發(fā)布時(shí)間：2018-03-07 01:25

  本文選題：PRPS2　切入點(diǎn)：男性不育　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景不孕不育是一種危脅人類生殖健康的疾病,也是困擾著全世界的醫(yī)學(xué)難題。據(jù)報(bào)道,全世界約10%-15%的夫妻患有不孕不育,其中男性因素約占30%-55%。男性不育是指夫婦同居1年以上,在未采取任何避孕措施的條件下,由于男方因素導(dǎo)致女方的不孕。目前研究表明男性不育發(fā)生的原因較多且復(fù)雜,但其最終引起精子質(zhì)量的下降及無精子癥才是男性不育發(fā)生的主要原因。無精子癥可以分為梗阻性及非梗阻性無精子癥。其中,非梗阻性無精子癥約占60%,而梗阻性無精子癥約占男性不育的40%。梗阻性無子精癥是指睪丸本身的生精功能正常,由于輸精管道發(fā)生梗阻,導(dǎo)致精液檢查查不到精子。非梗阻性無精子癥是指由于直接或間接因素作用于睪丸組織,使得精子發(fā)生受阻,不能產(chǎn)生成熟的精子,精液檢查中查不到精子。盡管,隨著生殖醫(yī)學(xué)的發(fā)展,梗阻性無精子癥患者通過睪丸取精及卵泡漿內(nèi)單精子注射進(jìn)行受精,70%以上患者均能成功受精。但非梗阻性無精子癥患者睪丸取精成功率較低,僅30%左右患者能通過卵泡漿內(nèi)單精子注射成功受精。為此,非梗阻性無精子癥仍是困擾生殖醫(yī)學(xué)發(fā)展的難題。近年來分子遺傳生物學(xué)已成為各個學(xué)科領(lǐng)域研究的熱點(diǎn),遺傳因素也已被證實(shí)是導(dǎo)致男性不育的重要原因之一。據(jù)報(bào)道,大約有15%的男性不育是由于遺傳因素引起,包括染色體異常和單基因突變,其中,染色體異常占2%-8%,平均5%。染色體異常主要為Y染色體基因的微缺失,近年來研究發(fā)現(xiàn)X常染色體易位、基因的突變及缺失也是導(dǎo)致男性不育的重要因素,其表達(dá)的缺失與精子的發(fā)生障礙密切相關(guān)。盡管目前已報(bào)道2300個基因參與正常的精子發(fā)生過程,但是明確與男性不育發(fā)生相關(guān)的單個基因并不多見。因此,男性不育的遺傳學(xué)研究前景廣闊,研究男性不育相關(guān)的新型基因具有重要的意義。磷酸核糖焦磷酸合成酶2(PRPS2)為PRPP的家族成員之一,PRPP家族還包括PRPS1和PRPS3, PRPS2位于X染色體的p22.3-p22.2區(qū)域鋅指蛋白(ZFX)遠(yuǎn)端,特異地高表達(dá)于人、小鼠及大鼠的睪丸組織,與X染色體的失活相關(guān),參與調(diào)控嘌呤及嘧啶核苷代謝。目前,關(guān)于PRPS2的研究并不多見,PRPS2被認(rèn)為是C-MYC的靶基因,其參與的核苷酸代謝有助于黑色素瘤細(xì)胞的增殖。同時(shí),C-MYC已被證實(shí)與生精細(xì)胞的凋亡相關(guān),影響精子的發(fā)生過程。我們課題組在前期研究中發(fā)現(xiàn)PRPS2在唯支持細(xì)胞綜合征患者睪丸組織中的表達(dá)明顯高于生精功能正常的睪丸組織,其表達(dá)影響支持細(xì)胞的凋亡。因此,這些研究結(jié)果均提示PRPS2與男性不育相關(guān)。然而,PRPS2是否參與正常的精子發(fā)生過程,其表達(dá)對生精細(xì)胞具有什么樣的生物學(xué)功能,其發(fā)揮作用的分子機(jī)制是什么,目前尚不清楚。為此,我們開展了本研究。目的1.探討PRPS2表達(dá)與人睪丸組織學(xué)類型的關(guān)系及其意義。2.探討PRPS2表達(dá)對生精細(xì)胞生物學(xué)功能的影響。3.探討PRPS2表達(dá)對睪丸精子發(fā)生過程的影響。4.探討PRPS2參與精子發(fā)生過程的機(jī)制。方法1.免疫組化檢測PRPS2表達(dá)與睪丸生精功能的關(guān)系：收集了163例穿刺活檢的睪丸組織標(biāo)本,病理診斷包括生精功能正常60例,生精功能不良103例。生精功能不良包括：輕度生精功能不良14例,中度生精功能不良33例,重度生精功能不良56例。采用免疫組化檢測PRPS2在不同組織學(xué)類型睪丸組織中的表達(dá),以半定量方法分析其表達(dá)與睪丸生精功能的關(guān)系。2. qRT-PCR檢測PRPS2表達(dá)與睪丸生精功能的關(guān)系：收集了生精功能正常、輕度生精功能不良、中度生精功能不良及重度生精功能不良新鮮睪丸組織標(biāo)本各3例,經(jīng)組織研磨提取RNA,采用qRT-PCR定量檢測PRPS2mRNA表達(dá)水平,探討其表達(dá)與睪丸生精功能的關(guān)系。3.構(gòu)建PRPS2敲低及過表達(dá)的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株：首先通過瞬時(shí)轉(zhuǎn)染篩選PRPS2敲低效果最佳的干擾片段,然后包裝成慢病毒載體。同時(shí),合成外源性PRPS2過表達(dá)載體并包裝成慢病毒載體。分別將PRPS2敲低及過表達(dá)的慢病毒載體感染小鼠精原細(xì)胞GC1及小鼠精母細(xì)胞GC2,以空載包裝的慢病毒載體作為對照組。通過熒光強(qiáng)度判定轉(zhuǎn)染效率,并行基因序列檢測、qRT-PCR及Western blot實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。4.體外實(shí)驗(yàn)探討PRPS2敲低及過表達(dá)對生精細(xì)胞增殖及凋亡的影響：PRPS2敲低及過表達(dá)的穩(wěn)轉(zhuǎn)生精細(xì)胞GC1及GC2成功構(gòu)建后,通過流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的凋亡及細(xì)胞周期。同時(shí),采用MTT實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的增殖,并采用免疫組化檢測增殖指標(biāo)Ki-67的表達(dá),綜合評定PRPS2敲低及過表達(dá)對生精細(xì)胞增殖的影響。5.構(gòu)建生精功能不良的動物模型,探討PRPS2表達(dá)與睪丸生精功能的關(guān)系：通過白消安單劑量腹腔注射法構(gòu)建生精功能不良的小鼠動物模型,注射后2周,取小鼠睪丸及附睪組織。行HE染色,觀察睪丸及附睪的形態(tài)學(xué)改變,評估睪丸的生精功能。隨后通過qRT-PCR、Western blot及免疫組化檢測PRPS2在正常對照組及生精功能不良組睪丸組織中的表達(dá)情況。6. PRPS2敲低對小鼠睪丸生精功能的影響：首先通過qRT-PCR及Western blot定量檢測內(nèi)源性PRPS2在不同周齡小鼠睪丸組織中的表達(dá),評估PRPS2是否參與正常的精子發(fā)生及睪丸的發(fā)育過程。隨后,構(gòu)建針對小鼠來源的PRPS2敲低慢病毒載體,行小鼠睪丸活體內(nèi)注射,對照組注射相同劑量的空載慢病毒或不行任何處理。注射后一周取小鼠睪丸組織,通過HE染色,觀察不同處理后睪丸的形態(tài)學(xué)改變,評估睪丸的生精功能。同時(shí),通過qRT-PCR及Western blot定量檢測經(jīng)處理后睪丸組織中PRPS2的表達(dá)情況。7.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)探討PRPS2敲低對生精細(xì)胞增殖及凋亡的影響：收集PRPS2敲低慢病毒載體處理過的小鼠睪丸組織及對照組小鼠睪丸組織,通過TUNEL實(shí)驗(yàn)檢測睪丸組織中生精細(xì)胞的原位凋亡情況,并檢測凋亡相關(guān)蛋白Caspase 3、Caspase6及Caspase 9的表達(dá)情況,綜合評估PRPS2敲低對生精細(xì)胞凋亡的影響。通過檢測增殖指標(biāo)Ki-67的表達(dá),進(jìn)一步評估PRPS2敲低對生精細(xì)胞增殖的影響。8.基因芯片初篩PRPS2調(diào)控相關(guān)的靶基因及相關(guān)信號通路：成功構(gòu)建PRPS2敲低及過表達(dá)的GC1細(xì)胞株后,通過小鼠基因組芯片篩選獲得PRPS2敲低及過表達(dá)后發(fā)生明顯差異表達(dá)的基因組,通過GO分析、聚類分析及Pathway分析篩選PRPS2調(diào)控相關(guān)的下游分子、潛在靶基因及相關(guān)信號通路。9. PRPS2與其下游調(diào)控靶基因的篩選及鑒定：通過對基因芯片結(jié)果的分析可獲得PRPS2調(diào)控的下游潛在靶基因,隨后通過qRT-PCR進(jìn)行驗(yàn)證。經(jīng)雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證PRPS2與下游潛在靶基因是否在轉(zhuǎn)錄水平具有直接調(diào)控關(guān)系,通過Western blot檢測二者的表達(dá)情況、免疫熒光檢測二者表達(dá)的定位情況。10.篩選并驗(yàn)證PRPS2調(diào)控下游靶基因參與精子發(fā)生的信號通路：通過對基因芯片結(jié)果的分析可獲得PRPS2敲低及過表達(dá)激活的下游信號通路,依據(jù)PRPS2的生物學(xué)功能篩選最佳的信號通路,并采用Western blot進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果1. PRPS2表達(dá)與人睪丸組織學(xué)類型的關(guān)系及其意義免疫組化結(jié)果顯示PRPS2陽性表達(dá)主要定位于精原細(xì)胞、精母細(xì)胞、支持細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì),而在精子細(xì)胞及成熟精子中未見明顯陽性表達(dá)。其中,PRPS2陽性表達(dá)主要見于生精功能正常及輕度生精功能不良的睪丸組織,而在中度及重度生精功能不良睪丸組織中的陽性表達(dá)較少,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示PRPS2在生精功能正常及生精功能不良睪丸組織中的陽性表達(dá)率分別為68.3%(41/60),35%(36/103),二者差異明顯,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)PRPS2在輕度、中度及重度生精功能不良睪丸組織中的陽性表達(dá)率分別為：50%(7/14)、48.5%(16/33)、23.2%(13/56),組內(nèi)比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.02)。采用qRT-PCR定量檢測了PRPS2mRNA在生精功能正常、輕度生精功能不良、中度生精功能不良及重度生精功能不良新鮮睪丸組織標(biāo)本中的表達(dá)。結(jié)果顯示：PRPS2在生精功能正常及輕度生精功能不良睪丸組織中的表達(dá)均明顯高于其在中度生精功能不良及重度生精功能不良睪丸組織中的表達(dá),差異具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。然而,PRPS2在生精功能正常睪丸組織中的表達(dá)與輕度生精功能不良睪丸組織中的表達(dá)無明顯差異(P0.05)。2. PRPS2表達(dá)對生精細(xì)胞生物學(xué)功能的影響首先,我們通過siRNA干擾片段,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染了小鼠精原細(xì)胞株GG1及小鼠精母細(xì)胞株GC2,篩選出PRPS2敲低效果最佳的干擾片段構(gòu)建了慢病毒載體。隨后,我們克隆了外源性PRPS2質(zhì)粒,構(gòu)建了PRPS2過表達(dá)的慢病毒載體。以空載序列構(gòu)建的慢病毒載體作為對照,我們分別通過基因序列的檢測驗(yàn)證了PRPS2干擾及過表達(dá)載體構(gòu)建序列的正確性。隨后,我們將PRPS2干擾、過表達(dá)及空載對照組慢病毒載體分別感染GC1及GC2細(xì)胞株。在熒光顯微鏡下觀察,我們發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的感染效率較高(90%)。同時(shí),qRT-PCR及Wstern blot檢測均表明經(jīng)慢病毒感染后,PRPS2在GC1及GC2細(xì)胞中的表達(dá)成功被敲低及過表達(dá)。隨后,我們通過流式細(xì)胞儀檢測了細(xì)胞的凋亡率,結(jié)果表明PRPS2表達(dá)敲低后,GC1細(xì)胞的凋亡率為16.1%±3.0%,與對照組相比(2.8%±0.2%),差異明顯,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。而PRPS2過表達(dá)后,GC1細(xì)胞的凋亡率為0.6%±0.3%,與對照組相比(2.8%±0.2%),差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。同時(shí),PRPS2表達(dá)敲低后,GC2細(xì)胞的凋亡率為18.7%±1.9%,與對照組相比(4.0%±0.2%),差異明顯,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。而PRPS2過表達(dá)后,GC2細(xì)胞的凋亡率為1.9%±0.2%,與對照組相比(4.0%±0.2%),差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。同時(shí),我們通過流式細(xì)胞儀檢測了PRPS2表達(dá)對生精細(xì)胞生長周期的影響,結(jié)果表明PRPS2表達(dá)敲低后,GC1細(xì)胞的S期細(xì)胞的比例為28.05%±1.5%,與對照組相比(37.9%±3.6%),差異明顯,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P-=-0.012)。而PRPS2過表達(dá)后,S期細(xì)胞比例為49.6%±3.6%,與對照組相比,差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.016)。同樣,與對照組相比,在GC2細(xì)胞中,PRPS2表達(dá)敲低后S期細(xì)胞比例明顯降低(39.0%±1.7% VS 46.3%±0.2%),差異明顯,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.002),而PRPS2過表達(dá)后,S期細(xì)胞比例明顯增加(53.8%±2.5%),差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.034)。為了探討PRPS2表達(dá)對生精細(xì)胞增殖的影響,我們進(jìn)行了MTT實(shí)驗(yàn),連續(xù)觀察5天,結(jié)果表明：與對照組相比,PRPS2在GC1細(xì)胞中的表達(dá)敲低后,細(xì)胞的增殖能力明顯下降,而PRPS2過表達(dá)后,細(xì)胞的增殖能力明顯增強(qiáng),(P=0.000)。同樣,在GC2細(xì)胞中,PRPS2表達(dá)下調(diào)后,細(xì)胞的增殖能力明顯低于對照組,而PRPS2過表達(dá)后,細(xì)胞的增殖能力明顯高于對照組(P=0.000)。同時(shí),與對照組相比,PRPS2表達(dá)下調(diào)后,Ki-67在GC1及GC2細(xì)胞中的表達(dá)明顯減弱,而PRPS2表達(dá)上調(diào)后,Ki-67在GC1及GC2細(xì)胞中的表達(dá)明顯增強(qiáng)。3. PRPS2表達(dá)對皋丸精子發(fā)生過程的影響首先,為了明確內(nèi)源性PRPS2是否表達(dá)于正常的睪丸組織,我們通過qRT-PCR及Western blot檢測了PRPS2在小鼠出生后4W、6W、8W及10W睪丸組織中的表達(dá),結(jié)果顯示：隨著小鼠周齡的增加,PRPS2表達(dá)逐漸增加,提示PRPS2參與睪丸的正常發(fā)育過程。隨后,我們將PRPS2干擾片段慢病毒載體行活體內(nèi)小鼠睪丸注射,觀察1周后小鼠睪丸組織的形態(tài)學(xué)改變。結(jié)果表明PRPS2干擾片段慢病毒載體活體內(nèi)注射1周后,干擾組中PRPS2表達(dá)水平明顯低于空載對照組及空白對照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。PRPS2表達(dá)下調(diào)后,睪丸組織內(nèi)多數(shù)生精小管被破壞,生精小管內(nèi)各級生精細(xì)胞明顯減少,精子發(fā)生過程發(fā)生明顯異常,表達(dá)為明顯的生精功能不良。而在空載對照組中,僅看到極少部分生精小管被破壞,大多數(shù)生精小管未受影響,精子發(fā)生大致正常�？瞻讓φ战M未發(fā)現(xiàn)生精小管被破壞,精子發(fā)生正常。隨后,為了進(jìn)一步探討PRPS2表達(dá)與睪丸生精功能的關(guān)系,我們通過白消安構(gòu)建了生精功能低下的小鼠動物模型。免疫組化檢測了PRPS2在小鼠睪丸組織中的表達(dá),結(jié)果顯示PRPS2明顯高表達(dá)于精原細(xì)胞、精母細(xì)胞、支持細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞,而成熟精子中未見明顯陽性表達(dá),當(dāng)睪丸發(fā)生明顯生精功能低下后,PRPS2在生精小管中的表達(dá)也明顯下降,而其在間質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)無明顯變化。Western blot及qRT-PCR檢測結(jié)果也均顯示PRPS2在生精功能不良睪丸組織中的表達(dá)明顯下降。其次,為探討PRPS2表達(dá)對生精細(xì)胞凋亡的影響,我們通過TUNEL實(shí)驗(yàn)檢測了睪丸組織中PRPS2下調(diào)后生精細(xì)胞的凋亡情況。結(jié)果顯示：與空白對照組及空載組相比,干擾組中凋亡的生精細(xì)胞數(shù)量明顯增加。同時(shí),凋亡相關(guān)蛋白Caspase 3、Caspase 6及Caspase 9表達(dá)均明顯增強(qiáng)。最后,我們評估了PRPS2表達(dá)下調(diào)對生精細(xì)胞增殖能力的影響。結(jié)果顯示：Ki-67在空白對照組及空載組睪丸組織中均陽性表達(dá)于精原細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞,而在干擾組中Ki-67的表達(dá)明顯減弱,提示PRPS2表達(dá)下調(diào)后,生精細(xì)胞的增殖能力下降。4. PRPS2參與精子發(fā)生過程的機(jī)制研究為了尋找PRPS2參與調(diào)控的信號通路,我們將PRPS2敲低、過表達(dá)及空載對照組的GC1細(xì)胞株進(jìn)行高通量基因芯片分析,結(jié)果表明PRPS2敲低組與對照組相比,差異顯著(P0.05)的基因共有2543個,其中包括1571個基因出現(xiàn)明顯上調(diào),972個基因出現(xiàn)明顯下調(diào)。PRPS2過表達(dá)組與對照組相比,差異顯著(P0.05)的基因共有3131個,其中包括1582個基因出現(xiàn)明顯上調(diào),1549個基因出現(xiàn)明顯下調(diào)。PRPS2表達(dá)下調(diào)涉及的信號通路主要為細(xì)胞骨架、分化、細(xì)胞周期、細(xì)胞粘附、細(xì)胞連接及凋亡。PRPS2過表達(dá)所涉及的信號通路主要為細(xì)胞骨架、細(xì)胞周期、分化、凋亡、細(xì)胞粘附及細(xì)胞分裂。經(jīng)qRT-PCR驗(yàn)證,我們發(fā)現(xiàn)E2F1為PRPS2正向調(diào)控的下游潛在靶基因。PRPS2表達(dá)下調(diào)后E2F1mRNA表達(dá)明顯下降,而PRPS2過表達(dá)后E2F1mRNA表達(dá)明顯增加。為驗(yàn)證PRPS2是否在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控E2F1,我們構(gòu)建了E2F1的熒光素酶載體,分別轉(zhuǎn)染PRPS2過表達(dá)及空載對照組的GC1及GC2細(xì)胞。結(jié)果顯示：與對照組相比,PRPS2過表達(dá)的GC1(GC1/PRPS2)及GC2(GC2/PRPS2)細(xì)胞中E2F1的熒光素酶活性明顯增強(qiáng)(P0.05),提示PRPS2在轉(zhuǎn)錄水平可以直接調(diào)控E2F1的表達(dá),E2F1可能為PRPS2調(diào)控的靶基因。同時(shí),免疫熒光結(jié)果顯示PRPS2及E2F1均陽性表達(dá)于小鼠GC1及GC2細(xì)胞及生精功能正常的人睪丸組織,且都定位于細(xì)胞核及細(xì)胞漿,二者表達(dá)具有明顯的共定位。PRPS2敲低的GC1及GC2細(xì)胞中均發(fā)現(xiàn)E2F1的熒光強(qiáng)度減弱,而在PRPS2過表達(dá)的GC1及GC2細(xì)胞中均發(fā)現(xiàn)E2F1的熒光強(qiáng)度增強(qiáng),提示PRPS2表達(dá)正向調(diào)控E2F1表達(dá)。這些結(jié)果均一致表明PRPS2在蛋白水平也能正向調(diào)控E2F1表達(dá)。為驗(yàn)證PRPS2正向調(diào)控E2F1是否參與調(diào)控細(xì)胞的增殖及凋亡,我們構(gòu)建了外源性E2F1質(zhì)粒,并分別轉(zhuǎn)染了PRPS2敲低的GC1及GC2細(xì)胞株。結(jié)果顯示,與GC1/shPRPS2組相比,轉(zhuǎn)染了外源性E2F1質(zhì)粒的GC1/shPRPS2/E2F1組細(xì)胞凋亡率明顯減少(P0.05),而增殖能力明顯增強(qiáng)(P0.05)。同樣,與GC2/shPRPS2組相比,轉(zhuǎn)染了外源性E2F1質(zhì)粒的GC2/shPRPS2/E2F1組細(xì)胞凋亡率明顯減少(P0.05),而增殖能力也明顯增強(qiáng)(P0.05)。這些結(jié)果提示E2F1受PRPS2調(diào)控,并影響細(xì)胞的凋亡及增殖。為驗(yàn)證PRPS2參與的凋亡及增殖相關(guān)信號通路,我們采用Western blot實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了驗(yàn)證。結(jié)果顯示：PRPS2表達(dá)下調(diào)后,E2F1表達(dá)明顯下降,P53表達(dá)明顯增強(qiáng),同時(shí)Caspase 6及Caspase 9表達(dá)明顯增強(qiáng),而Bcl-2及Bcl-xl表達(dá)明顯下調(diào)。相反,PRPS2過表達(dá)后,E2F1表達(dá)明顯增加,P53表達(dá)明顯下調(diào),Caspase6及Caspase 9表達(dá)也明顯減少,而Bcl-2及Bcl-xl表達(dá)明顯上調(diào)。此外,我們也發(fā)現(xiàn)PRPS2表達(dá)下調(diào)激活了CDKN2A的表達(dá),而PRPS2過表達(dá)抑制了其表達(dá)。這些結(jié)果提示PRPS2參與細(xì)胞凋亡及增殖的機(jī)制與其對E2F1、P53、Bcl-2、 Bcl-xl、Caspase 6、Caspase 9及CDKN2A的調(diào)控相關(guān)。結(jié)論1.PRPS2表達(dá)與人睪丸組織學(xué)類型相關(guān),其表達(dá)的檢測有助于評估睪丸的生精功能。2.PRPS2參與正常的精子發(fā)生及睪丸發(fā)育過程,其表達(dá)下調(diào)與睪丸生精功能不良相關(guān)。3.PRPS2表達(dá)下調(diào)有助于生精細(xì)胞的凋亡,并抑制生精細(xì)胞的增殖,其作用機(jī)制與E2F1/P53/Bcl-2/Bcl-xl/Caspase 6/Caspase 9/CDKN2A信號通路相關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R698.2

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5 白文俊,侯樹坤,王曉峰,閆征,何培英,田世河,鄧慶平;腫瘤壞死因子受體在人精子的表達(dá)及其意義[J];中華泌尿外科雜志;2002年03期

6 劉偉軍;卵細(xì)胞漿內(nèi)精子注射中有關(guān)精子因素的研究進(jìn)展[J];南華大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2003年01期

7 王剛,劉子龍,胡艷群,熊忠明,肖慧珠,熊承良;不育油漆工精子連接段異常的超微病理檢查[J];中華男科學(xué);2003年04期

8 周鋒;精子成熟過程中膜改變的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(計(jì)劃生育分冊);2003年03期

9 李澤廷;桂耀庭;蔡志明;;精子發(fā)生中幾個關(guān)鍵基因的研究進(jìn)展[J];國際泌尿系統(tǒng)雜志;2006年02期

10 常勇杰;張曉春;于和鳴;;附睪分泌蛋白與精子成熟[J];國外醫(yī)學(xué)(計(jì)劃生育/生殖健康分冊);2006年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 桂耀庭;唐愛發(fā);余振東;張立兵;張鍵榮;李賢新;蔡志明;;精子發(fā)生相關(guān)基因的篩選和功能研究[A];中國生理學(xué)會2007年消化內(nèi)分泌生殖學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2007年

2 王暉;徐珉;李建民;肖俊華;許志洋;周作民;沙家豪;;人精子發(fā)生相關(guān)基因精子表達(dá)譜系的建立及初步臨床應(yīng)用[A];第九次全國生殖生物學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2003年

3 王暉;周作民;徐珉;李建民;沙家豪;;人精子中精子發(fā)生相關(guān)基因譜系的構(gòu)建及初步臨床應(yīng)用[A];江蘇省遺傳學(xué)會第七屆代表大會暨學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2006年

4 高永金;金保方;;精子DNA完整性損傷及其相關(guān)性研究進(jìn)展[A];2011·中國醫(yī)師協(xié)會中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)師大會論文集[C];2011年

5 高永金;金保方;;精子DNA完整性損傷及其相關(guān)性研究進(jìn)展[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會第十一屆男科學(xué)術(shù)大會論文集[C];2011年

6 張美佳;洪海燕;周波;金世英;王超;傅茂勇;王松波;夏國良;;心鈉肽在豬輸卵管中的表達(dá)以及其對精子功能的影響[A];第十屆全國生殖生物學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2005年

7 孫中明;;精子超微結(jié)構(gòu)與男性不育[A];浙江省中醫(yī)藥學(xué)會2005年男科中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合學(xué)術(shù)交流會資料匯編[C];2005年

8 賈孟春;;精子發(fā)生及其激素調(diào)節(jié)[A];第二屆全國不育癥研討會論文匯編[C];2007年

9 桂耀庭;唐愛發(fā);余振東;張立兵;張鍵榮;李賢新;蔡志明;;精子發(fā)生相關(guān)基因的篩選和功能研究[A];第一屆中華醫(yī)學(xué)會生殖醫(yī)學(xué)分會、中國動物學(xué)會生殖生物學(xué)分會聯(lián)合年會論文匯編[C];2007年

10 張立營;曾梅;孫華欽;陳樸;張思仲;馬用信;;小鼠T-STAR蛋白靶mRNAs的分離及鑒定[A];中國遺傳學(xué)會第八次代表大會暨學(xué)術(shù)討論會論文摘要匯編（2004-2008）[C];2008年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院上海市人類精子庫 杜宏偉　上海市男科學(xué)研究所 李錚;人體最激情的舞者——精子[N];東方早報(bào);2011年

2 記者 劉澤林;“準(zhǔn)精子”在猴類體外培育成功[N];健康報(bào);2013年

3 本報(bào)記者 董毅然;精子危機(jī)會讓人類斷子絕孫嗎[N];北京科技報(bào);2004年

4 河北農(nóng)大動科院 王立澤 王建濤 張國賓;給狐采精勿棄精清[N];河北科技報(bào);2007年

5 劉長亮;“附睪炎致不孕”內(nèi)幕揭秘[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2008年

6 汪文;做個準(zhǔn)爸爸，，你準(zhǔn)備好了嗎？[N];江蘇科技報(bào);2000年

7 段恩奎;人造精子用于臨床不能過于樂觀[N];科技日報(bào);2006年

8 劉遠(yuǎn)橋邋鄒爭春;為準(zhǔn)爸爸開具營養(yǎng)處方[N];科技日報(bào);2007年

9 潘文;對人工精子的臨床前景不能過于樂觀[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

10 黃力;準(zhǔn)爸爸要早做準(zhǔn)備[N];保健時(shí)報(bào);2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 侯聰聰;十足目甲殼動物頂體構(gòu)架體及精子發(fā)生相關(guān)蛋白功能研究[D];浙江大學(xué);2015年

2 張順;單精子胞質(zhì)內(nèi)注射轉(zhuǎn)基因法（ICSI-MGT）生產(chǎn)轉(zhuǎn)Fat-1基因兔的初步研究[D];廣西大學(xué);2013年

3 庫爾班·吐拉克;塔里木馬鹿（Cervus elaphus yarkandensis）精子體外獲能及其相關(guān)蛋白酪氨酸磷酸化研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

4 訾振振;Ccnyl1在精子發(fā)生過程中的功能研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2015年

5 祁琳;小鼠與人睪丸磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

6 湯克瓊;GDF9對牛卵泡和胚胎發(fā)育及精子發(fā)生的作用及其機(jī)制研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

7 孔娜娜;鈉肽受體2在精子趨化中的作用和機(jī)制[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

8 韋有衡;以小鼠為模型的睪丸特異表達(dá)激酶TSSK5的功能研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

9 王婧;硫化氫對精子發(fā)生及功能障礙的保護(hù)作用及機(jī)制的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2014年

10 劉慶;日糧n-6:n-3比和維生素E對公豬繁殖力的改善及其作用機(jī)理研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 田宇;低溫處理對豬精子泛素化水平及體外受精的影響[D];延邊大學(xué);2015年

2 楊向yN;冷凍技術(shù)對精子印記基因DNA甲基化及結(jié)構(gòu)影響的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

3 朱振東;褪黑色素對兔精子冷凍保存效果的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

4 陳鵬;小鼠精干細(xì)胞系和睪丸ECM體外3D培養(yǎng)體系的建立[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

5 范楚寧;半胱氨酸對獺兔精液冷凍保存效果的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

6 彭文培;冷凍保存對豬精子表觀遺傳相關(guān)基因表達(dá)的影響[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

7 查醒;MIR-183靶向TEX15調(diào)控精子發(fā)生[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

8 陳劍波;Spata46在小鼠生精中的表達(dá)其功能過程特征及研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

9 高陽;牛精子miR-202對早期胚胎發(fā)育影響的初步研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

10 范曉騰;白藜蘆醇對豬精子在常溫保存和冷打擊過程中的保護(hù)作用[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

本文編號：1577359