尿激酶在腎結(jié)石形成過程中作用機制的研究
發(fā)布時間:2018-04-09 06:03
本文選題:(?)結(jié)石 切入點:尿激酶 出處:《蘭州大學》2014年碩士論文
【摘要】:目的:觀察在尿激酶作用下體外草酸鈣晶體的形成和聚集情況,為尿激酶對草酸鈣結(jié)石的抑制作用提供直接證據(jù);檢測機體血清尿激酶含量,探討尿激酶在機體內(nèi)環(huán)境中對腎結(jié)石的抑制作用;通過對尿激酶在草酸對MDCK細胞損傷中作用的研究,探討尿激酶對尿路結(jié)石抑制作用的機制。證明尿激酶對腎結(jié)石形成的抑制作用,為腎結(jié)石的防治提供新的治療方向。 方法:首先,利用草酸鈣晶體在體外不同條件下生長和聚集情況,證明尿激酶對腎結(jié)石的抑制作用,分別配制蒸餾水(空白組)、含有不同濃度枸櫞酸(對照組)及尿激酶(實驗組)的成石溶液,25℃過夜,用倒置顯微鏡觀察各組成石溶液中結(jié)晶的大小形態(tài)和聚集情況;其次,隨機選取腎結(jié)石患者27例(結(jié)石組)和體檢健康者24例(對照組),應用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)法檢測兩組血清尿激酶水平,自動生化分析儀檢測血清鈣離子水平和肌酐水平,分析尿激酶與鈣離子和肌酐之間的相關性;同時,培養(yǎng)正常MDCK細胞,在原代培養(yǎng)第5天時,隨機分為3組(空白組、草酸組、尿激酶組),分別加入正常培養(yǎng)液、含有草酸(5mM)的培養(yǎng)液及含有草酸(5mM)和尿激酶(10萬U)的培養(yǎng)液,于2h后分別測定各組細胞培養(yǎng)液中丙二醛、乳酸脫氫酶的水平;于0.5h,1h,1.5h,2h時采用CCK-8試劑盒檢測細胞活力,倒置顯微鏡下觀察細胞表面晶體粘附情況。 結(jié)果:體外成石溶液中,空白組晶體明顯比對照組和實驗組大,并且更易于相互聚集,對照組和實驗組草酸鈣晶體的成長和聚集很大程度上被抑制;血清試驗中,結(jié)石組血清尿激酶水平低于對照組(ug/L:0.49±0.15Vs1.44±0.55)(P0.05),鈣離子水平(mmol/L:2.30±0.18vs2.18±0.13).肌酐濃度(umol/L:(54.38,126.26)vs(46.53,83.24))高于對照組(P0.05),結(jié)石組尿激酶水平與鈣、肌酐均呈負相關(r分別是-0.741、-0.459,P0.05);細胞實驗中,①草酸組和尿激酶組細胞培養(yǎng)基中丙二醛與乳酸脫氫酶水平均明顯高于對照組(P0.05);與尿激酶組相比,草酸組細胞細胞培養(yǎng)基中丙二醛及乳酸脫氫酶含量更高(P0.05)。②各組細胞活力均有所下降,尿激酶組相對于草酸組下降幅度顯著降低。③倒置顯微鏡下尿激酶組草酸鈣晶體于細胞表面粘附程度明顯輕于草酸組。 結(jié)論:尿激酶能夠減輕腎小管上皮細胞的損傷,抑制草酸鈣晶體的生長和聚集,從而抑制結(jié)石的形成。
[Abstract]:Objective: to observe the formation and aggregation of calcium oxalate crystals in vitro under the action of urokinase, to provide direct evidence for the inhibition of urokinase on calcium oxalate stone, and to detect the content of urokinase in serum.To investigate the inhibitory effect of urokinase on renal calculi in the body and the mechanism of urokinase inhibiting urinary calculi by studying the role of urokinase in oxalic acid on MDCK cells.It is proved that urokinase inhibits the formation of renal calculi and provides a new therapeutic direction for the prevention and treatment of renal calculi.Methods: firstly, the growth and aggregation of calcium oxalate crystals under different conditions in vitro were used to prove the inhibitory effect of urokinase on renal calculi.Distilled water (blank group), stone-forming solution containing different concentrations of citric acid (control group) and urokinase (experimental group) was prepared for the night at 25 鈩,
本文編號:1725152
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