損傷顯著加重。 第二，在時間依賴性研究中，與0天組相比，10天組血肌酐和尿素氮水平顯著升高，10天組腎臟損傷顯著加重，此外，與0天組小型豬相比，炎癥因子表達(dá)顯著升高，凋亡加重，線粒體自噬標(biāo)志物Bnip3以及其上游轉(zhuǎn)錄因子HIF-1α顯著降低，自噬流標(biāo)志物p62/SQSTM1和多聚泛素聚集體表達(dá)顯著升高，凋亡，蛋白質(zhì)，脂質(zhì)和DNA氧化損傷加重。 第三，，我們觀察了慶大霉素注射10天的同時，給予N-乙酰半胱氨酸和雷帕霉素干預(yù)。與慶大霉素模型組相比，N-乙酰半胱氨酸組和雷帕霉素組血肌酐和尿素氮水平，腎小管損傷評分均無顯著性改變。此外，腎臟自噬流標(biāo)志物p62/SQSTM1和多聚泛素聚集體表達(dá)顯著降低，Bnip3以及其上游轉(zhuǎn)錄因子HIF-1α顯著升高，氧化損傷標(biāo)志物8-OHdG，4HNE和蛋白質(zhì)羰基表達(dá)下降，凋亡細(xì)胞減少。 結(jié)論：隨著慶大霉素給藥時間的延長，小型豬腎臟的自噬功能下降，近端腎小管上皮細(xì)胞中線粒體腫脹和嵴斷裂加劇，凋亡細(xì)胞數(shù)目增多和氧化損傷顯著加重,表明自噬功能受損可能在慶大霉素腎毒性的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用。N-乙酰半胱氨酸和雷帕霉素可減輕慶大霉素腎損傷的氧化損傷，凋亡水平，但尚未顯著改善慶大霉素腎毒性的血生化和腎臟病理損傷。
[Abstract]:Objective: acute kidney injury (acute kidney, injury, AKI) is a common clinical features with high death rate of the syndrome, there is still a lack of effective prevention and treatment measures. At the same time, AKI is also an important factor leading to chronic kidney disease and end-stage renal disease eventually progress, brought huge economic burden to the society aminoglycoside antibiotics such as gentamicin. Treatment of leather is the most commonly used antibiotics of Gram-negative bacteria infection. Serious complications such as nephrotoxicity and ototoxicity has greatly limited the clinical application of aminoglycoside antibiotics. At present, the study found that oxidative damage plays an important role in the occurrence of gentamicin nephrotoxicity. Autophagy (autophagy) is to remove the biological damage molecular and cell organelles such as cells, an important protective mechanism for maintaining cellular homeostasis. At the same time, autophagy has decreased cell oxidative damage. At present, autophagy in. The mechanism of action of mycin induced nephrotoxicity and the effect of N- acetylcysteine (NAC) and rapamycin, a antioxidant enhancer, on the autophagy in gentamicin induced renal injury are not yet clear.
This study intends to construct gentamicin renal injury models of pigs, were observed at different time of gentamicin administration renal autophagy, oxidative damage, inflammatory changes and apoptosis. In addition, the observation of N- acetylcysteine and rapamycin on renal pathological injury of kidney of gentamicin, oxidative damage, apoptosis and autophagy. It has important significance for new treatment to further clarify the occurrence and development of renal injury and explore the mechanism of gentamicin gentamycin improve renal toxicity.
Methods: first, we use 5,6.85,10,15,20,40,60,80 and 100mg/kg for 10 days to observe the intramuscular injection of gentamicin, small blood biochemical and renal pathological damage. Second, 10 consecutive days of intramuscular injection of 80mg/kg gentamicin, observed for 0 days, 1 days, 3 days, 5 days, 7 days and 10 days were kidney pathology, blood biochemistry, apoptosis, oxidative damage, changes inflammation and autophagy. Third, we observe the N- acetylcysteine or rapamycin intervention, renal damage, blood biochemical gentamicin renal injury, oxidative damage and autophagy changes.
Results: first, in a dose-dependent study, compared with the normal control group, the serum creatinine and urea nitrogen levels of 80mg/kg group and 100mg/kg group increased significantly, and the pathological and pathological lesions of kidney increased significantly.
In second, time dependent study, compared with the 0 day group, 10 day group, serum creatinine and blood urea nitrogen levels increased significantly, 10 days group renal injury significantly increased, in addition, compared with the 0 day mini pigs, the expression of inflammatory factors increased significantly, apoptosis increased, mitochondrial autophagy marker Bnip3 and its upstream transcription factor HIF-1 alpha was significantly reduced, flow autophagy markers p62/SQSTM1 and polyubiquitin aggregates significantly increased expression, apoptosis, protein, lipid and increased oxidative DNA damage.
Third, we observed and gentamicin injection for 10 days, give N- acetylcysteine and rapamycin. Compared with gentamicin group, N- acetylcysteine group and rapamycin group, serum creatinine and blood urea nitrogen levels, there were no significant changes in the renal tubular injury score. In addition, renal flow autophagy markers p62/SQSTM1 and polyubiquitin aggregates expression significantly, Bnip3 and its upstream transcription factor HIF-1 alpha significantly increased oxidative damage markers 8-OHdG, 4HNE and protein carbonyl decreased expression of apoptotic cells decreased.
Conclusion: with the prolonging of gentamicin administration time, the function of autophagy miniature pig kidney decreased proximal increased mitochondrial swelling and cristae in renal tubular epithelial cells, and the number of apoptotic cells increased significantly aggravated oxidative damage, demonstrated the role of.N- acetylcysteine and rapamycin, the occurrence and development of the function of autophagy may be impaired in Gentamycin nephrotoxicity. Can alleviate the oxidative damage, gentamicin renal injury level of apoptosis, but not significantly improve gentamycin nephrotoxicity of blood biochemical and renal pathological damage.

【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R692.5;R-332

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本文編號：1735932