發(fā)布時(shí)間：2018-03-26 18:23

  本文選題：白細(xì)胞介素-4　切入點(diǎn)：LDH-A　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景和目的:前列腺癌是老年男性常見惡性腫瘤之一。據(jù)估計(jì),2017年,美國大約有161360例新發(fā)前列腺癌,有26730例死亡病例。我國前列腺癌發(fā)病率近年顯著升高,在男性泌尿生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中達(dá)第三位。研究表明,腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移與其所處的內(nèi)外環(huán)境關(guān)系密切。腫瘤微環(huán)境不僅包括腫瘤所在組織的結(jié)構(gòu)和代謝,亦與腫瘤細(xì)胞自身的內(nèi)在環(huán)境有關(guān)。腫瘤細(xì)胞周圍的免疫細(xì)胞以及細(xì)胞因子之間的相互作用都會(huì)影響腫瘤的生長、進(jìn)展。白細(xì)胞介素-4(IL-4)在炎癥免疫中是一類重要的細(xì)胞因子,由T helper(Th)細(xì)胞分泌,促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞及肥大細(xì)胞發(fā)育。研究表明IL-4對多種腫瘤發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有著重要影響,其中包含前列腺癌。同時(shí),腫瘤細(xì)胞的生長、增殖、轉(zhuǎn)移都需要通過糖代謝途徑獲得能量。LDH-A是糖代謝途徑的關(guān)鍵酶之一,在糖酵解中起重要作用。目前,尚無明確報(bào)道炎癥免疫與腫瘤糖代謝關(guān)聯(lián)的研究。在前期研究中,我們發(fā)現(xiàn)IL-4能影響前列腺癌細(xì)胞的LDH-A表達(dá)。因此,本研究從IL-4對LDH-A的影響進(jìn)行探究,闡述IL-4對前列腺癌細(xì)胞糖代謝和細(xì)胞增殖的作用。實(shí)驗(yàn)材料:1、前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C3;2、臨床樣本:廣州市第一人民醫(yī)院泌尿外科手術(shù)切除的前列腺癌或增生組織;3、兔抗人LDH-A抗體,兔抗人p-LDH-A抗體;4、人重組蛋白 IL-4。實(shí)驗(yàn)方法:1、RT-QPCR:(1)提取細(xì)胞mRNA;(2)反轉(zhuǎn)錄;(3)引物設(shè)計(jì);(4)實(shí)時(shí)熒光定量PCR。2、蛋白印跡實(shí)驗(yàn):(1)蛋白提取;(2)濃度測定;(3)上樣;(4)跑膠;(5)切膠;(6)轉(zhuǎn)膜;(7)封閉;(8)一抗;(9)洗膜;(10)二抗;(11)洗膜;(12)曝光。3.細(xì)胞增殖測定實(shí)驗(yàn):(1)細(xì)胞計(jì)數(shù);(2)鋪板;(3)加藥;(4)測吸光度。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,當(dāng)P值小于0.05時(shí)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。測定數(shù)值通過統(tǒng)計(jì)分析軟件SPSS 13.0分析。結(jié)果:1、良性前列腺和前列腺癌組織中LDH-A蛋白表達(dá)水平檢測應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡檢測臨床手術(shù)切除的前列腺組織LDH-A的蛋白表達(dá)量。結(jié)果顯示LDH-A在前列腺腫瘤中呈現(xiàn)高表達(dá),而在良性前列腺組織中表達(dá)相對較低。2、IL-4對前列腺腫瘤細(xì)胞PC3增殖能力的影響人重組蛋白IL-4(50ng/ml)與PC3細(xì)胞共培養(yǎng)24h、48h、72h后,加入CCK-8檢測上清OD值,72h對照組與IL-4處理組OD值分別為0.92±0.13和1.4±0.14,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),結(jié)果顯示IL-4能促進(jìn)PC3細(xì)胞增殖。。3、IL-4處理PC3細(xì)胞后檢測LDH-A和p-LDH-A表達(dá)量變化50ng/ml IL-4處理PC3細(xì)胞,6h后收集細(xì)胞檢測LDH-A mRNA表達(dá)量。結(jié)果顯示經(jīng)IL-4處理后,LDH-A mRNA的表達(dá)上調(diào)1.32±0.14倍,差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。同時(shí),50ng/ml IL-4處理PC3細(xì)胞,24h后收集細(xì)胞檢測LDH-A和磷酸化LDH-A蛋白表達(dá)變化。結(jié)果顯示IL-4刺激后,LDH-A、p-LDH-A蛋白表達(dá)升高。4、檢測IL-4對PC3細(xì)胞乳酸產(chǎn)量的影響臨床乳酸檢測儀器檢測50ng/ml IL-4處理24h后的PC3細(xì)胞上清液中乳酸。結(jié)果顯示IL-4處理后,上清液中乳酸的濃度顯著升高。結(jié)論:1、LDH-A在前列腺腫瘤中呈現(xiàn)高表達(dá),而在良性前列腺組織中表達(dá)相對較低。2、白細(xì)胞介素-4能促進(jìn)前列腺癌PC3細(xì)胞的增殖。3、白細(xì)胞介素-4能誘導(dǎo)PC3的LDH-A mRNA表達(dá)上調(diào),LDH-A和p-LDH-A蛋白表達(dá)上調(diào)。4、白細(xì)胞介素-4能上調(diào)PC3乳酸產(chǎn)量。
[Abstract]:This study has shown that IL - 4 plays an important role in the development and prognosis of prostate cancer cells . The study shows that IL - 4 plays an important role in the development and prognosis of prostate cancer cells . The study shows that IL - 4 plays an important role in the development and prognosis of prostate cancer cells . Results : The expression level of LDH - A protein in benign prostatic and prostate cancer was detected by SPSS 13.0 . The results showed that the expression level of LDH - A in benign prostatic and prostate cancer was significantly lower than that of PC3 cells . The levels of LDH - A and p - LDH - A were detected by IL - 4 treatment . The results showed that the expression of LDH - A mRNA was up - regulated by 1.32 鹵 0.14 fold after treatment with IL - 4 . The results showed that the expression of LDH - A and p - LDH - A was significantly increased after IL - 4 treatment . The results showed that IL - 4 increased the expression of LDH - A and p - LDH - A .

【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.25

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 葉定偉;朱耀;;中國前列腺癌的流行病學(xué)概述和啟示[J];中華外科雜志;2015年04期

2 李鳴;那彥群;;不同水平前列腺特異抗原的前列腺癌診斷率[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2008年01期

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本文編號：1669026