本文選題：大豆異黃酮　切入點：染料木黃酮　出處：《成都醫(yī)學(xué)院》2017年碩士論文

【摘要】：研究表明,大豆異黃酮(soy isoflavones)具有抗前列腺癌的作用,但其對去勢抵抗前列腺癌(castrate-resistant prostate cancer,CRPC)的作用及機制尚未明確。前列腺癌經(jīng)去勢治療后,前列腺癌細胞仍可通過從頭合成途徑(de novo)合成雄激素,從而激活雄激素受體(androgen receptor,AR)信號通路,繼而調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄,誘導(dǎo)前列腺特異性抗原(prostate-specific antigen,PSA)分泌及促進增殖,產(chǎn)生去勢抵抗。因此,阻斷癌細胞內(nèi)部雄激素從頭合成,抑制AR激活是CRPC防治的靶點。目的探討染料木黃酮(genistein)對去勢抵抗前列腺增殖的影響,以及對雄激素信號途徑的抑制作用及分子機制,為植物化學(xué)物防治CRPC提供實驗數(shù)據(jù)。方法以22RV1、VCa P細胞為CRPC細胞模型,人正常前列腺上皮細胞RWPE-1為對照。(1)CCK-8法檢測細胞活力,流式細胞術(shù)檢測細胞周期分布,細胞免疫化學(xué)法檢測Ki-67;(2)酶聯(lián)免疫法檢測PSA,二氫睪酮(DHT),睪酮(T);(3)Western Blot檢測P53、Cyclin D1、PCNA及de novo中各種催化酶表達,包括類固醇生成快速調(diào)節(jié)蛋白(St AR)、膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白(SREBP)、膽固醇側(cè)鏈裂解酶(CYP11A1)、由17α羥化酶/20-裂解酶(CYP17A1)、3-羥基類固醇合成酶(3βHSD)、醛酮還原酶(AKR1C3)、5α還原酶2(SRD5A2)及胞漿蛋白、核蛋白中AR的表達;(4)實時熒光PCR檢測AR下游基因FKBP5、STEAP1、TMPRSS2表達;(5)激光共聚焦檢測AR的表達及胞內(nèi)定位;(6)免疫共沉淀法檢測HSP90與AR的相互作用。結(jié)果(1)genistein能有效抑制22RV1、VCa P細胞的增殖能力,且這種作用具有劑量時間效應(yīng);(2)genistein抑制CRPC細胞Ki-67、PCNA的表達,抑制CRPC細胞PSA的分泌,阻滯細胞周期于G2/M期;(3)genistein下調(diào)CRPC細胞AR的表達,抑制AR的核易位;(4)genistein下調(diào)CRPC細胞中AR下游基因STEAP1、TMPRSS2的表達;(5)genistein降低CRPC細胞中雄激素水平,下調(diào)從頭合成途徑關(guān)鍵酶AKR1C3、SRD5A2、CYP11A1及3βHSD的表達。結(jié)論Genistein通過下調(diào)CRPC細胞從頭合成途徑中的AKR1C3、SRD5A2、CYP11A1及3βHSD的表達,阻斷雄激素的從頭合成,抑制AR信號通路的激活及核易位,發(fā)揮抗去勢抵抗前列腺癌增殖的作用。
[Abstract]:Studies have shown that soy isoflavones has an anti-prostate cancer effect, but its role and mechanism in castration against prostate cancer is not clear. Prostate cancer cells can still synthesize androgen via de novoa pathway, which activates androgen receptor AR-signaling pathway, regulates gene transcription, induces prostate-specific antigen-PSAs secretion and promotes proliferation. Therefore, blocking androgen biosynthesis and inhibiting AR activation in cancer cells are the targets of CRPC. Objective to investigate the effect of genistein on ovariectomized prostate proliferation. The inhibitory effect on androgen signaling pathway and its molecular mechanism provide experimental data for phytochemical prevention and treatment of CRPC. Methods 22RV1VCAP cells were used as CRPC cell model, and normal prostatic epithelial cells (RWPE-1) were used as control. The cell cycle distribution was detected by flow cytometry, the expression of P53Cyclin D1PCNA and various catalytic enzymes in de novo were detected by enzyme-linked immunosorbent assay (Elisa). These proteins include steroid fast regulatory protein St ARN, cholesterol regulatory element binding protein SREBP, cholesterol side chain cleavage enzyme CYP11A1, CYP17A1 / 3-hydroxysteroid synthase 3 尾 HSDN, aldehydes and ketone reductase AKR1C3A5A2) and cytosolic protein. The expression of AR in nuclear protein was detected by real-time fluorescence PCR. The expression of FKBP5 / STEAP1 / TMPRSS2 was detected by laser scanning. Laser confocal method was used to detect the expression of AR and the immunoprecipitation method was used to detect the interaction between HSP90 and AR. Results Genistein could effectively inhibit the proliferation of 22RV1VCAP cells. This effect has a dose-time effect, which inhibits the expression of Ki-67 CRPC, inhibits the secretion of PSA in CRPC cells, and inhibits the down-regulation of AR expression in CRPC cells at G _ 2 / M phase by genistein. Inhibition of AR nuclear translocation 4 genistein down-regulates the expression of AR downstream gene STEAP1 and TMPRSS2 in CRPC cells and reduces the level of androgen in CRPC cells. The expression of CYP11A1 and 3 尾 HSD in ab initio synthesis pathway was down-regulated by Genistein. Conclusion Genistein can inhibit the activation and nuclear translocation of AR signal pathway by down-regulating the expression of AKR1C3A5A2CYP11A1 and 3 尾 HSD in the ab initio synthesis pathway of CRPC cells. Play the role of anti-castration resistance to prostate cancer proliferation.
【學(xué)位授予單位】：成都醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.25

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本文編號：1693568