本文選題：前列腺腫瘤　切入點(diǎn)：胰島素　出處：《山東大學(xué)》2014年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：目的： 建立雄激素非依賴前列腺癌細(xì)胞系,觀察胰島素對(duì)三種前列腺癌細(xì)胞系LNCaP-AI、PC-3)增殖、活力、遷移與侵襲能力的影響,并探討其可能機(jī)制。 方法： 本研究分為兩部分。(1)去雄激素環(huán)境下連續(xù)培養(yǎng)前列腺癌LNCaP細(xì)胞,建立雄激素非依賴前列腺癌細(xì)胞系LNCaP-AI;(2)胰島素分別刺激LNCaP、 LNCaP-AI、PC-3三種細(xì)胞,采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-Time PCR)、蛋白免疫印跡(Western Blotting)、免疫細(xì)胞化學(xué)(immunocytochemistry, ICC)法檢測(cè)胰島素受體表達(dá)變化；細(xì)胞計(jì)數(shù)法、四唑鹽法(MTT)、細(xì)胞劃痕試驗(yàn)、細(xì)胞侵襲試驗(yàn)驗(yàn)(Transwell)分別檢測(cè)細(xì)胞接受刺激前后增殖、活力、遷移和侵襲能力的變化；Western Blotting檢測(cè)細(xì)胞接受刺激前后Ras、ERK1/2、MEK1/2蛋白的表達(dá)變化以觀察MAPK信號(hào)通路的活性變化。 結(jié)果： (1)6個(gè)月后成功建立LNCaP-AI細(xì)胞系。該細(xì)胞可在去雄環(huán)境下正常成長(zhǎng)、傳代、凍存及復(fù)蘇,與LNCaP相比,細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變,雄激素受體表達(dá)升高,胰島素受體表達(dá)無(wú)明顯變化；(2)胰島素刺激可使三種細(xì)胞的胰島素受體在mRNA及蛋白水平表達(dá)均增加；胰島素對(duì)LNCaP細(xì)胞的增殖、活力、遷移及侵襲均有所抑制,對(duì)PC-3細(xì)胞有明顯促進(jìn)作用,而LNCaP-AI細(xì)胞在胰島素刺激前后增殖、活力、遷移及侵襲均無(wú)明顯變化；胰島素可降低LNCaP細(xì)胞Ras的表達(dá)及ERK、MEK的磷酸化水平,促進(jìn)PC-3細(xì)胞Ras的表達(dá)及ERK、MEK的磷酸化水平,而對(duì)LNCaP-AI細(xì)胞無(wú)明顯作用。 結(jié)論： 胰島素可通過(guò)胰島素受體影響Ras-MEK-ERK信號(hào)通路的活化從而抑制LNCaP細(xì)胞的增殖、活力、遷移及侵襲,促進(jìn)PC-3細(xì)胞的增殖、活力、遷移及侵襲,但對(duì)LNCaP-AI細(xì)胞無(wú)明顯作用。
[Abstract]:Objective:. The androgen independent prostate cancer cell line was established to observe the effects of insulin on the proliferation, activity, migration and invasion of three prostate cancer cell lines LNCaP-AIPC-3, and to explore its possible mechanism. Methods:. The present study was divided into two parts: 1) LNCaP cells of prostate cancer were cultured continuously in androgen free environment, androgen independent prostate cancer cell line LNCaP-AIP-2) was induced by insulin, and three kinds of cells, LNCaP, LNCaP-AIPC-3, were induced by insulin, respectively. The expression of insulin receptor was detected by real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction Real-Time PCR, Western blotting, immunocytochemistryassay (ICCC), cell counting, tetrazolium salt method and cell scratch test. Cell invasion assay was used to detect the changes of cell proliferation, activity, migration and invasion ability before and after stimulation. Western Blotting was used to detect the expression of Raser ERK1 / 2 MEK1 / 2 protein before and after stimulation to observe the activity of MAPK signaling pathway. Results:. After 6 months, LNCaP-AI cell line was successfully established. The cell line could grow, subculture, cryopreservation and resuscitation in deandrogenic environment. Compared with LNCaP, the cell morphology was changed, androgen receptor expression was increased. Insulin receptor expression did not change significantly. Insulin stimulation increased the expression of insulin receptor at the level of mRNA and protein, and insulin inhibited the proliferation, activity, migration and invasion of LNCaP cells. LNCaP-AI cells showed no significant changes in proliferation, activity, migration and invasion before and after insulin stimulation, and insulin could decrease the expression of Ras and phosphorylation of ERK in LNCaP cells. Promote the expression of Ras and phosphorylation of ERK in PC-3 cells, but have no effect on LNCaP-AI cells. Conclusion:. Insulin can inhibit the proliferation, activity, migration and invasion of LNCaP cells by affecting the activation of Ras-MEK-ERK signaling pathway, and promote the proliferation, activity, migration and invasion of PC-3 cells, but it has no obvious effect on LNCaP-AI cells.
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R737.25

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本文編號(hào)：1605112