本文選題：放射治療　切入點(diǎn)：睪丸孤核受體4(TR4)　出處：《浙江大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景和目的： 前列腺癌是中老年男性泌尿生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一。放射治療是前列腺癌最重要的治療方法之一。對(duì)于臨床早期的局限性前列腺癌患者,放射治療是除根治性前列腺切除術(shù)以外,另一種可達(dá)到根治性效果的治療手段。但是仍有相當(dāng)一部分前列腺癌患者在接受根治性放射治療后會(huì)出現(xiàn)生化復(fù)發(fā),甚至是臨床復(fù)發(fā),從而導(dǎo)致治療失敗。因此,尋找預(yù)測(cè)前列腺癌放射治療療效的指標(biāo),或是前列腺癌放射增敏治療的靶點(diǎn),具有重要的臨床意義。 放射線對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用的本質(zhì)可以解釋為腫瘤細(xì)胞不能修復(fù)其所引起的DNA損傷；而腫瘤細(xì)胞對(duì)IR的內(nèi)在敏感性取決于其修復(fù)DNA損傷的能力。在DNA損傷修復(fù)機(jī)制相關(guān)通路中尋找可能的療效預(yù)判標(biāo)志物,或通過抑制DNA損傷修復(fù)成分來增強(qiáng)腫瘤的放射敏感性,是目前研究的方向。 睪丸孤核受體4(Testicular Orphan Nuclear Receptor4, TR4)是孤兒受體(Orphan Receptor)家族的一員。前期研究已發(fā)現(xiàn)：TR4在細(xì)胞對(duì)抗氧化應(yīng)激損傷中起重要的作用。TR4可以通過調(diào)控Cockayne綜合征B基因(Cockayne Syndrome B, CSB)的表達(dá),來調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄偶聯(lián)的核酸切除修復(fù)機(jī)制(the nucleotide excision repair pathway, NER),從而促進(jìn)紫外線照射后所導(dǎo)致的DNA損傷的修復(fù)。由此可以推測(cè),TR4可能影響到腫瘤的放射治療療效。 然而,目前對(duì)于TR4在前列腺癌放射治療方面所起的作用及相關(guān)機(jī)制的研究尚無開展。在本研究中,我們對(duì)此進(jìn)行了探索,并提出了TR4作為前列腺癌放射治療預(yù)后判斷或放療增敏靶點(diǎn)的潛在意義和臨床價(jià)值。 研究方法和結(jié)果： 1.TR4蛋白在人類前列腺癌組織中的表達(dá)及其與放射治療療效相關(guān)性的研究 我們以在浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬邵逸夫醫(yī)院接受放射治療(主要是近距離照射治療)的前列腺癌患者為研究對(duì)象,回顧性分析其臨床隨訪資料,根據(jù)其隨訪結(jié)果劃分為生化復(fù)發(fā)組和對(duì)照組。采用免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)TR4蛋白在兩組患者放射治療前的前列腺癌穿刺組織標(biāo)本中的表達(dá)情況。 研究發(fā)現(xiàn)TR4蛋白的表達(dá)水平和前列腺癌患者放射治療的療效之間存在著負(fù)相關(guān)性：出現(xiàn)生化復(fù)發(fā)者,其前列腺癌組織中TR4蛋白表達(dá)水平較高；未出現(xiàn)生化復(fù)發(fā)者,其前列腺癌組織中TR4蛋白表達(dá)水平較低。生化復(fù)發(fā)組中TR4蛋白免疫組化染色陽性結(jié)果比例為69.23%(9/13)；對(duì)照組中TR4蛋白免疫組化染色陽性結(jié)果比例為15.38%(2/13)；Fisher精確概率檢驗(yàn)證實(shí)兩組間TR4染色陽性結(jié)果比例有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.02)。提示前列腺癌組織中的TR4蛋白的表達(dá)水平可以預(yù)測(cè)患者放射治療的預(yù)后情況。 2.靶向調(diào)節(jié)TR4基因表達(dá)改變前列腺癌細(xì)胞放射敏感性的研究 我們選擇兩種不同的前列腺癌細(xì)胞系(PC-3和LNCaP),采用成熟的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)和RNA干擾技術(shù)來靶向調(diào)節(jié)這兩種前列腺癌細(xì)胞中的TR4基因表達(dá)水平,構(gòu)建了兩種具有不同TR4基因表達(dá)水平的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞克�。篢R4Overexpressed的PC-3TR4/PC-3vector和TR4Knocking-down的LNCaP shTR4/LNCaP shNC。采用多種經(jīng)典的放射生物學(xué)檢測(cè)方法(包括MTT檢測(cè)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)等),來評(píng)估具有不同TR4基因表達(dá)水平的前列腺癌細(xì)胞的放射敏感性；并通過研究DNA損傷修復(fù)動(dòng)力學(xué)初步探索了TR4基因影響前列腺癌細(xì)胞放射敏感性的可能機(jī)制。 研究發(fā)現(xiàn)前列腺癌細(xì)胞中的TR4基因表達(dá)水平差異可以影響其放射敏感性：TR4基因表達(dá)水平調(diào)高可以降低放射線造成的短期殺傷效應(yīng),TR4基因表達(dá)水平敲低可以增強(qiáng)放射線造成的短期殺傷效應(yīng)。TR4基因表達(dá)水平調(diào)高可以增強(qiáng)前列腺癌細(xì)胞的克隆形成能力,TR4Overexpressed對(duì)PC-3的放射增敏比(SER)為0.910；TR4基因表達(dá)水平敲低可以減弱前列腺癌細(xì)胞的克隆形成能力,TR4Knocking-down對(duì)LNCaP的放射增敏比(SER)為1.243�？傊�,TR4基因表達(dá)水平敲低可以增強(qiáng)其放射敏感性,TR4基因表達(dá)水平調(diào)高可以增強(qiáng)其放射抵抗性。靶向調(diào)控TR4基因表達(dá)可為前列腺癌的放療增敏提供潛在的新靶點(diǎn)。并發(fā)現(xiàn)TR4Knocking-down后,LNCaP的DSBs的再連接動(dòng)力學(xué)明顯受損,初步探明TR4基因影響前列腺癌細(xì)胞放射敏感性這一現(xiàn)象可能與TR4調(diào)控參與DNA雙鏈損傷(DSBs)修復(fù)途徑有關(guān)。 研究結(jié)論： 本研究構(gòu)建了具有穩(wěn)定表達(dá)不同TR4基因水平的前列腺癌細(xì)胞克隆。證實(shí)TR4基因表達(dá)水平的高低可以影響前列腺癌細(xì)胞的放射敏感性,前列腺癌組織中TR4蛋白的表達(dá)水平和前列腺癌患者放射治療的療效之間存在著負(fù)相關(guān)性；并初步探明TR4影響前列腺癌的放射治療可能與TR4參與調(diào)控DNA雙鏈損傷(DSBs)修復(fù)途徑、導(dǎo)致DSBs的再連接動(dòng)力學(xué)受損有關(guān)。相關(guān)結(jié)果提示我們,靶向調(diào)控TR4基因表達(dá)可為前列腺癌的放療增敏提供潛在的新靶點(diǎn),而檢測(cè)放射治療前的前列腺癌組織標(biāo)本中的TR4蛋白的表達(dá)水平可以在一定程度上預(yù)測(cè)患者的預(yù)后。
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【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R737.25

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本文編號(hào)：1649241