本文選題：膀胱癌　切入點：RAS　出處：《華東師范大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：1.抑制Polo樣激酶1選擇性阻斷RAS突變膀胱腫瘤的生長膀胱癌是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤,以移行上皮細胞癌最為多見。隨著膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展分子機制的不斷闡明,膀胱腫瘤分子靶向治療受到人們越來越多的關(guān)注。HRAS是原癌基因RAS家族成員之一,它的突變被證實在膀胱腫瘤發(fā)生及發(fā)展中有重要作用。正常的Ras蛋白參與調(diào)節(jié)細胞的生長、增殖和分化等功能,突變后會使其下游信號通路持續(xù)激活導(dǎo)致細胞發(fā)生癌變。目前直接靶向Ras蛋白及其下游信號通路的抑制劑并未取得良好療效,這使得RAS突變腫瘤的治療策略成為研究難點。最新的研究結(jié)果表明,PLK1基因與RAS基因存在“協(xié)同致死”關(guān)系,提示Plk1可能是RAS突變腫瘤的潛在治療新靶點。Polo樣激酶1(Plk1)是一種蛋白激酶,在細胞周期中發(fā)揮重要調(diào)控作用。本論文假設(shè)為抑制Plkl可選擇性阻斷RAS突變膀胱腫瘤的生長。在多種膀胱癌細胞上,利用siRNA技術(shù)或用小分子抑制劑(BI-2536和BI-6727)干預(yù)Plk1,結(jié)果顯示Plk1的功能缺失可以選擇性抑制RAS突變的細胞株的存活(P0.01)。當Plk1激酶活性被抑制后,與RAS非突變細胞株BIU-87相比,RAS突變細胞株5637細胞周期被阻斷在G2/M期,且發(fā)生明顯凋亡。分子機制研究中,結(jié)果顯示在RAS突變細胞株5637中,Plk1功能被抑制導(dǎo)致Ras下游p-AKT和p-ERK的水平降低。在體內(nèi)動物實驗中,BI-2536(20mg/kg,每周兩次,連續(xù)給藥22天)能明顯抑制膀胱癌RAS突變5637腫瘤的體積及重量,但不影響裸鼠的正常體征。腫瘤組織免疫組化結(jié)果分析發(fā)現(xiàn),與對照組相比,給藥組裸鼠腫瘤組織中Ki-67表達明顯減少,p-AKT和p-ERK的表達降低。綜上所述,本文研究證明抑制Plk1通過下調(diào)Ras下游關(guān)鍵蛋白從而選擇性抑制RAS突變膀胱腫瘤,研究成果為RAS突變膀胱癌的治療提供線索。2患者源性膀胱腫瘤動物模型的初步建立動物模型是腫瘤分子機理研究和靶向新藥研發(fā)的的重要載體。目前膀胱癌研究動物模型主要是細胞系皮下荷瘤和細胞系原位荷瘤動物模型,然而該兩類模型并不能有效模擬臨床膀胱癌腫瘤組織的微環(huán)境和異質(zhì)性。近年,患者源性腫瘤模型應(yīng)運而生,越來越受到推崇,被認為是最貼近臨床且最具有應(yīng)用價值的動物模型。為了進一步解析膀胱癌轉(zhuǎn)移分子機制以及發(fā)現(xiàn)抑制膀胱癌的有效藥物,本文旨在建立患者源性膀胱腫瘤動物模型。本課題組通過與長海醫(yī)院泌尿外科建立科學(xué)合作關(guān)系,經(jīng)患者同意,獲得新鮮膀胱癌腫瘤組織,建立患者源性膀胱腫瘤動物模型。具體研究方法如下：使用套管針將新鮮膀胱腫瘤小塊移植于裸鼠皮下,經(jīng)過為期四個月的觀察測量,定義腫瘤體積≥500mm3則認為病人原代組織成瘤,進一步對腫瘤進行分離傳代和凍存。目前本研究已成功建立一例膀胱腫瘤動物模型,腫瘤組織已傳至第三代。經(jīng)分子突變鑒定,初步發(fā)現(xiàn)該模型腫瘤組織RAS基因熱點突變區(qū)域不存在突變,深入分子的鑒定工作有待進一步開展。該模型的成功建立為膀胱癌發(fā)生發(fā)展分子機制研究以及抗膀胱癌腫瘤新藥篩選和研發(fā)提供重要研究系統(tǒng)。
[Abstract]:1. inhibition of Polo like kinase 1 selectively blocking the growth of bladder cancer RAS mutation in bladder cancer is the most common malignant tumor of urinary system in transitional cell carcinoma is the most common. With the occurrence of bladder cancer, we clarify the molecular mechanism of the development, to the treatment of bladder tumor targeting molecules has attracted more and more attention is one of the.HRAS RAS gene family, the mutation was confirmed in bladder cancer occurrence and development has an important role. The normal Ras protein involved in the regulation of cell growth, proliferation and differentiation of function mutation will make its continued activation of downstream signaling pathways lead to cancer. At present, directly targeted inhibitors of Ras protein and its downstream the signal pathway has not achieved good effect, which makes the strategy for the treatment of tumors with RAS mutations has become difficult. The latest research results show that the existence of "PLK1 gene and RAS gene co lethal "Relationship, suggesting that Plk1 may be RAS mutated tumors a new potential target for therapy of.Polo like kinase 1 (Plk1) is a protein kinase that plays an important role in the cell cycle. The hypothesis for the inhibition of Plkl can selectively block RAS mutation in bladder tumor growth. In a variety of bladder cancer cells, using siRNA technology or with small molecule inhibitors (BI-2536 and BI-6727) Plk1 intervention, the results showed that functional loss of Plk1 can survive the selective inhibition of RAS mutant cell line (P0.01). When Plk1 kinase activity is inhibited, and the mutation of BIU-87 cells compared to RAS, RAS mutant cell lines of 5637 cell cycle was blocked in G2/M phase. And the occurrence of apoptosis. The molecular mechanism in the study, the results showed that in RAS mutant cell lines 5637, Plk1 function was inhibited leading to Ras downstream of the p-AKT and p-ERK levels decreased. In vivo animal experiment, BI-2536 (20mg /kg, two times a week. Continuous administration for 22 days) volume and weight can obviously inhibit the bladder cancer RAS mutations in 5637 tumors, but does not affect the normal signs of tumor tissue in nude mice. Immunohistochemistry results showed that compared with the control group, the tumor tissue of mice to Ki-67 medicine group significantly decreased the expression, decreased expression of p-AKT and p-ERK. To sum up, this paper the research indicated that inhibition of Plk1 by downregulation of Ras downstream key protein to selective inhibition of RAS mutation in bladder cancer, provide clues to patients with.2 bladder tumor animal model for research of RAS mutation in bladder cancer preliminary establish the animal model of tumor molecular mechanism and targeted drug development important carrier. The animal model of primary bladder cancer is cell line subcutaneous tumor cell lines and in situ tumor animal model, however, the two models can not effectively simulate clinical bladder cancer tissue microenvironment and heterogeneity . in recent years, as patients with tumors of the model, more and more respected, is considered to be the most close to the animal model and clinical application value. In order to further analyze the molecular mechanism of bladder cancer metastasis and find effective drugs that inhibit bladder cancer, this paper aims to establish the source of patients with bladder tumor animal model. The relationship between scientific cooperation by the research group and the Department of Urology, Changhai Hospital, the patients agreed to get fresh bladder cancer patients, establish bladder tumor animal model. Specific research methods are as follows: using trocar small fresh bladder tumor transplanted subcutaneously in nude mice, through the observation period of four months, the definition of tumor volume more than 500mm3 that patients primary tumor tissue, further separation and subculture and cryopreservation on tumor. At present, this study has successfully established an animal model of bladder tumor, tumor The organization has been passaged for third generations. The molecular identification of mutations, initially found that the model of RAS gene hotspot mutations of tumor tissue region no mutations, identifying the molecular depth need to be further carried out. The model successfully established for bladder cancer molecular mechanism of bladder cancer development and anti tumor drug screening and development provides an important research system.

【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R737.14

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本文編號：1677855