發(fā)布時(shí)間：2018-03-09 18:52

  本文選題：STAT3　切入點(diǎn)：TICs　出處：《華中科技大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究目的：盡管目前有許多前列腺癌相關(guān)的研究,但和前列腺癌進(jìn)展相關(guān)的基因改變和生物學(xué)通路改變?nèi)圆幻髁�。我們研究的主要目的是探索STAT3信號(hào)通路對(duì)前列腺癌腫瘤細(xì)胞以及腫瘤起源細(xì)胞的影響。研究方法：收集2012年5月至2014年1月間進(jìn)行手術(shù)治療的14例前列腺癌腫瘤組織及配對(duì)癌旁組織。應(yīng)用Western blotting和酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)檢測(cè)基因的蛋白表達(dá)水平；用STAT3小分子抑制劑Stattic作用于PC3M-1E8細(xì)胞,應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期；應(yīng)用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)和免疫熒光激光掃描共聚焦顯微鏡檢測(cè)pSTAT3在細(xì)胞核內(nèi)的分布;軟瓊脂糖凝膠克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞體外增殖;ALDEFLUOR assay檢測(cè)列腺癌細(xì)胞系PC3M-1E8及臨床樣本中ALDH酶活性；應(yīng)用流式細(xì)胞儀分選ALDH高表達(dá)(ALDHhigh)細(xì)胞亞群；流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡。構(gòu)建沉默STAT3表達(dá)的shRNA慢病毒載體并轉(zhuǎn)染PC3M-1E8細(xì)胞。裸鼠皮下成瘤檢測(cè)細(xì)胞成瘤能力：用細(xì)胞異種移植模型(cell-line xenograft)和人源性腫瘤異種移植模型(patient-derived tumor xenograft,PDTX)檢測(cè)腫瘤增殖能力。研究結(jié)果：低劑量Stattic能誘導(dǎo)PC3M-1E8細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞周期的S期阻滯;相對(duì)高劑量Stattic能造成細(xì)胞大量凋亡。前列腺癌腫瘤組織及細(xì)胞系PC3M-1E8中均存在ALDHhigh細(xì)胞亞群,ALDHhigh細(xì)胞群中pSTAT3表達(dá)量高于non-ALDHhigh細(xì)胞群。Stattic能封閉ALDHhigh細(xì)胞亞群中STAT3活化并殺傷ALDHhigh細(xì)胞亞群。IL-6能介導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞系和前列腺癌原代細(xì)胞中的non-TICs向TICs轉(zhuǎn)化。封閉STAT3活化能抑制IL-6介導(dǎo)的TICs轉(zhuǎn)化現(xiàn)象。敲減STAT3表達(dá)或者封閉STAT3活化抑制前列腺癌的腫瘤生長(zhǎng)。在前列腺癌細(xì)胞異種移植模型和患者來源的腫瘤異種移植模型中,封閉STAT3信號(hào)通路活化能同時(shí)顯著殺傷前列腺癌腫瘤起源細(xì)胞和體腫瘤細(xì)胞。研究結(jié)論：封閉STAT3信號(hào)活化能同時(shí)靶向并殺傷前列腺癌中已分化的腫瘤細(xì)胞和腫瘤起源細(xì)胞。因此,封閉STAT3信號(hào)活化是潛在的前列腺癌治療靶點(diǎn)。
[Abstract]:Objective: although there are a lot of prostate cancer related studies, However, the genetic changes and biological pathway changes associated with the progression of prostate cancer are still unclear. The main purpose of our study is to explore the effects of STAT3 signaling pathway on prostate cancer tumor cells and tumor-derived cells. From May 2012 to January 2014, 14 cases of prostate cancer tumor tissues and matched adjacent tissues were collected. Western blotting and enzyme linked immunosorbent assay (Elisa) were used to detect the protein expression level of prostatic carcinoma. The apoptosis and cell cycle of PC3M-1E8 cells were detected by flow cytometry with Stattic, a small molecule inhibitor of STAT3, and the distribution of pSTAT3 in the nucleus was detected by cell immunofluorescence and immunofluorescence laser scanning confocal microscopy. Soft agarose gel clone forming assay was used to detect the proliferation of tumor cells in vitro and the activity of ALDH enzyme in PC3M-1E8 and clinical samples, and the subsets of high expression ALDH cells were separated by flow cytometry. Flow cytometry was used to detect apoptosis. ShRNA lentivirus vector which silenced STAT3 expression was constructed and transfected into PC3M-1E8 cells. In nude mice, the ability of subcutaneous tumorigenesis was detected by cell line xenograftg) and human tumor xenograftmodel. Results: low dose Stattic could induce S-phase arrest of PC3M-1E8 cell cycle. The relative high dose of Stattic can induce a large number of apoptosis. The expression of pSTAT3 in ALDHhigh cell subgroup is higher than that in non-ALDHhigh cell group. Stattic can block STAT3 activation in ALDHhigh cell subgroup and kill ALDHhigh in prostate cancer tumor tissue and cell line PC3M-1E8. Cell subsets. IL-6 can mediate the transformation of non-TICs from prostate cancer cell line and primary prostate cancer cell line to TICs. Blocking STAT3 activation can inhibit TICs transformation induced by IL-6. Knock down STAT3 expression or block STAT3 activation to inhibit prostate cancer swelling. Tumor growth. In xenotransplantation models of prostate cancer cells and tumor-derived xenografts from patients, Blocking the activation energy of STAT3 signaling pathway can significantly kill both tumor and body tumor cells in prostate cancer. Conclusion: blocking STAT3 signal activation energy simultaneously targets and kills differentiated tumor cells and tumor derived cells in prostate cancer. Blocking STAT3 signal activation is a potential target for prostate cancer therapy.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.25

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7 王s，

本文編號(hào)：1589803