本文選題：乙醛脫氫酶2　切入點(diǎn)：慢性腎臟疾病　出處：《山東大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：前言心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)是目前全球公認(rèn)的威脅人類健康最主要的疾病,并且因其持續(xù)上升的發(fā)病率和死亡率,已經(jīng)成為困擾人們健康亟待解決的問題[1]。尤其對于慢性腎臟疾病(chronic kidney disease,CKD)患者,CVD已經(jīng)成為其最重要的并發(fā)癥和首位致死原因[2]。由CKD繼發(fā)的心血管并發(fā)癥是心腎綜合癥(cardiorenal syndrome,CRS)的一種,即Ⅳ型CRS—慢性腎心綜合癥[3]。臨床定義為CKD患者因長期腎功能減退,進(jìn)而引起左室肥厚、心律失常等病理改變,并最終導(dǎo)致患者心力衰竭死亡[4,5]。其中左室肥厚是CKD患者最顯著、最常見的心肌病理學(xué)改變,而心力衰竭則成為患者終末期最主要的死亡原因。傳統(tǒng)研究認(rèn)為貧血、炎癥、高血壓、血脂異常及容量負(fù)荷增加是引起CKD患者心功能減退的重要誘因[2,6],但近期越來越多的研究更關(guān)注CKD患者特殊的內(nèi)環(huán)境改變,其中氧化應(yīng)激更是成為導(dǎo)致CVD發(fā)生發(fā)展的重要原因[7]。乙醛脫氫酶2(aldehyde dehydrogenase 2,ALDH2)是位于線粒體內(nèi)參與乙醇代謝的重要酶類,也是參與線粒體內(nèi)氧化代謝的重要分子[8]。ALDH2作為重要的內(nèi)源性心肌保護(hù)因子,不僅可以代謝乙醇,更可通過降解4-羥基壬烯醛(4-hydroxy-2-nonenal,4-HNE)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)等毒性醛類物質(zhì)發(fā)揮其抗氧化應(yīng)激作用[9,10]。此外,ALDH2還可通過調(diào)控ASK-1、Akt等酶的磷酸化積極參與在酒精性心肌肥厚及壓力負(fù)荷引起的早期代償性心肌肥厚過程中。因此我們設(shè)想:CKD患者因持續(xù)高氧化應(yīng)激狀態(tài)引起CVD,那么ALDH2作為細(xì)胞內(nèi)拮抗氧化應(yīng)激的重要酶類是否參與其中?若有其具體機(jī)制如何?為探討我們的假設(shè),我們分別對野生型小鼠(wild-type,WT)及ALDH2敲除(ALDH2 gene knockout,ALDH2-/-)小鼠行5/6腎切除模擬慢性慢性腎臟疾病,12周后行心臟超聲檢查觀察心功能差異(第一部分);并通過病理學(xué)染色及Western blot等技術(shù)進(jìn)一步從分子水平探究其具體機(jī)制(第二部分)。第一部分乙醛脫氫酶2對慢性腎臟疾病引起的心功能不全的影響目的探究ALDH2缺失對慢性腎臟疾病引起的心功能不全的影響。方法分別對WT小鼠及ALDH2-/-小鼠行5/6腎切除手術(shù)(5/6NX)模擬慢性腎臟疾病(n=12),并分別設(shè)立假手術(shù)組(SHAM)作為對照(n=8)。術(shù)后12周行小動物心臟超聲系統(tǒng)檢測小鼠心功能及心臟結(jié)構(gòu),腎臟蘇木精-伊紅(hematoxylin and esosin,HE)染色及天狼猩紅染色檢測腎臟結(jié)構(gòu)改變,心臟HE染色及天狼猩紅染色檢測心臟橫截面積和心肌膠原含量。結(jié)果與野生型小鼠對照組(WT+SHAM)相比,野生型小鼠5/6NX術(shù)后(WT+CKD)12 周左室收縮期末內(nèi)徑(left ventricular end-systolic diameter,LVEDD)、左室舒張期末內(nèi)徑(left ventricular end-diastolic diameter,LVESD)顯著降低(P0.05),左室舒張末期左室前壁厚度(left ventricular diastolic anterior wall,LVAW,d)及心重體重比(heart weight/body weight,HW/BW)等明顯增加(P0.05)。與 WT+CKD 組相比,ALDH2 敲除小鼠手術(shù)(ALDH2-/-+CKD)組心臟左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)及左室內(nèi)經(jīng)縮短率(LVFS)顯著降低(P0.05),且伴隨肺濕重體重比值顯著升高(P0.05)。腎臟HE染色及天狼猩紅染色提示腎臟結(jié)構(gòu)損傷明顯。心肌HE染色結(jié)果顯示W(wǎng)T+CKD組心肌細(xì)胞橫截面積明顯高于其他三組(P0.05)。天狼猩紅染色結(jié)果顯示,心肌膠原含量在WT+CKD組及ALDH2-/-+CKD組均明顯增加。結(jié)論ALDH2是參與慢性腎臟疾病早期的代償性左室肥厚過程的關(guān)鍵分子,其缺失可加劇慢性腎臟疾病引起的心功能不全。第二部分 乙醛脫氧酶2通過下調(diào)UCP2及Nrf2/ARE引起ROS介導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡影響慢性腎臟疾病引起的心功能不全目的探究ALDH2缺失在加劇慢性腎臟疾病引起的心功能不全過程中的具體機(jī)制。方法通過DHE染色分析四組小鼠心肌氧化應(yīng)激ROS生成情況,通過TUNEL染色分析四組小鼠心肌凋亡情況。利用RIPA裂解心肌組織提取小鼠心肌總蛋白,采用Western Blotting免疫印跡檢測心肌組織中解偶聯(lián)蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2)、核因子相關(guān)因子 2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、超氧化物歧化酶2(superoxide dismutase 2,SOD2)及血紅素氧合酶1(heme oxygenase 1,HO-1)等相關(guān)蛋白的表達(dá)差異。結(jié)果ALDH2-/-小鼠術(shù)后ROS產(chǎn)生及心肌細(xì)胞凋亡明顯高于WT型小鼠手術(shù)組(P0.05),并且 Western blot 結(jié)果示 ALDH2-/-手術(shù)組的 UCP2、Nrf2、SOD2及HO-1等相關(guān)蛋白表達(dá)均低于WT型小鼠手術(shù)組(P0.05)。結(jié)論ALDH2缺失通過下調(diào)UCP2及核因子相關(guān)因子2/抗氧化反應(yīng)元件(Nrf2/ARE)引起ROS介導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡,并最終引起ALDH2-/-小鼠心功能顯著下降。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R692;R54

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