本文選題：Y染色體　切入點(diǎn)：AZF微缺失　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：目的:第一部分:分析華北地區(qū)男性不育人群中AZF微缺失的發(fā)生率及不同的缺失類型對表型的影響,探討檢測AZF微缺失的臨床意義。第二部分:研究AZF微缺失對生殖激素及睪丸發(fā)育的影響。第三部分:分析AZF微缺失患者行ICSI-ET治療后的胚胎受精率、卵裂率、優(yōu)胚率、著床率、臨床妊娠率及早期流產(chǎn)率等指標(biāo),探討AZF微缺失對ICSI-ET結(jié)局的影響。第四部分:利用多重置換擴(kuò)增(MDA)結(jié)合多重PCR對男性不育患者行ICSI后的卵裂期男性胚胎行AZF微缺失檢測,探討AZF微缺失的遺傳規(guī)律,為患者更合理地選擇移植胚胎和更確切地遺傳咨詢提供依據(jù)。第五部分:比較接受/拒絕行PGD篩選女性胚胎移植的AZF微缺失患者的妊娠結(jié)局,為建議患者行PGD治療提供臨床依據(jù)。方法:第一部分:研究對象為2012年1月~2013年8月于天津市中心婦產(chǎn)科醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心就診的非梗阻性無精子癥患者(排除輸精管阻塞等因素)73例、嚴(yán)重少精子癥患者90例及輕中度少精子癥患者63例(精液分析均按WHO標(biāo)準(zhǔn):連續(xù)2次精液分析并經(jīng)離心沉淀鏡檢未見精子者為無精子癥;精子密度5×106/ml者為嚴(yán)重少精子癥;精子密度在5~20×106/ml之間者為輕中度少精子癥)。選取30例已正常生育的健康男性為對照。留取上述患者及對照組外周血2 m L,乙二胺四乙酸鹽(EDTA)抗凝,置于-20℃冰箱保存。采用鹽析法提取DNA,選取15個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行AZF微缺失檢測:包括AZFa區(qū)的s Y82、s Y84、s Y86;AZFb區(qū)的s Y 124、s Y127、s Y128、s Y133、s Y134、s Y143;AZFc區(qū)的s Y239、s Y242、s Y254、s Y255;AZFd區(qū)的s Y145、s Y152。將這15個(gè)位點(diǎn)組成4套多重PCR系統(tǒng),分別為系統(tǒng)I:SRY、s Y254、s Y 143、s Y 242、s Y 255;系統(tǒng)II:SRY、s Y 84、s Y 239、s Y 152;系統(tǒng)III:SRY、s Y 86、s Y 127、s Y 145、s Y 124;系統(tǒng)IV:SRY、s Y 134、s Y 82、s Y 128、s Y 133。每套系統(tǒng)中以SRY基因作為內(nèi)控,同時(shí)以空白和已正常生育的男性作為外控。第二部分:留取上述226位男性不育患者的血清,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法測得血清卵泡刺激素(FSH)、黃體生成素(LH)、睪酮(T),與30例以正常生育的健康男性(對照組)相比較,分析其統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。同時(shí),測量并比較睪丸大小。第三部分:分析10例AZF微缺失患者的13個(gè)ICSI周期的ICSI-ET結(jié)局,與同期治療的82例無AZF微缺失的嚴(yán)重少精子癥或無精子癥患者共98個(gè)ICSI周期結(jié)局相比較,分析兩組間患者的受精率、卵裂率、優(yōu)胚率、著床率、臨床妊娠率和早期流產(chǎn)率的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。第四部分:選取10例AZF微缺失患者的13個(gè)ICSI周期的剩余無冷凍價(jià)值的2pn、1pn卵裂期胚胎62個(gè),及無AZF微缺失患者ICSI周期剩余無冷凍價(jià)值的2pn、1pn卵裂期胚胎62個(gè),顯微操作獲得單個(gè)卵裂球并采用多重置換擴(kuò)增技術(shù)(MDA)進(jìn)行全基因組擴(kuò)增,后采用PCR進(jìn)行性別鑒定,最終對61個(gè)男性胚胎行AZF微缺失檢測。第五部分:將4位接受PGD篩選女性胚胎移植的AZF微缺失患者的妊娠結(jié)局與6位拒絕PGD篩選女性胚胎的AZF微缺失患者ICSI后的妊娠結(jié)局相比較。結(jié)果:第一部分:226例男性不育患者行AZF微缺失檢測,共23例AZF微缺失,總?cè)笔蕿?0.18%(23/226),其中無精子癥組、嚴(yán)重少精子癥組和少精子癥組患者的缺失率分別是12.33%(9/73)、13.33%(12/90)、3.17%(2/63);對照組(30例正常男性)均未發(fā)現(xiàn)AZF基因微缺失。無精子癥組和嚴(yán)重少精子癥組患者AZF微缺失率明顯高于輕中度少精子癥組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。23例AZF微缺失患者中,單純AZFc缺失率為3.98(9/226),AZFc+d缺失率為3.54%(8/226),單純AZFa缺失率為1.77%(4/226),AZFb+c缺失率為0.44%(1/226),AZFa+b+c缺失率0.44%(1/226)。第二部分:在無精子癥和嚴(yán)重少精子癥患者中,AZF微缺失組的卵泡刺激素(FSH)、黃體生成素(LH)水平明顯高于無缺失組(P0.05);睪酮(T)水平和睪丸體積明顯低于無缺失組(P0.05)。輕中度少精子癥患者中,AZF缺失組與無缺失組相比較,各項(xiàng)指標(biāo)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。第三部分:AZF微缺失組患者的ICSI受精率明顯低于對照組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);胚胎卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、胚胎著床率、臨床妊娠率亦低于對照組,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);對照組早期流產(chǎn)率亦略降低,亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。此結(jié)果提示AZF微缺失對ICSI治療結(jié)局可能有一定影響,但與無缺失組有同樣機(jī)會擁有自己的后代,尚需擴(kuò)大樣本研究進(jìn)一步證實(shí)。第四部分:(1)MDA擴(kuò)增成功率為93.5%(116/124),經(jīng)性別測定,其中男性胚胎61個(gè)、女性胚胎55個(gè)。(2)AZF檢測結(jié)果:對61個(gè)男性胚胎(包括AZF微缺失患者的28個(gè)男胚;Y染色體無缺失患者的33個(gè)男胚)行AZF微缺失檢測:AZF微缺失患者的28個(gè)男性胚胎全部存在不同范圍的缺失(23個(gè)胚胎與父輩AZF缺失類型相同,5個(gè)胚胎缺失范圍擴(kuò)大)。AZF無缺失患者的33個(gè)男性胚胎中有6例病人的9個(gè)男胚出現(xiàn)de novo缺失,de novo缺失率達(dá)27.3%(9/33)。第五部分:將4位(5個(gè)周期)接受PGD篩選女性胚胎移植的AZF微缺失患者的妊娠結(jié)局與6位(8個(gè)周期)拒絕PGD篩選女性胚胎的AZF微缺失患者ICSI后的妊娠結(jié)局相比較,兩組受精率、卵裂率、優(yōu)胚率等均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。接受PGD組患者共獲得21個(gè)女性胚胎,著床率為27.3%,臨床妊娠率為40%,無早期流產(chǎn),順利生下2個(gè)健康女嬰;拒絕PGD組著床率為21.4%,臨床妊娠率為42.9%,1例早期流產(chǎn)(33.3%),生下1個(gè)健康女嬰和1個(gè)與父輩缺失類型相同的男嬰。結(jié)論:1.本地區(qū)嚴(yán)重少精子癥患者的AZF微缺失率最高,無精子癥患者次之,兩者缺失均以AZFc區(qū)微缺失率最高;AZFa微缺失僅見于無精子癥患者中;男性不育患者常規(guī)篩查AZF對臨床診療有重要的指導(dǎo)意義。2.本研究證實(shí)AZF微缺失影響患者性腺發(fā)育,導(dǎo)致睪丸體積偏小、FSH及LH水平增高、T水平明顯降低,最終導(dǎo)致不育。3.AZF微缺失可能對ICSI-ET治療有一定影響,可導(dǎo)致受精率降低,但卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、臨床妊娠率、早期流產(chǎn)率與對照組相比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,故AZF微缺失對ICSI治療的影響還需更大樣本量的研究證實(shí)。4.AZF微缺失可通過ICSI技術(shù)從父代遺傳給子代,并在遺傳過程中可發(fā)生de novo微缺失(即突變?nèi)笔?子代有缺失而父代未見缺失)和缺失范圍擴(kuò)大。5.AZF微缺失患者中,接受PGD技術(shù)篩選女性胚胎不降低臨床妊娠率,亦可減少早期胚胎流產(chǎn)率,避免將這一基因缺陷人為地遺傳給男性后代。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of AZF micro - deletion on reproductive hormone and testicular development in male infertility patients . Part two : To study the effect of AZF micro - deletion on reproductive hormone and testicular development . Part four : To study the effect of AZF microdeletion on reproductive hormone and testicular development . Part IV : To study the effect of AZF microdeletion on reproductive hormone and testicular development . A total of 30 healthy male healthy men were selected as controls . The peripheral blood 2 m L and EDTA were collected from the above patients and the control group . The samples were stored in a refrigerator at -20 鈩，

本文編號：1693563