發(fā)布時(shí)間：2018-03-29 00:37

  本文選題：IgA腎病　切入點(diǎn)：益氣養(yǎng)陰　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)通過建立IgA腎病大鼠模型，應(yīng)用益氣養(yǎng)陰中藥對(duì)大鼠模型進(jìn)行干預(yù)治療，檢測(cè)實(shí)驗(yàn)大鼠的尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、24小時(shí)尿蛋白定量、腎臟病理學(xué)變化，免疫組織化學(xué)法及RT-PCR法檢測(cè)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）在大鼠腎臟組織中的表達(dá)，放射免疫法測(cè)定大鼠血清中血管緊張素II（AngII）的水平，以探究益氣養(yǎng)陰中藥對(duì)IgA腎病的治療作用及可能的作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)以及理論依據(jù)。 方法:選取40只體重在150-200g左右的SPF級(jí)雄性SD大鼠，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周過后，隨機(jī)分為正常組、模型組、益氣養(yǎng)陰組及貝那普利組。除正常組外，模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組，均運(yùn)用以下方法復(fù)制大鼠IgAN模型，具體如下：將免疫原BSA(美國Sigma公司)配制成100g/L濃度，隔天灌胃，劑量為400mg/kg，持續(xù)8周；每周一次皮下注射四氯化碳0.1ml、蓖麻油0.3ml,連續(xù)9周；并于第六周尾靜脈注射脂多糖(美國Sigma公司)0.05mg。正常組分別予以等量的純凈水隔天灌胃，持續(xù)8周；每周一次皮下注射生理鹽水0.4ml連續(xù)9周；并于第六周尾靜脈注射等量生理鹽水。第10周起，貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組分別予以鹽酸貝那普利片、相應(yīng)中藥灌胃，正常組、模型組予以等量純凈水灌胃，持續(xù)8周。分別于3周末、6周末、9周末、13周末、17周末用代謝籠收集各個(gè)組大鼠的尿液，以測(cè)定24h尿蛋白定量及尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，實(shí)驗(yàn)?zāi)┘吹?7周末，斷頭處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，，股動(dòng)脈取血，血清離心后測(cè)定腎功能，迅速采集大鼠腎臟標(biāo)本。光鏡觀察大鼠腎臟組織病理學(xué)改變。RT-PCR及免疫組化法測(cè)定ACE在腎臟組織的表達(dá)情況，放射免疫法測(cè)定血清中AngII水平。 結(jié)果： 1益氣養(yǎng)陰方藥對(duì)IgA腎病大鼠24h尿蛋白定量的影響 正常組的大鼠在第3周末、第6周末、第9周末、第13周末、第17周末測(cè)得的尿蛋白比較，均沒有明顯差異(P0.05)。 造模開始后，模型組與各治療組的大鼠于造模的第6周末開始出現(xiàn)蛋白尿，并且尿蛋白呈進(jìn)行性增長(zhǎng)，于第9周末達(dá)到最高，其與正常組相比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 給藥后，各治療組大鼠于4周后尿蛋白開始下降，與模型組相比24h尿蛋白定量明顯減少(P0.05)；益氣養(yǎng)陰組和貝那普利組間比較，無顯著差異(P0.05)。 2益氣養(yǎng)陰方藥對(duì)IgA腎病大鼠尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響 正常組的大鼠在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，均未出現(xiàn)血尿。 造模開始后，模型組與治療組大鼠于第6周末開始出現(xiàn)血尿,其尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)與對(duì)照組相比顯著增多(P0.05),并且呈進(jìn)行性增多,于第9周末達(dá)到高峰，與正常組相比,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 給藥后，益氣養(yǎng)陰組大鼠尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)在治療4周后開始下降，其與模型組相比明顯降低(P0.05)；貝那普利組大鼠尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)與模型組相比有所下降，但二者之間無顯著差異(P0.05)。 3對(duì)IgA腎病大鼠Scr、BUN的影響 正常組、模型組、益氣養(yǎng)陰組、貝那普利組，血清Scr、BUN比較：各組之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 4腎臟病理學(xué)的改變 光鏡下，正常組大鼠的腎小球結(jié)構(gòu)完整，腎小球基質(zhì)、系膜未見明顯的異常改變；模型組大鼠可以見到腎小球系膜細(xì)胞增生和系膜基質(zhì)增多；益氣養(yǎng)陰組與貝那普利組也都有不同程度的病理改變，但和模型組相比較病變較輕。 免疫熒光示：正常組大鼠腎小球系膜區(qū)未見或少見IgA沉積，模型組大鼠可以見到IgA沿腎小球系膜呈團(tuán)塊狀分布，益氣養(yǎng)陰組和貝那普利組也可見到有不同程度IgA的沉積，但與模型組相比較輕。 5RT-PCR和免疫組化對(duì)腎臟組織中ACE表達(dá)的影響 RT-PCR結(jié)果示：和正常組相比，模型組、益氣養(yǎng)陰組與貝那普利組大鼠ACE在腎臟組織的表達(dá)明顯升高(P0.05)；與模型組比較，益氣養(yǎng)陰組與貝那普利大鼠ACE在腎臟組織的陽性表達(dá)明顯減弱(P0.05)；但益氣養(yǎng)陰組與貝那普利組間無明顯差異(P0.05)。 免疫組化染色示：和正常組相比，模型組、益氣養(yǎng)陰組與貝那普利組大鼠ACE在腎臟組織的陽性表達(dá)增強(qiáng)(P0.05)；與模型組比較，益氣養(yǎng)陰組與貝那普利組大鼠ACE在腎臟組織的陽性表達(dá)減弱(P0.05);但益氣養(yǎng)陰組與貝那普利組間無明顯差異(P0.05)。 6放射免疫法測(cè)定血清AngII水平 與正常組相比較，模型組、益氣養(yǎng)陰組與貝那普利組大鼠血清中AngII水平升高(P0.05)；與模型組比較，益氣養(yǎng)陰組與貝那普利組大鼠血清中AngII水平降低(P0.05)；但益氣養(yǎng)陰組與貝那普利組間無明顯差異(P0.05)。 結(jié)論： 1益氣養(yǎng)陰方藥可以明顯減少IgA腎病大鼠的尿蛋白及尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。 2益氣養(yǎng)陰方藥可以有效減輕IgA腎病大鼠腎臟組織的病理損害。 3益氣養(yǎng)陰方藥可以抑制ACE在腎臟組織的表達(dá)及降低血清中AngII的水平，提示其可能通過抑制RAS系統(tǒng)的激活而起到延緩腎臟病的發(fā)展。
[Abstract]:Objective: this experiment established IgA nephropathy rat model, application of Tonifying Qi and nourishing Yin treated rats, urine red blood cell count assay in rats, 24 hour urinary protein, renal pathological changes, immunohistochemical method and RT-PCR method to detect angiotensin converting enzyme (Zhang Su ACE) expression in kidney tissues of rats were measured by radioimmunoassay, blood vessels in rat serum angiotensin II (AngII) level, to explore the therapeutic effects of traditional Chinese medicine of Supplementing Qi and nourishing Yin on IgA nephropathy and its possible mechanism, to provide experimental basis and theoretical basis for clinical application.
Methods: a total of 40 weight around 150-200g SD male SPF rats, fed after 1 weeks, were randomly divided into normal group, model group, Yiqi Yangyin group and Benner Pury group. Except the normal group, model group, Benner Pury group, supplementing qi and nourishing Yin group, are using the following method to copy IgAN rat model. The details are as follows: the immunogenicity of BSA (American Sigma company) prepared by the concentration of 100g/L, the next day orally, at a dose of 400mg/kg for 8 weeks; weekly subcutaneous injection of carbon tetrachloride 0.1ml, castor oil, 0.3ml, for 9 weeks; and in the sixth weeks of intravenous injection of lipopolysaccharide (Sigma) in normal 0.05mg. group were given the same amount the pure water the next day orally, for 8 weeks; weekly subcutaneous injection of 0.4ml saline for 9 weeks; and in the sixth weeks of intravenous injection of normal saline. The tenth week, Benner Pury group, supplementing qi and nourishing Yin group were given Benap hydrochloride Li, the corresponding Chinese medicine gavage, the normal group, model group were given the same amount of pure water by gavage for 8 weeks, respectively. At the end of the 3 week, 6 week, 9 week, 13 week, 17 weeks using metabolic cages to collect each group of rats was determined by urine, 24h urine protein and urine red blood cell count, experiment that is the end of the seventeenth week, decapitated animal experiment, femoral artery blood, determination of renal function serum after centrifugation, collected samples of rat kidney. To observe the expression changes.RT-PCR and immunohistochemical determination of ACE in renal tissue of rat kidney tissue pathology by light microscopy, determination of serum AngII levels by radioimmunoassay.
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本文編號(hào)：1678809