本文選題：弱精子癥SEMG1基因　切入點(diǎn)：SEPT12基因基因表達(dá)　出處：《鄭州大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：第一部分SEMG1、SEPT12基因的表達(dá)分析目的:檢測(cè)精囊凝膠蛋白1(SEMG1)、胞裂蛋白12(SEPT12)基因在弱精子癥(Asthenozoospermia,AZS)患者和正常對(duì)照精子中m RNA的表達(dá),分析SEMG1、SEPT12基因與弱精子癥的相關(guān)性。方法:收集成年男性正常對(duì)照組和弱精子癥組精液樣本各40例,采用Percoll密度梯度分離液純化精子,提取精子RNA并將其逆轉(zhuǎn)錄為c DNA。采用實(shí)時(shí)定量RT-PCR(q RT-PCR)的方法,分別以對(duì)照組和弱精子癥組精子的c DNA為模板,設(shè)計(jì)SEMG1、SEPT12基因的特異性擴(kuò)增引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,比較兩組精子中SEMG1、SEPT12基因m RNA表達(dá)差異。結(jié)果:通過(guò)qRT-PCR進(jìn)行目的基因和內(nèi)參基因的擴(kuò)增,分別獲得特異性擴(kuò)增條帶,SEMG1目的基因片段為163bp,SEPT12目的基因片段為167bp,內(nèi)參基因GAPDH目的片段為189bp。對(duì)兩樣本組目的基因的相對(duì)表達(dá)量采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果顯示:1.AZS組SEMG1基因的m RNA表達(dá)水平(1.98±0.24)顯著高于對(duì)照組(1.05±0.35),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);2.AZS組SEPT12基因的m RNA表達(dá)水平(0.36±0.14)顯著低于對(duì)照組(1.03±0.25),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.精囊凝膠蛋白1基因(SEMG1)在弱精子癥精子中表達(dá)上調(diào),可能與AZS的發(fā)生有關(guān);2.胞裂蛋白12基因(SEPT12)在弱精子癥精子中表達(dá)顯著降低,可能參與AZS的發(fā)生。第二部分SEMG1、SEPT12基因的多態(tài)性研究目的:應(yīng)用KASP(Kompetitive Allele-Specific PCR)高通量SNP(Single nucleotide polymorphism)檢測(cè)技術(shù)對(duì)SEMG1基因的rs16989820位點(diǎn)、rs2301366位點(diǎn),及SEPT12基因的rs759991位點(diǎn)、rs6500634位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè),初步探討這四個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)性與河南弱精子癥患者的相關(guān)性,為弱精子癥的診斷和治療提供相關(guān)的理論依據(jù)。方法:收集276例正常成年男性精液樣本作為對(duì)照組,276例弱精子癥患者精液樣本作為病例組,提取精子基因組DNA,通過(guò)KASP高通量SNP檢測(cè)技術(shù)對(duì)SEMG1基因的rs16989820位點(diǎn)、rs2301366位點(diǎn),及SEPT12基因的rs759991位點(diǎn)、rs6500634位點(diǎn)進(jìn)行基因分型。隨機(jī)選取各位點(diǎn)不同基因型個(gè)體的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行DNA測(cè)序驗(yàn)證。結(jié)果:1.SEMG1基因的rs16989820位點(diǎn)、rs2301366位點(diǎn)和SEPT12基因的rs759991位點(diǎn)、rs6500634位點(diǎn)在弱精子癥組和對(duì)照組中的基因型分布頻率符合Hardy-Weinberg平衡(P值均大于0.05),表明樣本具有良好的人群代表性;2.SEMG1基因的rs16989820位點(diǎn)和rs2301366位點(diǎn)其等位基因和基因型頻率在對(duì)照組和弱精子癥組分布差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);3.SEPT12基因rs759991位點(diǎn)在弱精子癥組和對(duì)照組間的等位基因和基因型頻率分布差異顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),攜帶T等位基因和TT基因型個(gè)體發(fā)生弱精子癥的風(fēng)險(xiǎn)增高(P=0.007,OR=1.413,95%CI:1.098-1.818;P=0.021,OR=1.891,95%CI:1.097-3.261);4.SEPT12基因rs6500634位點(diǎn)在弱精子癥組和對(duì)照組間T等位基因頻率分布差異顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,攜帶T等位基因的個(gè)體發(fā)生弱精子癥的風(fēng)險(xiǎn)降低(P=0.030,OR=0.661,95%CI:0.454-0.963);5.SEPT12基因rs759991和rs6500634位點(diǎn)的單倍型結(jié)果顯示,攜帶C-T單倍型的個(gè)體可降低弱精子癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)(P=0.006,OR=0.431,95%CI:0.233-0.798),而攜帶T-C單倍型的個(gè)體可增加弱精子癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)(P=0.002,OR=1.549,95%CI:1.180-2.033)。結(jié)論:1.SEPT12基因rs759991位點(diǎn)T等位基因和TT基因型可能是河南漢族人群弱精子癥的遺傳危險(xiǎn)因子,可增加弱精子癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn);2.SEPT12基因rs6500634位點(diǎn)T等位基因可能是河南漢族人群弱精子癥的遺傳保護(hù)因子,可降低弱精子癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn);3.SEPT12基因rs759991和rs6500634位點(diǎn)的C-T單倍型可能是弱精子癥的保護(hù)單倍型,而T-C單倍型可能是弱精子癥的風(fēng)險(xiǎn)單倍型。
[Abstract]:The first part of the SEMG1, SEPT12 gene expression analysis objective: detection of seminal vesicle gel protein 1 (SEMG1), cell splitting (SEPT12) protein 12 gene in asthenospermia (Asthenozoospermia, AZS) expression in patients and normal controls in M RNA sperm analysis SEMG1, SEPT12 gene and weak sperm correlation disease. Methods: to collect the adult male of normal control group and asthenospermia group semen samples in all 40 cases, purified sperm by Percoll density gradient separation, extraction of sperm RNA and its reverse transcription of C by real-time quantitative RT-PCR (DNA. Q RT-PCR) method, respectively in the control group and asthenospermia sperm group C DNA as template, design SEMG1, SEPT12 gene specific primer for PCR amplification, SEMG1 compared two groups of sperm, the differential expression of SEPT12 gene m RNA. Results: the target gene and reference gene were amplified by qRT-PCR, respectively by special amplified bands, SEMG1 The gene fragment of 163bp SEPT12 gene fragment of 167bp GAPDH gene fragment was 189bp. relative expression in two samples of target gene by independent samples t test were analysed. The results showed that m RNA 1.AZS group, the expression level of SEMG1 (1.98 + 0.24) was significantly higher than the control group (1.05 + 0.35), the difference was statistically significant (P0.05); m RNA 2.AZS group, the expression level of SEPT12 (0.36 + 0.14) was significantly lower than the control group (1.03 + 0.25), the difference was statistically significant (P0.05). Conclusion: 1. seminal vesicle gel protein 1 gene (SEMG1) expression in asthenospermia, may be related to with the development of AZS; 2. cell split protein 12 gene (SEPT12) significantly decreased expression in asthenospermia, may be involved in the pathogenesis of AZS. The second part of SEMG1, to study the polymorphism of SEPT12 gene: KASP (Kompetitive Allele-Specific PCR) Qualcomm The amount of SNP (Single nucleotide polymorphism) detection of SEMG1 gene rs16989820 locus, rs2301366 locus, rs759991 locus and SEPT12 gene, rs6500634 loci were detected to study the correlation between polymorphism and Henan asthenospermia at these four sites, provide theoretical basis for the diagnosis and treatment of asthenospermia. Collected 276 cases of normal adult male semen samples as control group, 276 cases of asthenospermia in patients with semen samples were selected as cases, extracting sperm genomic DNA by KASP high-throughput SNP detection technology rs16989820 locus of SEMG1 gene rs2301366 locus, rs759991 locus and SEPT12 gene, rs6500634 genotyping. Randomly selected members different genotypes of PCR were verified by DNA sequencing of PCR products. Results: the rs16989820 locus of 1.SEMG1 gene, rs2301366 gene and SEPT12 Rs759991 locus, rs6500634 genotype in asthenospermia group and control group in the frequency distribution with the Hardy-Weinberg equilibrium (P values were greater than 0.05), the results showed that the sample has a good representation of the population; the 2.SEMG1 gene rs16989820 locus and rs2301366 locus allele and genotype frequencies in different groups and asthenospermia group distribution there was no statistical significance (P0.05); 3.SEPT12 rs759991 gene significantly differences in asthenospermia group and control group between the genotype and allele frequency distribution was statistically significant (P0.05), the risk of carrying the T allele and TT genotype occurred in asthenospermia increased (P=0.007, OR=1.413,95%CI:1.098-1.818; P=0.021 OR=1.891,95%CI:1.097-3.261, 4.SEPT12); rs6500634 gene significantly differences in asthenospermia group and the control group T allele frequency distribution, with statistical significance, carrying T etc. The risk allele ontogeny of asthenospermia decreased (P=0.030, OR=0.661,95%CI:0.454-0.963); 5.SEPT12 gene rs759991 and rs6500634 loci haplotype showed that C-T haplotype individuals can reduce the risk of asthenospermia (P=0.006, OR=0.431,95%CI:, 0.233-0.798) and the T-C haplotype individuals can increase the risk of developing asthenospermia (P=0.002, OR=1.549,95%CI:1.180-2.033). Conclusion: 1.SEPT12 gene rs759991 T allele and TT genotype may be a genetic risk factor in Henan Han population asthenospermia, can increase the risk of asthenospermia; 2.SEPT12 gene rs6500634 T allele may be a genetic protective factor in Henan Han population asthenospermia, can reduce the occurrence the risk of asthenospermia; C-T haplotype of 3.SEPT12 gene rs759991 and rs6500634 loci may be weak sperm protection in single child Type, and T-C haplotype may be a risk haplotype of asthenospermia.

【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R698.2

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本文編號(hào)：1658425