發(fā)布時(shí)間：2018-04-01 02:21

  本文選題：可溶性尿激酶受體　切入點(diǎn)：局部節(jié)段性腎小球硬化　出處：《華中科技大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：第一部分IgA腎病患者血漿可溶性尿激酶受體水平與局部節(jié)段性腎小球硬化樣病理改變發(fā)生相關(guān)[目的]已有研究報(bào)道可溶性尿激酶受體(soluble urokinase receptor, suPAR)與局部節(jié)段性腎小球硬化(focal segmental glomerulosclerosis, FSGS)的病理發(fā)生可能相關(guān)。本研究將分析suPAR是否參與1gA腎病患者的FSGS樣病理改變。[方法]檢測(cè)138例IgA腎病患者血漿suPAR水平,然后分析它們的臨床及病理相關(guān)性。[結(jié)果]我們發(fā)現(xiàn)無(wú)論是通過(guò)單變量分析還是多變量分析IgA腎病患者血漿suPAR值均與年齡和腎功能顯著性相關(guān)。通過(guò)多變量分析發(fā)現(xiàn),女性血漿suPAR水平更高,血漿suPAR水平與患者IgA腎病患者24小時(shí)尿蛋白水平和血漿超敏C反應(yīng)蛋白之間沒(méi)有顯著的相關(guān)性。在我們的1gA腎病患者隊(duì)列中,60例患者病理切片中包含F(xiàn)SGS樣病理改變。通過(guò)單變量和多變量分析發(fā)現(xiàn),與不伴FSGS樣病理改變的IgA腎病患者相比,伴FSGS樣病理改變的IgA腎病患者有著顯著升高的血漿suPAR水平。血漿suPAR值也可以成為區(qū)分IgA腎病患者是否伴有FSGS改變的有效因子。最佳的分界值為1806 pg/ml。同樣無(wú)論單變量分析還是多變量分析我們都發(fā)現(xiàn)血漿suPAR濃度均與腎小管萎縮/間質(zhì)纖維化程度顯著性相關(guān)。多變量分析中,血漿suPAR水平與腎小球新月體形成百分比顯著相關(guān),與腎小球球性硬化百分比和動(dòng)脈損傷程度無(wú)關(guān)。[結(jié)論]該研究的結(jié)果表明IgA腎病患者血漿suPAR水平顯著性相關(guān)于年齡,性別,腎功能,腎小球萎縮/間質(zhì)纖維化程度和新月體形成百分比。在中國(guó)IgA腎病患者中,血漿suPAR可能是判斷FSGS樣病理改變是否存在的潛在預(yù)測(cè)因子。第二部分尿激酶受體蛋白提高小鼠原代足突細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力的研究[目的]根據(jù)我們前期研究循環(huán)suPAR水平與IgA腎病患者FSGS樣病理改變相關(guān)的結(jié)果,繼續(xù)明確uPAR蛋白對(duì)足細(xì)胞的影響。[方法]應(yīng)用免疫熒光及流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)鑒定所提取小鼠原代足突細(xì)胞的純度。運(yùn)用劃痕實(shí)驗(yàn)及遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)uPAR蛋白對(duì)小鼠原代足細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力的影響。并且,運(yùn)用western blot技術(shù)檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組原代足細(xì)胞運(yùn)動(dòng)相關(guān)蛋白的表達(dá)。[結(jié)果]所提小鼠原代足細(xì)胞均高表達(dá)足細(xì)胞特異蛋白Nephrin、Synaptopodin及WT-1,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞純度為98.4%。劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),與正常對(duì)照組相比,10μg/ml uPAR重組蛋白顯著性增強(qiáng)小鼠原代足細(xì)胞24小時(shí)及48小時(shí)內(nèi)的運(yùn)動(dòng)能力(P0.05)。遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與正常對(duì)照組相比,5μg/ml(P0.05)及10μg/ml(P0.01)uPAR重組蛋白均顯著性增強(qiáng)小鼠原代足細(xì)胞24小時(shí)及48小時(shí)內(nèi)的遷移能力。同時(shí),10μg/ml uPAR蛋白可顯著性增加原代足細(xì)胞RhoA、Rac1及Cdc42蛋白水平的表達(dá),并且可顯著性降低其Nephrin蛋白水平的表達(dá)。[結(jié)論]通過(guò)對(duì)RhoA、Rac1及Cdc42蛋白水平表達(dá)的調(diào)節(jié),uPAR蛋白可以促進(jìn)小鼠原代足細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力的增強(qiáng)。第三部分尿激酶受體在不同環(huán)境下影響小鼠系膜細(xì)胞增殖能力的研究[目的]腎小球系膜細(xì)胞增生,凋亡及細(xì)胞外基質(zhì)沉積是多種腎臟疾病中常見(jiàn)的病理改變。尿激酶受體是一種多功能胞膜外蛋白,具有促進(jìn)或抑制細(xì)胞增殖的多重作用。本研究將明確尿激酶受體對(duì)于腎小球系膜細(xì)胞的具體作用。[方法]運(yùn)用MTT及Brdu方法分別于正常、高糖或血清饑餓培養(yǎng)條件下分析uPAR重組蛋白對(duì)小鼠系膜細(xì)胞增殖能力的影響。應(yīng)用Western blot實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)不同處理組系膜細(xì)胞增殖相關(guān)蛋白的表達(dá)情況,包括AKT、P-AKT、MEK、P-MEK、ERK及P-ERK蛋白的表達(dá)。同樣運(yùn)用MTT技術(shù)分析整合素抑制肽RGD對(duì)各組細(xì)胞增殖能力的影響。[結(jié)果]5μg/ml及10μg/ml濃度水平uPAR顯著性降低正常培養(yǎng)小鼠系膜細(xì)胞24小時(shí)及48小時(shí)內(nèi)的增殖能力。與正常對(duì)照組相比,高糖及血清饑餓處理24小時(shí)或48小時(shí)內(nèi)均導(dǎo)致系膜細(xì)胞增殖能力顯著性降低。uPAR重組蛋白的干預(yù)顯著促進(jìn)高糖環(huán)境下小鼠系膜細(xì)胞增殖能力抑制水平。相反,uPAR重組蛋白的干預(yù)促進(jìn)血清饑餓環(huán)境下小鼠系膜細(xì)胞的增殖水平。10μg/ml濃度的uPAR蛋白作用最為顯著。與此相對(duì)應(yīng),與單純高糖處理組相比,10μg/ml uPAR重組蛋白顯著性降低高糖處理小鼠系膜細(xì)胞P-AKT、MEK、P-MEK及P-ERK蛋白表達(dá)水平。相反,與單純血清饑餓處理組相比,10μg/ml uPAR重組蛋白顯著性提高血清饑餓處理小鼠系膜細(xì)胞P-AKT、MEK、 P-MEK及P-ERK蛋白表達(dá)水平。AKT及ERK蛋白表達(dá)水平均沒(méi)有發(fā)生顯著性改變。整合素抑制肽RGD可以顯著性降低uPAR重組蛋白對(duì)血清饑餓環(huán)境下小鼠系膜細(xì)胞的促增殖能力(P0.05)。然而,對(duì)uPAR重組蛋白促進(jìn)高糖環(huán)境下小鼠系膜細(xì)胞增殖抑制過(guò)程,RGD沒(méi)有顯著性拮抗作用。[結(jié)論]通過(guò)對(duì)P-AKT、MEK、P-MEK及P-ERK蛋白表達(dá)的不同調(diào)節(jié),uPAR對(duì)高糖環(huán)境下系膜細(xì)胞具有抑制增殖作用,而對(duì)血清饑餓環(huán)境下系膜細(xì)胞具有促進(jìn)增殖作用。uPAR的促進(jìn)血清饑餓培養(yǎng)條件下小鼠系膜細(xì)胞增殖的過(guò)程需要整合素蛋白的參與。第四部分uPAR蛋白與補(bǔ)體系統(tǒng)激活相互作用性研究[目的]前期研究表明補(bǔ)體通路的激活及血漿suPAR水平均與IgA腎病患者FSGS樣病理改變相關(guān),本研究將觀察補(bǔ)體系統(tǒng)的激活與suPAR的表達(dá)是否相關(guān)。[方法]檢測(cè)210例IgA腎病患者血漿suPAR水平,并與患者腎小球系膜區(qū)C3沉積行相關(guān)性分析。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)小鼠系膜細(xì)胞及原代足細(xì)胞C3aR及C5aR mRNA表達(dá)。運(yùn)用Western blot技術(shù)分析不同濃度uPAR蛋白對(duì)小鼠系膜細(xì)胞及原代足細(xì)胞C3aR及C5aR蛋白表達(dá)的影響,及不同濃度C3a及C5a蛋白對(duì)小鼠系膜細(xì)胞及原代足細(xì)胞uPAR蛋白表達(dá)的影響。[結(jié)果]腎小球系膜區(qū)補(bǔ)體C3沉積3+～4+的IgA腎病患者血漿suPAR濃度顯著性高于C3沉積2+IgA腎病患者血漿suPAR水平(P0.001)及C3沉積0～1+的IgA腎病患者血漿suPAR水平(P0.0001)。小鼠系膜細(xì)胞及原代足細(xì)胞均有C3aR及C5aRmRAN表達(dá)。與正常對(duì)照組相比,uPAR蛋白可以顯著性增加小鼠系膜細(xì)胞及原代足細(xì)胞C3aR及C5aR蛋白的表達(dá),且呈劑量依賴性。反過(guò)來(lái),補(bǔ)體C3a及C5a也可顯著性增加小鼠系膜細(xì)胞及原代足細(xì)胞uPAR蛋白水平的表達(dá),也呈劑量依賴性。[結(jié)論]在腎臟疾病系統(tǒng)中,uPAR蛋白的表達(dá)與補(bǔ)體系統(tǒng)的激活可能存在相互作用的關(guān)系。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R692.31

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本文編號(hào)：1693548