發(fā)布時間：2018-03-03 22:10

  本文選題：前列腺癌　切入點：啟動子　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的： 前列腺癌是男性泌尿生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一,歐美等發(fā)達國家是前列腺癌的高發(fā)區(qū),而我國發(fā)病率明顯低于上述地區(qū)。近年來隨著環(huán)境、飲食結(jié)構(gòu)、生活方式的改變等,我國前列腺癌的發(fā)病率也呈逐年上升趨勢,嚴重危害著廣大男性的健康。 腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是多種因素通過不同途徑激活原癌基因和(或)使抑癌基因失活,導(dǎo)致細胞的增殖和凋亡失去理性控制。DNA甲基化是目前表觀遺傳學(xué)的重要研究內(nèi)容,特別是CpG島甲基化異常所致的抑癌基因失活及癌基因激活。最近研究證明,前列腺癌中基因表型的改變,在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用,特別是抑癌基因DNA的甲基化致表達異常,成為研究重點。NDRG1基因是近年來發(fā)現(xiàn)的抑癌候選基因,NDRG1蛋白有去磷酸化作用,可以調(diào)節(jié)細胞內(nèi)信號蛋白分子酪氨酸的磷酸化水平,抑制細胞的增殖、分化和活性等。 雖然NDRG1基因?qū)δ[瘤的抑制功能已得到證實,但在前列腺癌中的作用機制仍不十分清楚,其表達的調(diào)控機制等也尚未完全明確。本研究通過檢測前列腺癌細胞系、人正常前列腺細胞、前列腺癌組織和良性前列腺增生組織中NDRG1基因啟動子的甲基化狀態(tài),并對前列腺癌細胞系進行去甲基化干預(yù)后,觀察腫瘤細胞增殖和凋亡情況及NDRG1基因mRNA的表達情況。探討NDRG1基因啟動子甲基化在前列腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用,為前列腺癌的診斷和治療提供新的依據(jù)和方向。 方法： 1.運用生物信息學(xué)及相關(guān)軟件,獲取NDRG1基因的5’上游序列,預(yù)測啟動子區(qū)域和CpG島位置,參照相關(guān)文獻設(shè)計引物。 2.應(yīng)用亞硫酸氫鹽測序法(bisulfite-sequeneing PCR, BSP)檢測4種前列腺癌細胞系(PC3、LNCaP、DU145和22RV1)和1種人正常前列腺細胞系RWPE-1、10例前列腺癌組織和10例良性前列腺增生組織中NDRG1基因啟動子的甲基化狀態(tài)并比較篩選出甲基化程度最高的細胞系。 3.運用不同濃度(5,10,15,20μmol/L)甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-氮雜胞苷(5-Aza-CdR)分別作用前列腺癌細胞(DU145)24,48,72小時,用RT-PCR法測定用藥前后DU145細胞中NDRG1基因mRNA表達水平的變化。 4.運用BSP法檢測用5-氮雜胞苷處理前后DU145中NDRG1啟動子甲基化狀態(tài)的差異,MTT法檢測其對細胞增殖能力的影響。 結(jié)果： 1.生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示,NDRG1啟動子區(qū)域位于-3720bp-7079bp,長度為3360bp; NDRG1基因啟動子序列存在四個CpG島,位于577bp-24455bp,1868bp。 2.根據(jù)BSP結(jié)果計算NDRG1啟動子甲基化率,4種前列腺癌細胞系的甲基化率分別為24.8%(PC3)、36.2%(22RV1)、48.6%(LNCaP)、69.5%(DU145),1種人正常前列腺細胞系的甲基化率4.8%(RWPE-1),10例前列腺癌組織的甲基化率為(48.6±5.3)%,10例良性前列腺增生組織的甲基化率為(4.3±2.1)%,兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。 3.前列腺癌細胞DU145經(jīng)10mol/L的5-Aza-CdR處理后,NDRG1基因啟動子的甲基化率由干預(yù)前的69.5%下降至11.4%,而NDRG1基因mRNA表達明顯增高,隨劑量的增加表達增強。 4.MTT實驗結(jié)果表明,5-氮雜胞苷能明顯抑制前列腺癌細胞DU145的增殖,并在一定范圍與藥物濃度及作用時間呈正相關(guān)。 結(jié)論： NDRG1基因啟動子區(qū)CpG島在前列腺癌細胞和組織中呈高甲基化狀態(tài),NDRG1基因啟動子的甲基化是其在前列腺癌中低表達的原因之一。甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑能顯著降低前列腺癌細胞NDRG1基因啟動子甲基化率并恢復(fù)其mRNA的表達。這些實驗結(jié)果表明NDRG1基因表達增加與前列腺癌惡性生物學(xué)行為相關(guān),是前列腺癌發(fā)生進展和不良預(yù)后的一個可供參考的預(yù)測指標。
[Abstract]:Objective:
Prostate cancer is one of the most common malignant tumor in male genitourinary system, Europe and other developed countries is prostate cancer incidence area of our country, and the incidence was significantly lower than that in the above regions. In recent years, along with the environment, diet, lifestyle changes, the incidence of prostate cancer in China has increased year by year, serious harm a large number of men's health.
The occurrence of tumor development is a variety of factors through different pathways of activation of oncogenes and (or) the inactivation of tumor suppressor genes, which lead to cell proliferation and apoptosis of the irrational control of.DNA methylation is an important epigenetic research content, especially the CpG island methylation caused by the inactivation of tumor suppressor genes and the activation of oncogene. Recent studies have shown that gene expression in prostate cancer, play an important role in the development of tumors, especially the expression caused by abnormal methylation of tumor suppressor gene DNA, become the focus of research of.NDRG1 gene is cancer candidate tumor suppressor gene discovered in recent years, NDRG1 protein dephosphorylation, can be adjusted intracellular signal protein tyrosine phosphorylation levels, inhibit cell proliferation, differentiation and activity.
Although the inhibitory function of NDRG1 gene on tumor has been confirmed, but the mechanism in prostate cancer is still unclear, its expression regulation mechanism is not yet clear. This study through the detection of prostate cancer cell lines and normal human prostate cells, the methylation status of NDRG1 in prostate cancer and benign prostatic hyperplasia gene the promoter, and the prostate cancer cell line by demethylation intervention, to observe the expression of tumor cell proliferation and apoptosis and NDRG1 gene of mRNA. To investigate the promoter methylation of NDRG1 gene in the progression of prostate cancer, and provide new directions for the diagnosis and treatment of prostate cancer.
Method錛，

本文編號：1562899