本文選題：前列腺癌　切入點：染色體　出處：《復旦大學》2014年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：第一部分：染色體10q11區(qū)域與中國人群前列腺癌易感性的“精細定位”研究[背景]：目前已有20多個GWAS (Genome-wide association studies,全基因組相關聯(lián)研究)在16條染色體上發(fā)現(xiàn)了70多個與前列腺癌遺傳易感性相關的SNPs (Single nucleotide polymorphisms,單核苷酸多態(tài)性),這其中包括由三項GWAS在10q11區(qū)域發(fā)現(xiàn)的rs10993994位點。由于目前大多數(shù)GWAS發(fā)現(xiàn)的易感SNPs與前列腺癌發(fā)病的真正機制尚不清楚,導致GWAS的研究成果向臨床獲益轉化時遇到諸多困難。一般而言,要研究GWAS發(fā)現(xiàn)的某一SNP在前列腺癌發(fā)生發(fā)展中的機制需要兩步,第一步是對該SNP所在區(qū)域進行“精細定位(fine mapping)"研究,目的是為了排除連鎖不平衡的干擾,找出目標區(qū)域真正影響前列腺癌發(fā)病風險的SNP；第二步是依據(jù)SNPs所在基因組的位置信息和前后背景進行功能分析。[目的]：本部分在中國人群中對染色體10q11區(qū)域進行“精細定位”研究,找出該區(qū)域中真正影響到前列腺癌發(fā)病風險的位點。[方法]：我們利用ChinaPCa (Chinese Consortium for Prostate Cancer Genetics,中國前列腺癌遺傳學協(xié)作組)從多個中心收集到的1755例前列腺癌患者和1523例健康對照個體的血液樣本進行此項研究。從HapMap II期中國人群的數(shù)據(jù)庫中,在chr10:51194000-51259000的65kb范圍內,按照r2≥0.8,最小等位基因頻率≥0.05的標準進行SNPs篩選,共選取12個SNPs位點：在dbSNPs數(shù)據(jù)庫中進行補充,通過對MSMB (Microseminoprotein beta,微精液蛋白p)基因和NCOA4 (Nuclear receptor coactivator 4,細胞核受體輔激活物4)基因(10q11區(qū)域的兩個基因)潛在功能區(qū)域的SNPs分析后,再選出3個SNPs(其中2個與上述12個重復,總共13個)。利用Sequenom基因分型技術平臺對樣本的DNA中的13個SNPs進行基因分型。最后用卡方檢驗統(tǒng)計分析各位點與前列腺癌遺傳易感性的關系。[結果]13個SNPs中有一個位點(rs4630240)在基因分型中應答失敗,其余的12個SNPs的應答率在98.3%-99.5%之間,應答反應良好。在P0.01的水平上,健康對照組所有的12個SNPs的基因型頻率都符合哈代-溫伯格平衡。12個SNPs中有3個與前列腺癌的發(fā)病風險相關(P0.05),分別是rs10993994(風險等位基因為T,P=0.012,OR=1.14)、rs10821609(風險等位基因為T,P=0.030,OR=1.15)、rs10821610(風險等位基因為G, P=0.008, OR=1.16);經(jīng)過年齡校正后仍是上述三個SNPs與前列腺癌發(fā)病風險相關(P值分別為0.011、0.028、0.009)。計算三者之間的r2值分別為：0.18 (rs10993994 vs rs10821609)、0.05 (rs10993994 vs rs10821610)和0.44 (rs10821609 vs rs10821610)。通過條件logistic回歸模型,調整去除其中一個SNP對另外兩個SNPs的影響后發(fā)現(xiàn),在P0.05的水平上,只有rs10821610在去除rs10993994的影響后仍然與前列腺癌的發(fā)病風險相關(P=O.03)。[結論]染色體10q11區(qū)域中的rs10993994、rs10821609和rs10821610與中國人群前列腺癌的發(fā)病風險相關,其中rs10821610最為顯著；rs10993994和rs10821610之間不存在連鎖不平衡,而rs10993994和rs10821609以及rs10821609和rs10821610之間存在著連鎖不平衡,但連鎖的程度較輕；這三個SNPs可能并非獨立參與到前列腺癌的發(fā)病,而是相互影響共同參與到前列腺癌的發(fā)病,相互影響的原因可能是連鎖不平衡,也可能是其他原因。第二部分 rs10993994對前列腺癌細胞MSMB基因啟動子活性的影響[背景]：染色體10q11區(qū)域的SNP:rs10993994能影響中國及歐美人群前列腺癌的發(fā)病風險,該位點位于MSMB (microseminoprotein beta,微精液蛋白β)基因的啟動子區(qū)域,而MSMB基因及其編碼表達的PSP94 (Prostatic secretary protein 94,前列腺分泌蛋白94)異常與前列腺癌的發(fā)生發(fā)展相關。[目的]：本部分將探討rs10993994對前列腺癌細胞MSMB基因啟動子活性的影響。[方法]：化學合成MSMB基因的啟動子序列(MSMB轉錄起始點上游299bp至下游36bp),根據(jù)位于序列中間的SNP rs10993994有兩種等位基因(T/C)可能,合成兩條啟動子MSMB promoter-T和MSMB promoter-Co將兩條啟動子通過酶切的方法導入熒光素酶報告基因載體(pGL3-basic vectors)中,篩選陽性克隆后,將攜帶啟動子的質粒轉染入前列腺癌細胞PC-3和LNCaP中,培養(yǎng)48小時后通過熒光檢測儀來檢測重組質粒中啟動子啟動轉錄的活性。[結果]：成功合成兩條啟動子MSMB promoter-T和MSMB promoter-C,并分別將其與熒光素酶報告基因載體重組,形成重組質粒pGL3-MSMB promoter-T和pGL3-MSMB promoter-C。在前列腺癌細胞PC-3中,重組質粒MSMB promoter-C組的相對熒光度為2.27±0.39,顯著高于重組質粒MSMB promoter-T組(0.57±0.13)(P0.05)；在前列腺癌細胞LNCaP中,重組質粒MSMB promoter-C組的相對熒光度為1.70±0.32,顯著高于重組質粒MSMB promoter-T組(0.37±0.09)(P0.05)。[結論]：在前列腺細胞中重組質粒pGL3-MSMB promoter-C的轉錄活性要強于重組質粒pGL3-MSMB promoter-T的轉錄活性。Rs10993994可以影響到MSMB啟動子啟動轉錄的活性,rs10993994位點上的等位基因胞嘧啶(C)較胸腺嘧啶(T)更能促使MSMB基因轉錄。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：復旦大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R737.25

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本文編號：1640387