發(fā)布時(shí)間：2018-03-07 19:29

  本文選題：哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白　切入點(diǎn)：對(duì)比劑急性腎損傷　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的本研究旨在探討碘普羅胺(優(yōu)維顯)對(duì)哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(Mammalian target of rapamycin,mTOR)信號(hào)通路的影響以及雷帕霉素(Rapamycin,RAP)和溶血磷脂酸(Lysophosphatidic acid,LPA)能否通過(guò)此信號(hào)通路調(diào)節(jié)碘普羅胺造成的細(xì)胞凋亡,進(jìn)而為臨床治療對(duì)比劑急性腎損傷(Contrast induced acute kidney injury,CIAKI)提供新思路,為相關(guān)信號(hào)通路靶點(diǎn)藥物的研發(fā)提供理論基礎(chǔ)。方法1.將人源腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)分為六組,即正常對(duì)照組(C組)、碘普羅胺對(duì)照組(M組)、雷帕霉素高劑量組(R1組)、雷帕霉素低劑量組(R2組)、溶血磷脂酸高劑量組(L1組)和溶血磷脂酸低劑量組(L2組)。C組加入無(wú)血清的細(xì)胞培養(yǎng)液;M組加入含碘普羅胺的無(wú)血清培養(yǎng)液;R1組加入含碘普羅胺的無(wú)血清培養(yǎng)液和高劑量的雷帕霉素;R2組加入含碘普羅胺的無(wú)血清培養(yǎng)液和低劑量的雷帕霉素;L1組加入含碘普羅胺的無(wú)血清培養(yǎng)液和高劑量的溶血磷脂酸;L2組加入含碘普羅胺的無(wú)血清培養(yǎng)液和低劑量的溶血磷脂酸。應(yīng)用Western blotting法測(cè)定碘普羅胺對(duì)mTOR下游信號(hào)通路相關(guān)蛋白及磷酸化蛋白表達(dá)的影響;在碘普羅胺刺激的基礎(chǔ)上,應(yīng)用不同濃度的雷帕霉素和溶血磷脂酸分別作用24h和48h,測(cè)定這兩種藥物對(duì)mTOR下游信號(hào)通路相關(guān)蛋白及磷酸化蛋白表達(dá)的影響。2.將人源腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)分為四組,即正常對(duì)照組(C組)、碘普羅胺對(duì)照組(M組)、雷帕霉素組(R組)和溶血磷脂酸組(L組)。C組加入無(wú)血清的細(xì)胞培養(yǎng)液;M組加入含碘普羅胺的無(wú)血清培養(yǎng)液;R組加入含碘普羅胺的無(wú)血清的細(xì)胞培養(yǎng)液和雷帕霉素;L組加入含碘普羅胺的無(wú)血清的細(xì)胞培養(yǎng)液和溶血磷脂酸。用流式細(xì)胞儀測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)的碘普羅胺對(duì)HK-2細(xì)胞凋亡的影響以及雷帕霉素和溶血磷脂酸對(duì)碘普羅胺誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的干預(yù)作用。結(jié)果應(yīng)用Western blotting法檢測(cè)結(jié)果顯示,各組的24h Total-mTOR含量表達(dá)無(wú)明顯改變(P0.05),但是碘普羅胺組的p-mTOR、Total-P70S6K、p-P70S6K、Total-4EBP1、p-4EBP1含量表達(dá)比正常對(duì)照組低(P0.05);雷帕霉素組的p-mTOR、Total-P70S6K、p-P70S6K、Total-4EBP1、p-4EBP1含量表達(dá)比碘普羅胺組少(P0.05),但雷帕霉素高低劑量組間各蛋白含量表達(dá)無(wú)明顯差異(P0.05);溶血磷脂酸組的p-mTOR、Total-P70S6K、p-P70S6K、Total-4EBP1、p-4EBP1含量表達(dá)比碘普羅胺組多(P0.05),但溶血磷脂酸高低劑量組間各蛋白含量表達(dá)無(wú)明顯差異(P0.05)。各蛋白及磷酸化蛋白在48h的表達(dá)趨勢(shì)和24h的變化趨勢(shì)大致相同,且碘普羅胺組和雷帕霉素組的p-mTOR、Total-P70S6K、p-P70S6K、Total-4EBP1、p-4EBP1含量表達(dá)呈時(shí)間依賴性減少(P0.05),而溶血磷脂酸組的p-mTOR、Total-P70S6K、p-P70S6K、Total-4EBP1、p-4EBP1含量表達(dá)呈時(shí)間依賴性增多(P0.05)。應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示,碘普羅胺組比正常細(xì)胞組的細(xì)胞凋亡率明顯升高(P0.05),且碘普羅胺組48h的細(xì)胞凋亡率比24h的細(xì)胞凋亡率高(P0.05)。雷帕霉素組和溶血磷脂酸組的細(xì)胞凋亡率均比碘普羅胺組的細(xì)胞凋亡率低(P0.05);R組24h的細(xì)胞凋亡率高于L組24h的細(xì)胞凋亡率(P0.05),R組48h的細(xì)胞凋亡率低于L組48h的細(xì)胞凋亡率(P0.05);雷帕霉素組48h的細(xì)胞凋亡率低于24h的細(xì)胞凋亡率(P0.05);溶血磷脂酸組48h的細(xì)胞凋亡率較24h的細(xì)胞凋亡率無(wú)統(tǒng)計(jì)差異(P0.05)。結(jié)論1.mTOR信號(hào)通路參與了碘普羅胺誘導(dǎo)的人源腎小管上皮細(xì)胞的凋亡。2.碘普羅胺下調(diào)細(xì)胞內(nèi)的mTOR信號(hào)通路相關(guān)蛋白mTOR、P70S6K以及4EBP1的磷酸化活化水平,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。3.溶血磷脂酸通過(guò)激活mTOR信號(hào)通路,減輕了碘普羅胺對(duì)細(xì)胞內(nèi)mTOR信號(hào)通路的磷酸化抑制作用,進(jìn)而改善了碘普羅胺誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。4.雷帕霉素可以抑制mTOR信號(hào)通路相關(guān)蛋白的活化表達(dá),可能由于藥物本身的“多效性”,亦可在一定程度上減輕對(duì)比劑造成的細(xì)胞凋亡。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R692.5

【參考文獻(xiàn)】

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1 焦占全;陳軍;劉艷紅;李廣平;;碘造影劑誘導(dǎo)糖尿病大鼠腎細(xì)胞凋亡涉及Akt/mTOR信號(hào)途徑探討[J];中國(guó)心血管雜志;2015年03期

2 簡(jiǎn)永紅;楊定平;賈汝漢;丁國(guó)華;朱吉莉;顏奇;楊倩;汪雄攀;;自噬在造影劑誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞損傷中的作用[J];中華腎臟病雜志;2014年11期

3 陳韻岱;陳紀(jì)言;傅國(guó)勝;杜志民;方全;崔連群;李浪;黎輝;王建安;王海昌;萬(wàn)征;徐亞偉;霍勇;葛均波;;碘對(duì)比劑血管造影應(yīng)用相關(guān)不良反應(yīng)中國(guó)專家共識(shí)[J];中國(guó)介入心臟病學(xué)雜志;2014年06期

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本文編號(hào)：1580672