本文選題：miR-377-3p　切入點(diǎn)：糖尿病腎病　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究目的糖尿病(diabetesmellitus,DM)導(dǎo)致的高死亡率在我國僅次于心血管疾病和腫瘤。而糖尿病腎病也被公認(rèn)為是導(dǎo)致糖尿病患者死亡的主要原因之一,已經(jīng)嚴(yán)重威脅人類健康。微小RNA(miRNA)通過對靶基因的表達(dá)調(diào)控參與多種生理和病理過程,如細(xì)胞的生長、凋亡及腫瘤發(fā)生發(fā)展等。已有研究表明miRNA同樣參與糖尿病腎病的病理進(jìn)程。本項(xiàng)研究的目的是篩選發(fā)現(xiàn)在糖尿病腎病中發(fā)揮明顯調(diào)控作用的miRNA,以及miRNA的作用機(jī)制,進(jìn)一步闡明miRNA與已知的糖尿病腎病相關(guān)信號(hào)通路之間的關(guān)系,以期為糖尿病腎病的診療提供新的依據(jù)。研究方法我們用miRNA芯片技術(shù)對細(xì)胞中的miRNA進(jìn)行了篩選,通過分析miRNA的表達(dá)差異,結(jié)合其生物學(xué)功能選擇miR-377-3p作為下一步的研究對象。q RT-PCR檢測了miR-377-3p在不同濃度葡萄糖處理后HK-2細(xì)胞中的表達(dá)水平,及其在30位糖尿病腎病患者和30位體檢健康者中的表達(dá)水平。同時(shí)我們構(gòu)建了小鼠糖尿病腎病模型,用于之后miR-377-3p的體內(nèi)功能研究。下一步,MTT法檢測了miR-377-3p對HK-2細(xì)胞活性的影響,流式細(xì)胞術(shù)及western blot檢測了miR-377-3p對HK-2細(xì)胞凋亡的影響。接下來的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,用Tunel和免疫組化的方法驗(yàn)證了miR-377-3p對腎小管上皮細(xì)胞增殖及凋亡的影響。為了尋找miR-377-3p下游作用的靶基因,我們用生物信息學(xué)方法進(jìn)行了預(yù)測,同時(shí)用熒光報(bào)告載體實(shí)驗(yàn)證實(shí)了miR-377-3p與預(yù)測靶基因的直接作用,定量PCR和western blot進(jìn)一步驗(yàn)證了miR-377-3p對靶基因表達(dá)的影響。最后,與miR-377-3p相同,我們用類似的方法對靶基因的功能進(jìn)行了研究。結(jié)果miRNA芯片和q RT-PCR結(jié)果均表明miR-377-3p在高糖處理的HK-2細(xì)胞中明顯高表達(dá)。而miR-377-3p在臨床糖尿病腎病患者血清中低表達(dá)。小鼠糖尿病腎病模型構(gòu)建成功,可用于后續(xù)功能研究。miR-377-3p能降低高糖誘導(dǎo)下HK-2細(xì)胞的細(xì)胞活性。miR-377-3p能通過上調(diào)促凋亡基因Bax和下調(diào)抑凋亡基因Bcl-2表達(dá),促進(jìn)高糖誘導(dǎo)下HK-2細(xì)胞的凋亡。糖尿病腎病小鼠體內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)miR-377-3p能抑制小鼠腎小管上皮細(xì)胞的增殖,并通過上調(diào)促凋亡基因和下調(diào)抑凋亡基因表達(dá),促進(jìn)糖尿病腎病小鼠的腎小管上皮細(xì)胞的凋亡。生物信息學(xué)預(yù)測出SGK3 m RNA 3’UTR含有與miR-377-3p種子序列的結(jié)合位點(diǎn),定量PCR和western blot熒光報(bào)告載體實(shí)驗(yàn)證實(shí)了兩者的靶定關(guān)系。SGK3能挽救miR-377-3p對細(xì)胞活性的抑制作用,通過下調(diào)促凋亡基因和上調(diào)抑凋亡基因表達(dá),抑制高糖誘導(dǎo)下HK-2細(xì)胞的凋亡。SGK3能促進(jìn)糖尿病腎病小鼠的腎小管上皮細(xì)胞的增殖,抑制細(xì)胞凋亡。miR-377-3p還影響PI3K/AKT信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)。結(jié)論miR-377-3p在高糖處理的HK-2細(xì)胞中高表達(dá),而在糖尿病腎病患者血清中低表達(dá)。miR-377-3p通過抑制細(xì)胞生長和促進(jìn)細(xì)胞凋亡的方式破壞腎小管上皮細(xì)胞,加速糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展。miR-377-3p靶定并負(fù)調(diào)控SGK3。SGK3通過促進(jìn)細(xì)胞增殖和抑制細(xì)胞凋亡的方式,發(fā)揮與miR-377-3p相反的作用。miR-377-3p參與PI3K/AKT信號(hào)通路介導(dǎo)的糖尿病腎病的發(fā)生。綜上所述,我們研究發(fā)現(xiàn)了miR-377-3p/SGK3這一與糖尿病腎病相關(guān)的調(diào)控通路,為臨床理解糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制提供了新思路,為其治療提供了可能的干預(yù)靶點(diǎn)。
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【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R587.2;R692.9

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;Epithelial to mesenchymal transition in the progression of tubulointerstitial fibrosis[J];Chinese Medical Journal;2007年21期

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本文編號(hào)：1651349